一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂及其用途
【专利摘要】本发明公开了一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂及其用途。杀线虫剂由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比组成，各组分以及含量用质量百分含量计为瑞香狼毒提取物含量为2-15%，硅藻土含量为85-98%。本发明对当归麻口病有显著的抑制作用，而且能明显地提高当归的产量，提升当归的品相、品质和药用价值，并对环境友好，无残留，可以在当归种植生产中推广应用，具有良好的经济和生态效益。
【专利说明】一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种能有效防治当归麻口病的植物源杀线虫剂及其用途。具体的讲，本发明涉及一种由瑞香狼毒为主要成分的植物源杀线虫剂，属于农药领域。
【背景技术】
[0002]当归是我国著名的中药材之一。在当归种植过程中，危害严重且最为常见的就是当归麻口病，主要表现为归根根部表皮呈黄褐色纵裂、毛根增多并畸化，严重时皮层组织呈干烂、糠腐状。先前有研究证实当归麻口病系线虫危害所致，其病原线虫为马铃薯腐烂茎线虫U)i tylenchus ofes true tor)。然而截止到目前,没有一种针对性强、作用效果明显且对环境友好的防治当归麻口病的生物源农药制剂，严重影响着当归药材的产量、品质和经济效益，也制约了当归种植产业发展。
[0003]瑞香狼毒(stellera chamaejasme L.)为瑞香科狼毒属多年生草本植物,广泛分布于我国东北、华北、西南及西北等地区的草地及高山向阳处，植物资源丰富，是我国北方草原上主要的有毒植物之一。研究结果表明，瑞香狼毒提取物对菜青虫、菜粉蝶幼虫、蚜虫等昆虫具有触杀活性(ZL专利号1714641A)，还可用作除螨剂、除菌剂等，但是关于瑞香狼毒提取物用于对当归麻口病防治研究却未见报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂的用途。
[0006]一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂，其特征在于杀线虫剂由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比组成，各组分以及含量用质量百分含量计为瑞香狼毒提取物含量为2-15%，硅藻土含量为85-98% ;依次按下列方法来制备:
A、将瑞香狼毒经过晾干、粉碎、过筛，用乙醇浸泡反复提取；提取液经过过滤、减压浓缩、干燥，制得瑞香狼毒提取物；
B、用水或乙醇水溶液将瑞香狼毒提取物助溶，再将硅藻土加入其中，通过搅拌、减压干燥，利用粉碎机粉碎，过45目筛，制得颗粒均匀的杀线虫剂。
[0007]在A步骤中，瑞香狼毒与乙醇的质量比为1:6-20。
[0008]在A步骤中，反复提取的次数为2至5次，每次提取时间为20至30小时。
[0009]本发明的防治当归麻口病的植物源杀线虫剂呈颗粒状，可以直接用于农业生产中。
[0010]我们对杀线虫剂进行了相关理化指标的测定，方法如下:
按国标GB/T 1605— 2001中5.3.3 “固体制剂采样”方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量不少于600 g。
[0011](1)松密度和堆密度检测将已知质量的样品放入玻璃量筒中，测量其体积，计算松密度。然后将量筒垂直提高25mm，落在橡胶垫上，重复100次后再测定样品的体积，计算堆密度。
[0012]按照以上方法测得，瑞香狼毒根提取物质量百分含量为10%制剂(以下简称10%制剂)的松密度为0.322 g/mL，堆密度为0.428 g/mL ;瑞香狼毒根提取物质量百分含量为5%制剂 (以下简称5%制齐Li)的松密度为0.300 g/mL,堆密度为0.401 g/mL ;瑞香狼毒根提取物质量百分含量为2%制剂(以下简称2%制剂)的松密度为0.293 g/mL,堆密度为0.389 g/
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[0013](2) pH 测定
pH值按照国标GB/T 1601进行。将I g样品溶于100 mL蒸馏水中，搅拌I min，用标定好的pH计测定。10%制剂pH值为6.04，5%制剂pH值为6.36，2%制剂pH值为6.48。
[0014](3)热贮稳定性试验
通过不加压热贮试验，使产品加速老化，预测常温贮存产品性能的变化。取20g试样放入广口瓶中，不加任何压力，加盖置玻璃瓶于烘箱中，在(54±2) °C下贮存14天。取出玻璃瓶，放入干燥器中，冷却至室温，在24 h内完成对产品有效成分的检测。
[0015]利用高效液相色谱法对产品有效成分的变化进行检测。
[0016]所用仪器和设备:Agilent-1200高效液相色谱仪；C18反相色谱柱(4.6mmX 250mm，5 μ m, C 18 Phecda填料)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
[0017]色谱条件为0-5 min, 15% 甲醇；5-10 min, 15-30% 甲醇；10-20 min, 30-45% 甲醇；20-40 min,45-65%甲醇；40-45 min，65-100%甲醇。该方法进行线性考察，对该检测方法进行线性考察(r>0.9993)，精密度(RSD=0.9%)、重复性(RSD=3.1%)、稳定性(RSD=L 0%)和回收率试验(回收率>96.0%, RSD=L 3%)。该检测方法稳定、重现性好。
[0018]试验样品处理方法:取待测样品I g，溶于30 mL甲醇中，超声提取45 min。取1.25 mL于1.5 mL离心管中，离心5 min，取上清液微孔滤膜(0.45 μπι)滤过，为待测液。对10%制剂、5%制剂和2%制剂均进行了试验，每个浓度抽取3个样本。通过将254 nm下，各个浓度下经过试验处理后样品中的6个含量较大的峰面积(保留时间分别为5.7，15.5，38.5，43.5，46.8，49.7 min)与该浓度下未经试验处理样品进行比较，结果表明峰面积变化率均在10%以内。充分说明该制剂可以长期保存，性质稳定，不易发生分解变化，便于贮存和运输。
[0019]本发明作为防治当归麻口病，其特征在于对当归麻口病有抑制作用，在当归移栽期及生长期过程中，施用于当归种植周围1-8 cm处土壤中，每株植物施药量在2-6 g。
[0020]本发明对当归麻口病有显著的抑制作用，而且能明显地提高当归的产量，提升当归的品相、品质和药用价值，并对环境友好，无残留，可以在当归种植生产中推广应用，具有良好的经济和生态效益。
[0021]制剂中组分具有的功效描述如下:
制剂中所用的硅藻土具有孔隙度大、吸收性强、化学性质稳定、耐磨、耐热等特点，容重轻，细度均匀，PH值中性无毒，混合均匀性好。利用硅藻土的丰富孔隙与强吸附性能用来作为农药载体，可以达到药剂均匀吸附与稀释分散的目的，使药效延长、毒性缓解、剂量容易掌控。此外硅藻土可成为高效肥料，促使农作物生长、改良土壤等方面作用。[0022]该植物源杀线虫剂中所用组分均来源于自然界，纯天然，易降解，低毒，无污染，对环境友好，能够符合药材种植的要求。
[0023]本发明提供的植物源杀线虫剂，原料易得，成本低廉，在不加入任何化学合成的高毒、高残留添加剂和辅料的情况下完成制备，工艺简单，易实现规模化生产，该颗粒制剂均匀、稳定，可直接施用。该产品高效、低毒、无残留。
[0024]本发明中提供的植物源杀线虫剂的制备方法中，利用乙醇制备瑞香狼毒提取物，因乙醇易于渗入植物组织，且溶解性较好，有效成分提取充分；制备过程中利用乙醇水溶液还具有价格低廉、易于回收、对人体毒性小等突出优点，适合于大规模制备。
[0025]除了对当归麻口病的防治效果，当归产量及外在品质进行了统计分析，通过高效液相色谱的方法对当归中主要药效成分进行了评价，并对当归样品的制剂残留情况进行了测定，方法如下:
1.当归内在药效成分评价
利用高效液相色谱建立了当归有效成分指纹图谱，对田间试验的各组当归内阿魏酸和藁本内酯的含量进行了检测，发现该制剂能有效提高当归中阿魏酸和藁本内酯的含量，提高了当归的药用价值。
[0026]根据《中国药典2010》规定，阿魏酸是考察当归内在品质的重要指标。而当归中藁本内酯的含量，也常被作为评价当归品质的重要参数。通过采用指纹图谱的方法，以阿魏酸和藁本内酯的含量为参数，对施药瑞香狼毒的当归试验组进行了综合品质评价。
[0027]分析方法:从每试验组中，取大小适中的当归样品阴干，粉碎，通过45目的筛子。取9克样品粉末，加入50%(v/v)甲醇/水溶液180 mL，超声提取45 min。将提取液离心15min,转速6000 rpm,取上清液,再以0.45 μ m膜过滤后,备用。
`[0028]Agilent 1200系列高效液相色谱仪；C18反相色谱柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m,C18 Sinochrom填料)；流动相A:0.5%(v/v)乙酸水溶液,流动相B:甲醇；梯度条件:0 minB 30%, 20 min B 70%, 70 min B 100% ;紫外检测波长为275 nm，参比波长为400 nm ;进样体积20 μ L ;流速0.6 mL/min ;柱温30°C;联苯为内标物。并对该方法进行线性考察(r>0.9995)，精密度(RSD=2.1%)、重复性(RSD=2.3%)、稳定性(RSD=0.6%)和回收率试验(回收率>98.5%，RSD=0.9%)。该方法稳定、精密度高、重现性好。每一组重复抽取3个样本。
[0029]2.当归样品中残留检测
2.1标准品的选择
为了提高检测灵敏度，选取制剂中最主要的3个成分的峰(狼毒色原酮、7-甲氧基狼毒素、狼毒素C保留时间分别为38.0、42.9和46.5 min的峰)为标准品。利用标准品单体绘制浓度曲线，确定最低检测线为1.0X10_6。
[0030]2.2条件筛选和优化
取待测当归阴干，粉碎，通过45目的筛子，备用。通过对当归样品的提取溶剂、提取量液比、提取时间及色谱条件进行优化，并对该方法进行线性考察(r>0.9996)，精密度(RSD=L 1%)、重复性(RSD=2.1%)、稳定性(RSD=0.4%)和回收率试验(回收率>98.0%，RSD=L 0%)。经证实，该检测方法稳定、重现性好，可以用于制剂的残留检测。样品处理方法为:取供试当归样品约0.1 g，精密称定，置于15 mL具塞试管中，精密加入10 mL甲醇，超声45 min后,取1.25 mL于1.5 mL离心管中，离心5 min,取上清液微孔滤膜(0.45 μ m)滤过，为待测液。
[0031]检测条件为:0-10min，43%甲醇；10_20min，43% -58% 甲醇。
[0032]田间试验样品测试结果表明，本发明所研制的杀线虫剂能够明显提高当归中药效成分阿魏酸和藁本内酯的含量，并在当归样品中无残留，安全、有效、可靠。
[0033]本发明研制了一种新型有效、绿色环保的植物源杀线虫剂，有效地降低当归麻口病的发病率和危害程度，提高当归的产量和品质，同时将瑞香狼毒变害为宝，为我国西部草原毒草灾害防控及草场生态恢复开辟一条积极的开发利用途径，对我国农业线虫病防治和畜牧业发展具有重要意义。
【具体实施方式】
[0034]实施例1
制备2%制剂，方法如下:
将瑞香狼毒根经过晾干、粉碎、过筛，用10倍质量的乙醇浸泡反复提取3次，每次24小时；提取液经过过滤、减压浓缩、干燥，制得瑞香狼毒提取物；
用水或乙醇水溶液将瑞香狼毒提取物助溶，再将硅藻土加入其中，通过搅拌、减压干燥，利用粉碎机粉碎，过45目筛，制得颗粒均匀的杀线虫剂。其中制剂中瑞香狼毒根提取物以及硅藻土配比组成，以质量百分含量计为瑞香狼毒根提取物含量为2%，硅藻土含量为98%。
[0035]在当归主要种植区甘肃省定西市岷县秦许乡随机选择连续的6垄地进行了当归种植田间试验。每垄地均长8m，依次分别为对照组(CK)、2%制剂施药组。在当归移栽期，将制剂3 g均匀撒在当归苗的根周围3 cm处。
[0036]外观评价标准:
麻口病分级:病害面积小于1/3为一级；1/3和2/3之间为二级；大于2/3为三级。
[0037]品质标准:大于100g为一级；50g到100g之间为二级；50g以下为三级。
[0038]叶斑病分级:病害面积小于1/3为一级；1/3和2/3之间为二级；大于2/3为三级。
[0039]产量、当归麻口病防治结果及品质评价结果见下表:
【权利要求】
1.一种防治当归麻口病的植物源杀线虫剂，其特征在于杀线虫剂由瑞香狼毒提取物以及硅藻土配比组成，各组分以及含量用质量百分含量计为瑞香狼毒提取物含量为2-15%，硅藻土含量为85-98% ;依次按下列方法来制备: A、将瑞香狼毒经过晾干、粉碎、过筛，用乙醇浸泡反复提取；提取液经过过滤、减压浓缩、干燥，制得瑞香狼毒提取物； B、用水或乙醇水溶液将瑞香狼毒提取物助溶，再将硅藻土加入其中，通过搅拌、减压干燥，利用粉碎机粉碎，过45目筛，制得颗粒均匀的杀线虫剂。
2.在A步骤中，瑞香狼毒与乙醇的质量比为1:6-20。
3.如权利要求1所述的防治当归麻口病的植物源杀线虫剂，其特征在于A步骤中，瑞香狼毒与乙醇的质量比为1:6-20。
4.如权利要求1所述的防治当归麻口病的植物源杀线虫剂，其特征在于A步骤中，反复提取的次数为2至5次，每次提取时间为20至30小时。
5.—种如权利要求1所述的杀线虫剂作为防治当归麻口病，其特征在于对当归麻口病有抑制作用，在当归移栽期及生长期过程中，施用于当归种植周围1-8 cm处土壤中，每株植物施药量在2-6 g。`
【文档编号】A01N65/08GK103766410SQ201210413564
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2012年10月26日 优先权日:2012年10月26日
【发明者】秦波, 刘权, 燕志强, 金辉 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所