专利名称：维生素a临界缺乏家禽动物模型的构建方法
维生素A临界缺乏家禽动物模型的构建方法
Construction of model poultry with marginal vitamin A deficiency技术领域
本发明属于动物营养相关科研、兽医临床评价和实验动物学领域，涉及营养缺乏症动物模型的构建方法，尤其是涉及一种家禽维生素A临界缺乏动物模型的构建方法。
背景技术：
近年来，随着家禽营养与免疫学的发展，维生素A的营养免疫调节作用日益受到人们重视。维生素A通过其在动物体内的代谢产物视黄酸，在家禽的呼吸道黏膜、消化道黏膜、体液免疫以及细胞免疫等方面均有重要的调节作用。然而，在研究在维生素A的营养免疫调节及其作用机制方面的研究中，构建家禽维生素A临界缺乏的动物模型成为瓶颈环节。目前虽然已有通过饲喂缺乏维生素A的纯化日粮构建动物模型的报道，但其技术手段还主要存在以下问题:①由于家禽肝脏储存有比较多的维生素A，往往需要饲喂很长一段时间的缺乏维生素A的纯化日粮，才能表现出维生素A临界缺乏。②由于构建时间较长，而家禽生长周期短(例如商品肉鸡仅需40天左右出栏)，进行早期的试验(如1-2周龄)难以实现。③由于鸡对普通维生素A的吸收、转运等环节变异很大，往往同样处理的群体内不同个体维生素A的营养水平参差不齐。④直接采用缺乏维生素A的纯化日粮构建模型，容易引起动物维生素A重度缺乏而丧失食欲，进而引起蛋白-能量营养失调导致死亡。发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种构建维生素A临界缺乏的I日龄雏禽动物模型。通过本方法构建的维生素A临界缺乏动物模型，具有群体内整齐度高，性能稳定等特点，可满足兽医临床维生素A补充剂的疗效评价、维生素A营养免疫调节及其机制的科学研究、实验动物学其他相关研究等的需要。
为了解决背景技术所存在的问题，本发明采用以下技术方案: 配制缺乏维生素A的纯化日粮，包括以下重量份数比的原料:酪蛋白15.0-25.0，DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0，蔗糖40.0-60.0，纤维素4.0-6.0，玉米油4.0-6.0，微量元素预混料3.5，维生素 预混料1.0。其中，微量元素预混料按美国NRC推荐公布的家禽营养标准配制，维生素预混料除不含维生素A外，其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。另外配制维生素A微乳溶液，包括以下重量份数比的原料:维生素A油(含量1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-15.0，Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0，BHT 0.3，焦亚硫酸钠0.3，纯化水60-70份。通过维生素A溶液饮水可以灵活调整家禽维生素A摄入量。选择18-25周龄的父母代种禽，饲喂缺乏维生素A的纯化日粮，每间隔I周翅静脉采血测定血清维生素A含量。待种禽血清维生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通过饮水调整其摄入维生素A水平稳定在600IU/kg日粮。在此范围内，不影响其产蛋率和孵化率，种蛋孵出的雏禽即达到维生素A的临界缺乏状态，而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。出壳雏禽饲喂缺乏维生素A的纯化日龄，配合维生素A微乳溶液饮水，调整其摄入维生素A日粮水平为300IU/kg，即可维持雏禽的维生素A临界缺乏状态。
优选地，配制缺乏维生素A的纯化日粮，包括以下重量份数比的原料:酪蛋白18.0-22.0, DL-蛋氨酸 1.7-4.2，玉米淀粉 12.0-16.0，蔗糖 42.0-55.0,纤维素 4.5-5.5，玉米油4.5-5.5，微量元素预混料3.5，维生素预混料1.0。其中，微量元素预混料按美国NRC推荐公布的家禽营养标准配制，维生素预混料除不含维生素A外，其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。另外配制维生素A微乳溶液，包括以下重量份数比的原料:维生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-12.0, Span60 12.0-15.0, Tween80 8.0-10.0,BHT 0.3，焦亚硫酸钠0.3，纯化水60-65份。选择19-22周龄的父母代种禽，饲喂缺乏维生素A的纯化日粮，每间隔I周翅静脉采血测定血清维生素A含量。待种禽血清维生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通过饮水调整其摄入维生素A水平稳定在600IU/kg日粮。在此范围内，不影响其产蛋率和孵化率，种蛋孵出的雏禽即达到维生素A的临界缺乏状态，而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。出壳雏禽饲喂缺乏维生素A的纯化日龄，配合维生素A微乳饮水剂，调整其摄入维生素A日粮水平为120IU/kg，即可维持雏禽的维生素A临界缺乏状态。
进一步优选地，配制缺乏维生素A的纯化日粮，包括以下重量份数比的原料:酪蛋白 19.0-20.0，DL-蛋氨酸 1.9-4.0，玉米淀粉 14.0-15.0，蔗糖 44.0-52.0，纤维素 4.7-5.2，玉米油4.7-5.2，微量元素预混料3.5，维生素预混料1.0。其中，微量元素预混料按美国NRC推荐公布的家禽营养标准配制，维生素预混料除不含维生素A外，其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。另外配制维生素A微乳溶液，包括以下重量份数比的原料:维生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-11.0，Span60 12.0-14.0, Tween80 9.0-10.0，BHT 0.3，焦亚硫酸钠0.3，纯化水62-65份。选择20-22周龄的父母代种禽，饲喂缺乏维生素A的纯化日粮，每间隔I周翅静脉采血测定血清维生素A含量。待种禽血清维生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通过饮水调整其摄入维生素A水平稳定在600IU/kg日粮。在此范围内，不影响其产蛋率和孵化率，种蛋孵出的雏禽即达到维生素A的临界缺乏状态，而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。出壳雏禽饲喂缺乏维生素A的纯化日龄，配合维生素A微乳饮水，调整其摄入维生素A日粮水平为120IU/kg，即可维持雏禽的维生素A临界缺乏状态。
所述的家禽为蛋鸡、肉鸡、肉鸭、鹅以及鹌鹑等。
与现有技术相比，本发明公开的家禽维生素A临界缺乏动物模型的构建方法具有如下优点和显著进步:①可以得到I日龄雏禽维生素A临界缺乏模型，便于进行早期的试验研究。②通过本方法构建的动物模型，群体内整齐度高。③通过本方法构建的动物模型，既具有维生素A临界缺乏的特点，又具有足够的抗逆能力。④本方法配制缺乏维生素A的纯化日粮，通过饮水调整维生素A的摄入水平，与直接配制低含量维生素A的纯化日粮相比较，更加方便灵活，并且可以避免日粮配制后由于维生素A降解而导致的建模不确定性。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例一:肉仔鸡维生素A临界缺乏动物模型的构建 配制缺乏维生素A的纯化日粮，包括以下重量份数比的原料:酪蛋白20.0, DL-蛋氨酸3.0，玉米淀粉15.0，蔗糖50.0，纤维素5.0，玉米油5.0，微量元素预混料3.5，维生素预混料1.0。其中，微量元素预混料按美国NRC推荐公布的家禽营养标准配制，维生素预混料除不含维生素A外，其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。另外配制维生素A微乳溶液，包括以下重量份数比的原料:维生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇10.0，Span6012.0, Tween80 10.0, BHT 0.3，焦亚硫酸钠0.3，纯化水62份。选择20周龄的罗斯308父母代种鸡，饲喂缺乏维生素A的纯化日粮，每间隔I周翅静脉采血测定血清维生素A含量。经过12周的饲喂试验，种鸡血清维生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L的范围后，通过维生素A微乳制剂饮水调整其摄入维生素A水平稳定在600IU/kg日粮。在此范围内，不影响其产蛋率和孵化率，种蛋孵出的雏禽即达到维生素A的临界缺乏状态，而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。
由上述实验的种鸡生产的受精种蛋，按常规孵化程序孵化，出壳雏鸡的血清VA介于0.35-0.70 μ mol/L,符 合VA临界缺乏动物模型的要求。
实施例二:肉仔鸡维生素A临界缺乏动物模型的验证与应用 为了进一步验证本发明所构建的肉仔鸡维生素A临界缺乏模型，设计如下实验。
1.材料与方法 1.1试验动物选取由实施实例I所得到的I日龄罗斯308出壳雏鸡120羽，随机分为3组，每组40羽:I组为临界缺乏组，饲喂纯化饲料，并通过维生素A纳米微乳饮水调整日粮VA水平为300IU/kg ；II组为空白组，只饲喂纯化日粮组，不补充维生素A ;III组为阳性对照，饲喂纯化日粮，并通过维生素A纳米微乳饮水调整日粮VA水平为12000IU/kg ;另取罗斯308普通种蛋孵化的雏鸡40羽作为阴性对照(IV组)，只饲喂纯化日粮。
1.2试验方法各组动物单笼饲养，自由采食，自由饮水。通过饮水补充维生素的实验组，维生素加入到适量饮水中，于2-3小时内饮用完毕。饲养过程中各日龄温湿度控制按罗斯308种禽公司推荐的程序。
1.3样品采集与指标测定分别于I日龄、7日龄每组随机取10羽断头取血，分别于14日龄、21日龄、28日龄、35日龄、42日龄每组随机取10羽翅静脉采血。采集的血液样品分离血清，通过高效液相色谱法测定维生素A浓度。
2.试验结果 2.1 一般健康状况 试验I组的动物至试验结束时有2只死亡，剖检表现出肾脏苍白，爪、喙无光泽等典型的VA临界缺乏症状。存活的鸡只也表现出羽毛松乱、生长迟缓等，符合家禽VA临界缺乏的症状表现。
试验II组的试验动物由于饲料中缺乏VA，于第3周开始出现较多死亡，第4周大部分死亡，表现出典型的VA缺乏症状。
试验III组由于通过饮水补充了高水平的VA，健康状况及生长良好，试验期内仅仅发生I例死亡。
试验IV组于第2周开始出现零星死亡，第5周大部分死亡。死亡的动物剖检表现出典型的VA缺乏症状。
2.2血清VA含量 试验期内各试验组动物血清VA含量的变化如图1所示。
:图1是试验期内各实验组动物血清VA含量变化趋势图。
由图1可见，I组动物血清VA含量介于0.50 μ mol/L-0.68 μ mol/L之间，一直保持在相对稳定的水平，并且群体内VA含量水平变异很小，符合家禽VA临界缺乏动物模型的有关要求。
II组动物血清VA含量下降很快，第2周即降至临界缺乏水平(0.35 μ mol/L)之下，群体内不同动物个体间血清VA水平变异较小。说明本方法建立的动物模型可用于VA缺乏症的相关研究。
III组动物血清VA水平逐渐升高，群体内不同动物个体间血清VA水平变异较小，说明本方法建立的动物模型可以对饮食补充的VA做出良好的响应。
IV组动物血清VA含量I日龄时处于较高水平，之后迅速降低，群体内不同个体血清VA水平变异较大，建立模型过程中伴随大量死亡。
3.实验结论 通过本方法建立的家禽VA临界缺乏动物模型，血清VA水平稳定，含量范围符合VA临界缺乏的有关指标要求。模型动物健康状况可满足一般试验的要求，建立的动物模型对补充的VA具有良好的响应，有效解决 的目前动物模型构建中所存在的问题。
权利要求
1.一种维生素A临界缺乏家禽动物模型的构建方法，其特征在于:以缺乏维生素A的纯化日粮饲喂产蛋期的种禽降低其血清VA水平至0.60-0.85ymol/L，并通过维生素A溶液饮水使其保持在此水平，所生产的种蛋经孵化得到I日龄的VA临界缺乏家禽动物模型。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缺乏维生素A的纯化日粮包括以下重量份数比的原料:酪蛋白15.0-25.0, DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0,蔗糖40.0-60.0,纤维素4.0-6.0,玉米油4.0-6.0,微量元素预混料3.5，维生素预混料1.0 ;所述维生素A溶液包括以下重量份数比的原料:维生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇 10.0-15.0, Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0, BHT 0.3，焦亚硫酸钠 0.3，纯化水60-70 份。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，配制纯化日粮所用的微量元素预混料按美国NRC推荐的家禽营养标准配制，维生素预混料除不含维生素A外，其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，为保持种禽血清维生素A的水平稳定以及动物模型具有足够健康的体质，通过饮水补充维生素A溶液的剂量，以日粮浓度重量比例计算分别为600IU/kg (种禽)和 300IU/kg (雏鸡)。
5.如权利要求1所述家禽动物模型，其特征在于，所述的家禽为蛋鸡、肉鸡、肉鸭、鹅以及鹌鹑等。
全文摘要
本发明涉及一种维生素A临界缺乏家禽动物模型的构建方法，以缺乏维生素A的纯化日粮饲喂产蛋期的种禽，降低其血清VA水平至0.60-0.85μmol/L，并通过维生素A溶液饮水使其保持在此水平，所生产的种蛋经孵化得到1日龄的维生素A临界缺乏的家禽动物模型。应用本方法所建立的动物模型既具有维生素A临界缺乏的特征，又具有足够强壮的体质存活至5周龄以上，并且具有群体内整齐度高、性能稳定，方便于商业化制备的特点。
文档编号A23K1/16GK103141433SQ20131007319
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月7日 优先权日2013年3月7日
发明者刘宗柱, 刘文华, 李学民, 张金玲 申请人:青岛农业大学