微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法

微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法
【专利摘要】本发明提供一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，将多只实验用大鼠标号并随机且平均分为A组、B组、C组和D组，每组大鼠分为相同数量的假手术组和实验组，且假手术组大鼠数量、实验组大鼠数量至少为6只；每只大鼠均依次进行造模操作和硬组织切片制作；最后比对假手术组大鼠的肩关节标本切片以及实验组大鼠的肩关节标本切片，以建立大鼠慢性肩袖损伤模型。本申请对大鼠植入所述植入物时为微创手术，故对大鼠的创伤非常小，从而减少对大鼠肩关节生理构造的影响；同时，该方法操作简单，难度小，且大鼠不易感染，故大鼠的存活率非常高，且植入物植入后与大鼠肩峰之间不会发生相互移位，进而保证动物肩袖损伤模型的成功率。
【专利说明】微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及大鼠肩峰撞击征模型研究领域，特别是涉及一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法。
【背景技术】
[0002]肩袖损伤在老年人和运动员中发病率较高，是临床导致肩关节疼痛和运动障碍的最主要原因之一，肩部疼痛现已成为继慢性头痛和慢性下腰痛之后的第三大疼痛，且呈显著上升趋势，但是造成肩袖损伤的原因以及治疗策略目前还有争议，也是近年研究的热点问题。Neer认为95%的肩袖损伤是由肩峰撞击综合征引起的，肩峰撞击综合征是指任何原因造成的肩峰下间隙变窄的情况，肩袖应在一个宽松而平滑的空间内进行收缩和活动，若此空间变得狭窄则会导致肩袖的磨损和断裂，造成疼痛和肩关节活动受限。但是，肩峰撞击征与肩袖损伤的关系、以及如何促进损伤肩袖的强度恢复，目前还存在较大的争议，其也是近期研究的热点问题。临床发现大部分肩袖损伤发生于没有外伤史的老年人，且多为冈上肌腱关节面的部分断裂]，但是目前的动物模型都不能很好模拟这种慢性肩袖损伤。所以，非常有必要建立一种为慢性肩袖损伤以及肩峰撞击征的研究提供组织学观察的动物模型。
[0003]在既往的文献报道中，用于研究肩袖损伤的动物模型主要有羊、犬、兔和大鼠。羊和犬的生长发育周期长，饲养和管理成本较高，故羊和犬不适合应用于大样本量的实验研究。另外，兔的体型相对较大，故有利于手术操作，所以常应用于肩袖的急性损伤以及手术修复等方面的研究，但是急性创伤性肩袖损伤仅占有症状肩袖损伤的8%，临床中大部分肩袖损伤属于慢性损伤，但是兔子单价贵，饲养管理的成本也较高，故其性价比相对于肩袖损伤模型的建立比较低。而大鼠的肩袖结构发达，特别是其R下肌的腱性部分很长，并穿过锁骨、肩峰和连接这些骨性结构的韧带共同形成的拱形结构，与人类十分相似。因此，价格低、繁殖快、便于饲养和管理的大鼠，更适合用于建立慢性肩袖损伤的动物模型。
[0004]现有的肩峰撞击综合征动物模型主要是Schneeberger AG等学者于1998年发表的肩胛网自体骨片移植大鼠模型，其原理是从对侧肩胛网取骨片，穿孔并结扎固定于肩峰下，与大鼠R下肌摩擦。但是，这种模型建立方法及动物模型主要存在以下不足之处:
[0005]1、植入骨片的过程中要求剥离大鼠的三角肌起点，打开肩关节，故对大鼠的创伤非常大，从而对肩关节生理构造的影响大，恢复期较长；
[0006]2、造模手术需要显微操作，需要双侧手术，难度大，时间长，易感染，且感染率高达3.6% ；
[0007]3、植入骨片容易移位，远期造模失败率高，且失败率高达46.4% ；
[0008]4、所移植骨片的厚度难以精确定量；
[0009]5、其模拟出的是临床中比较少见的肌腱滑囊面撕裂和全层断裂，而不是模拟出肌腱内部和肌腱关节面撕裂，故不能很好的满足慢性肩袖损伤的研究。

【发明内容】
[0010]鉴于以上所述现有技术的缺陷和各种不足之处，本发明要解决的技术问题在于提供一种对大鼠创伤小、对肩关节结构功能影响小、造模成功率高的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法。
[0011]为实现上述目的，本发明提供一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，将多只实验用大鼠标号并随机且平均分为A组、B组、C组和D组，每组大鼠分为相同数量的假手术组和实验组，且假手术组大鼠数量、实验组大鼠数量至少为6只；每只大鼠均依次进行造模操作和硬组织切片制作；
[0012]所述造模操作依次包括以下步骤:
[0013]1)、对大鼠进行腹腔注射麻醉剂；
[0014]2)、对大鼠备皮消毒后摸到大鼠肩峰，拉起大鼠肩峰处的皮肤并剪一切口 ；[0015]3)、紧贴大鼠肩峰内侧刺入一植入物，所述植入物包括构成一体结构的植入部和穿刺部，所述植入部包括平行设置的上作用片和下作用片、以及用于连接上作用片和下作用片的连接片，所述上作用片、连接片、下作用片形成一钩槽，所述穿刺部从下作用片的端部向外延伸；
[0016]4)、所述穿刺部刺入大鼠肩峰，且穿刺部紧贴大鼠肩峰的下表面行进、并贴着大鼠三角肌的后缘从大鼠肩峰外侧刺出，以将大鼠肩峰夹持在植入物的上作用片和下作用片之间；
[0017]5)、将植入部和大鼠肩峰固定，之后将穿刺部剪去；
[0018]6)、假手术组大鼠在置入植入物后即刻取出植入部，实验组大鼠在置入植入物后不取出植入部；
[0019]所述硬组织切片制作依次包括以下步骤:
[0020]7)、分别在进行造模操作后的2周、4周、6周、8周处死A组、B组、C组、D组大鼠，获取被处死大鼠的双侧肩关节标本、并切割肩关节标本，且肩关节标本的底面与大鼠网下肌腱走形方向平行；
[0021]8)、对每个大鼠的肩关节标本都依次进行固定操作、包埋操作、以及切片和磨片操作；
[0022]所述固定操作为:将肩关节标本置于10%的甲醛水溶液中固定7天；
[0023]所述包埋操作为:将肩关节标本依次放置在的乙醇中进行各24h的梯度脱水，再将肩关节标本浸泡在浸塑液中30天；之后肩关节标本置于一包埋瓶中，并滴入聚甲基丙烯酸甲酯，拧紧包埋瓶的瓶盖，且对包埋瓶进行与大鼠标号一一对应的标记；将包埋瓶放置在60°C的水浴中聚合48h，所述聚甲基丙烯酸甲酯凝固成包埋块；
[0024]所述切片和磨片操作为:取出包埋块，磨出组织面，并沿垂直于包埋块的长轴方向切片，之后将切片粘结于树脂载片上；研磨切片，直至切片厚度为40-60 μ m ;对切片进行抛光；之后清洗切片，并将切片自然晾干；
[0025]9)、比对假手术组大鼠的肩关节标本切片以及实验组大鼠的肩关节标本切片。
[0026]进一步地，所述切片和磨片操作完成后，还需对切片进行VG染色操作，所述VG染色操作依次包括以下步骤:
[0027]81)、将切片放置在0.1 %的甲酸中浸泡3min后水洗；
[0028]82)、将切片放置在20%的甲醇中浸泡2h后水洗3min ；[0029]83)、将切片放置在60°C的水浴亚甲基蓝中浸泡5min后，60°C水洗3min ；
[0030]84)、将切片放置在苦味酸和品红的混合溶液中浸泡15min ；
[0031]85)、将切片用无水乙醇洗，并自然晾干。
[0032]进一步地，所述上作用片上设有第一凹槽，下作用片上设有第二凹槽，所述第一凹槽和第二凹槽分别位于植入物的两侧；所述步骤5)中，植入部和大鼠肩峰通过蚕丝线固定，所述蚕丝线卡在第一凹槽和第二凹槽中。
[0033]优选地，所述穿刺部的端部为一尖头，且穿刺部的端部设有一延伸至所述尖头的倾斜面。
[0034]进一步地,所述步骤7)中，切割后的肩关节标本的大小为15_X 15_X 15_。
[0035]优选地，所述植入物的材料为聚醚醚酮。
[0036]优选地，所述步骤6)完成后，还对大鼠进行腹腔注射抗生素。[0037]进一步地，在进行步骤4)时，将大鼠放置在一固定装置上，所述固定装置包括底板、固定在底板中间的三棱柱支架、以及四根均匀分布在三棱柱支架四周的绑柱，所述绑柱底部与底板固定连接，所述三棱柱包括底面、以及对称设置的第一斜面和第二斜面，所述大鼠侧放在第一斜面或第二斜面上，且大鼠的四肢通过绑带捆绑在绑柱上。
[0038]优选地，所述步骤7)中，在切割肩关节标本前，先在大鼠冈下肌的肌腹中点处、以及在大鼠肩峰处均插入大头针，再以两个大头针之间的连线作为切割标记来切割所获取的肩关节标本。
[0039]本发明涉及的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法具有以下有益效果:
[0040]本申请对大鼠植入所述植入物时为微创手术，故对大鼠的创伤非常小，从而减少对大鼠肩关节生理构造的影响，保证大鼠肩关节构造在短期内能够顺利恢复；同时，该方法操作简单，难度小，且大鼠不易感染，故大鼠的存活率非常高，且植入物植入后与大鼠肩峰之间不会发生相互移位，进而保证动物肩袖损伤模型的成功率。
[0041]上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图对本专利进行详细说明。
【专利附图】

【附图说明】
[0042]图1为本发明的流程图。
[0043]图2为本发明中植入物的结构示意图。
[0044]图3为图2的主视图。
[0045]图4为本发明中植入物植入大鼠肩峰时的结构示意图。
[0046]图5为本发明中植入物植入大鼠肩峰后的结构示意图。
[0047]图6为本发明中固定装置的结构示意图。
[0048]图7为本发明中大鼠与固定装置的连接示意图。
[0049]元件标号说明
[0050]I植入物
[0051]11植入部
[0052]111上作用片[0053]112下作用片
[0054]113连接片
[0055]114钩槽
[0056]115第一凹槽
[0057]116第二凹槽
[0058]12穿刺部
[0059]121倾斜面
[0060]2蚕丝线
[0061]3固定装置
[0062]31底板
[0063]32三棱柱支架
[0064]321底面
[0065]322第一斜面
[0066]323第二斜面
[0067]33绑柱
【具体实施方式】
[0068]下面结合附图对本发明的优选实施例进行详细介绍。
[0069]本发明提供一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，如图1所示，该方法包括如下步骤:将多只实验用大鼠标号并随机且平均分为A组、B组、C组和D组，每组大鼠分为相同数量的假手术组和实验组，且假手术组大鼠数量、实验组大鼠数量至少为6只；每只大鼠均依次进行造模操作和硬组织切片制作。本实施例中，实验用大鼠由动物实验中心提供，每只大鼠的体重为277.25 ±22.03g，大鼠一共为48只，随机分为A组、B组、C组和D组后，故每组中有12只大鼠，且每组中随机选取6只大鼠为假手术组大鼠，剩下的6只大鼠为实验组大鼠，并分别对每组的大鼠进行标号。如A组的12只大鼠可分别标为Al、A2、…、A12，标号Al至A6为假手术组大鼠，标号A7至A12为实验组大鼠；同理，B组、C组、D组的12只大鼠也这样分类；当然，根据每个实验者习惯的不同，对每组大鼠的标号也可采用其他方式。
[0070]本申请中，所述造模操作依次包括以下步骤:
[0071]1)、大鼠称中，并对大鼠进行腹腔注射麻醉剂，所述麻醉剂为10%水合氯醛，
0.3ml/100g；
[0072]2)、对大鼠备皮消毒后摸到大鼠肩峰，拉起大鼠肩峰处的皮肤并剪一大小约为
2.5cm的切口，由于大鼠的肩峰有2个，在具体操作过程中，随机抽取大鼠2个肩峰中的一个；
[0073]3)、紧贴大鼠肩峰内侧刺入一植入物1，如图2和图3所示，所述植入物I包括构成一体结构的植入部11和穿刺部12，所述植入部11包括平行设置的上作用片111和下作用片112、以及用于连接上作用片111和下作用片112的连接片113，所述上作用片111、连接片113、下作用片112形成一钩槽114，所述穿刺部12从下作用片112的端部向外延伸；
[0074]4)、所述穿刺部12刺入大鼠肩峰，且穿刺部12紧贴大鼠肩峰的下表面行进、并贴着大鼠三角肌的后缘从大鼠肩峰外侧刺出，以将大鼠肩峰夹持在植入物I的上作用片111和下作用片112之间，如图4所示；
[0075]5)、将植入部11和大鼠肩峰固定，之后将穿刺部12剪去，如图5所示；
[0076]6)、假手术组大鼠在置入植入物I后即刻取出植入部11，作为假手术对照，实验组大鼠在置入植入物I后不取出植入部11。
[0077]该造模操作过程中，将植入物I植入大鼠肩峰的过程中，是将植入物I的穿刺部12刺入的，故其为一微创操作，其未将大鼠的三角肌剥离，大大减少对大鼠的创伤，从而大大降低对大鼠肩关节生理构造的影响，缩短大鼠的恢复期。另外，该造模操作简单易操作，且操作过后大鼠不易感染；同时，植入物I的植入部11和大鼠肩峰固定，故两者之间不会发生相对移动，从而提供造模的成功率。
[0078]优选地，所述步骤6)完成后，还对大鼠进行腹腔注射抗生素，所述抗生素为硫酸卡那霉素，0.75mg/100g,以进一步防止大鼠在穿刺后发生感染，提高大鼠的抗感染能力。
[0079]本实施例中，如图3所示，所述钩槽114的高度为1_，所述穿刺部12和下作用片112的总长为40mm,所述上作用片111的长度为4mm,该植入物I的厚度为0.5mm。另外,所述穿刺部12的端部为一尖头，且穿刺部12的端部设有一延伸至所述尖头的倾斜面121，以便于穿刺部12刺入大鼠肩峰的内侧、并从大鼠肩峰的外侧刺出。所述上作用片111上设有第一凹槽115，下作用片112上设有第二凹槽116，所述第一凹槽115和第二凹槽116分别位于植入物I的两侧；所述步骤5)中，植入部11和大鼠肩峰通过四号蚕丝线28字打结固定，所述蚕丝线2卡在第一凹槽115和第二凹槽116中。
[0080]进一步地，在造模操作前，应先对植入物I的进行设计和制造，所述植入物I的设计和制造依次包括以下步骤:
[0081]a、根据植入物I的结构和尺寸，在Pro/E软件中完成植入物I的三维设计，同时将植入物I的三维设计图以STL的标准格式进行保存；
[0082]b、将植入物I的三维设计图导入到Geomagic Studioll.0软件中对植入物I做进一步处理，如进行光滑、松弛等处理；
[0083]C、将处理好的STL模型导入到Magics9.55软件中加植入物I的底部支撑；
[0084]d、利用EOSINT P800型的3D打印机将植入物I模型制作出来。
[0085]优选地，所述植入物I的材料为聚醚醚酮，聚醚醚酮PEEK材料是一种强度高、耐磨性好、加工性能优异的全芳香族半结晶热塑性特种工程塑料，通过细胞体外培养、动物体内植入等前期研究，已表明PEEK材料具有良好的生物相容性和稳定的化学特性，是理想的骨科植入材料。另一方面，PEEK材料的弹性模量与骨皮质的弹性模量接近，植入后与肩峰骨刺、钩状肩峰等导致肩袖损伤的危险因素相似度高，能够很好地模拟肩峰撞击征以及肩袖损伤的病理过程。本申请中，植入物I的结构设计，在方便植入的同时，也能很方便地取出。
[0086]进一步地，在进行步骤4)时，将大鼠放置在一固定装置3上，如图6和图7所示，所述固定装置3包括底板31、固定在底板31中间的三棱柱支架32、以及四根均匀分布在三棱柱支架32四周的绑柱33，所述绑柱33底部与底板31固定连接，所述三棱柱包括底面321、以及对称设置的第一斜面322和第二斜面323，所述大鼠侧放在第一斜面322或第二斜面323上，且大鼠的四肢通过绑带捆绑在绑柱33上。所示绑带优选采用如牛筋等具有弹性的绑带，以防止对大鼠的四肢造成伤害。通过该固定装置3，可抬高大鼠的肩关节、并将大鼠俯卧位固定，从而便于穿刺所述植入物I的一系列操作。
[0087]对大鼠进行完造模操作后四天开始驱赶大鼠，每天驱赶一次，每次驱赶30min，以迫使大鼠肩关节活动，从而迫使植入物和肌腱发生摩擦、撞击。
[0088]本申请中，所述硬组织切片制作依次包括以下步骤:
[0089]7)、分别在进行造模操作后的2周、4周、6周、8周处死A组、B组、C组、D组大鼠，即在造模操作后的2周处死A组的12只大鼠，在造模操作后的4周处死B组的12只大鼠，在造模操作后的6周处死C组的12只大鼠，在造模操作后的8周处死D组的12只大鼠；每次分批处死大鼠后，获取被处死大鼠的双侧肩关节标本、并切割肩关节标本，且肩关节标本的底面321与大鼠R下肌腱走形方向平行；优选地，切割后的肩关节标本的大小为15mmX 15mmX 15mm。
[0090]8)、对每个大鼠的肩关节标本都依次进行固定操作、包埋操作、以及切片和磨片操作:
[0091]所述固定操作为:将肩关节标本置于10%的甲醛水溶液中固定7天。
[0092]所述包埋操作为:将肩关节标本依次放置在的乙醇中进行各24h的梯度脱水，即将肩关节标本先放置在80%的乙醇中24h，再将肩关节标本先放置在90%的乙醇中24h，最后将肩关节标本先放置在100%的乙醇中24h。
[0093]肩关节标本进行梯度脱水后，将肩关节标本浸泡在浸塑液中30天；之后肩关节标本置于一包埋瓶中，并滴入 聚甲基丙烯酸甲酯(PolymethylMethacrylate,PMMA),抒紧包埋瓶的瓶盖，且对包埋瓶进行与大鼠标号一一对应的标记；将包埋瓶放置在60°C的水浴中聚合48h，所述聚甲基丙烯酸甲酯凝固成包埋块，该包埋块为一无色透明的坚硬固体块。
[0094]所述切片和磨片操作为:砸碎包埋瓶，取出包埋块，在齿科抛光打磨机上磨出组织面，并用锉刀修齐周围树脂；之后使用LeicaieOO型硬组织锯式旋转切片机沿垂直于包埋块的长轴方向切片，初始厚度约为200 μ m ;使用502胶水将切片粘结于树脂载片上；用RF-1型骨组织试样研磨机研磨切片，依次换用800目、1200目、1500目、2000目的砂纸再研磨切片，直至切片厚度为40-60 μ m，优选地，切片厚度为50 μ m ;再将切片置于撒有滑石粉的抛光板上，以对切片进行抛光，直至切片在显微镜下看不到划痕位置；最后利用超声波清洗机清洗切片，并将切片自然晾干。
[0095]9)、比对假手术组大鼠的肩关节标本切片以及实验组大鼠的肩关节标本切片，进行组织学观察，观察各种病理改变的出现率；最后建立大鼠慢性肩袖损伤的模型，以为进一步研究慢性肩袖损伤的机制和治疗方法奠定基础，其在研究肩峰下减压术后如何使用药物治疗、改善肌腱愈合等方面具有实用价值。另外，每组12只大鼠中有12个肩膀未做过造模操作，在这12个健康肩膀中随机挑选6个健康肩膀作为健康组，用于正常对照。
[0096]优选地，每组大鼠中有6只假手术组大鼠和6只实验组大鼠进行基于统计学的比对，故可采用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料以频数表示，组间比较采用X 2检验或确切概率法；检验水准α = 0.05。
[0097]进一步地，为了提高对切片的组织学观察效果，即对肌腱中各型胶原和潜在的钙化灶进行观察，所述切片和磨片操作完成后，还需对切片进行VG染色操作，所述VG染色操作依次包括以下步骤:
[0098]81)、将切片放置在0.1 %的甲酸中浸泡3min后水洗；[0099]82)、将切片放置在20%的甲醇中浸泡2h后水洗3min ；
[0100]83)、将切片放置在60°C的水浴亚甲基蓝中浸泡5min后，60°C水洗3min ；
[0101]84)、将切片放置在苦味酸和品红的混合溶液中浸泡15min ；
[0102]85)、将切片用无水乙醇洗，并自然晾干。
[0103]优选地，所述步骤7)中，在切割肩关节标本前，先在大鼠R下肌的肌腹中点处、以及在大鼠肩峰处均插入大头针，两个大头针之间的连线即为肌腱，再以两个大头针之间的连线作为切割标记来切割所获取的肩关节标本，使得切割后肩关节标本的底面平行于肌膜，以提闻肩关节标本的切割精度。另外，在包埋操作时，肩关节标本的底面与包埋瓶的平底相接触，即肩关节底面是放到包埋瓶底部的。
[0104]在实际操作后，使用本申请设计的方法对48只大鼠进行造模操作后，48只实验大鼠全部存活，无一例感染，也未出现红、肿、皮温增高、皮下积液等局部炎症反应或全身感染，且造模操作后大鼠跛行2到3天，4天后基本恢复正常。
[0105]另外，组织学的观察结果为:
[0106]1、植入物I准确定位于大鼠肩峰与大鼠R下肌腱、肱骨头之间，各组大鼠都未发现植入物I移位现象。
[0107]2、共观察到4种病理改变:R下肌腱滑囊面部分断裂、肌腱内部分层撕裂、R下肌腱关节面部分撕裂和R下肌腱全层撕裂。
[0108]R下肌腱滑囊面部分断裂仅出现于A组(2例)和B组(I例)，组间差异无统计学意义(P > 0.05) ; R下肌腱内部分层撕裂主要出现在B组(5例)和C组出例)，两组与A组(I例)、D组(I例)比较差异均有统计学意义(P < 0.05) ; R下肌腱关节面部分撕裂主要出现在C组(4例)，与其余各组比较差异均有统计学意义(P <0.05) ; R下肌腱全层断裂主要出现于D组(5例)，与其余各组比较差异均有统计学意义(P <0.05);各组正常对照侧和假手术对照的网下肌腱边缘光滑，无内部分层及断裂表现。
[0109]故在通过本申请而建立的模型中发现，造模操作后的早期表现是与植入物I直接摩擦的肌腱滑囊面的损伤，但是当肌腱出现滑囊面和关节面分离后，大部分的肌腱断裂是首先从关节面开始的，最终发展为全层断裂。这与临床观察一致:临床发现大部分肩袖损伤病人表现为肌腱关节面的部分撕裂，而非发生在滑囊面。
[0110]综上所述，通过刺入PEEK材料的植入物I建立大鼠慢性肩袖损伤模型，无需暴露肩关节，创伤小，出血少，操作快，也无需破坏三角肌起点，对肩关节结构功能影响小，可减少术后关节粘连等并发症，感染率和死亡率低，造模成功率高，且方便转化为肩峰下减压术后模型，具有较高推广价值。
[0111]所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
[0112]以上对本发明实施例所提供的一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法进行了详细介绍，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例的思想，在【具体实施方式】及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制，凡依本发明设计思想所做的任何改变都在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:将多只实验用大鼠标号并随机且平均分为A组、B组、C组和D组，每组大鼠分为相同数量的假手术组和实验组，且假手术组大鼠数量、实验组大鼠数量至少为6只；每只大鼠均依次进行造模操作和硬组织切片制作；所述造模操作依次包括以下步骤:1)、对大鼠进行腹腔注射麻醉剂；2)、对大鼠备皮消毒后摸到大鼠肩峰，拉起大鼠肩峰处的皮肤并剪一切口；3)、紧贴大鼠肩峰内侧刺入一植入物，所述植入物包括构成一体结构的植入部和穿刺部，所述植入部包括平行设置的上作用片和下作用片、以及用于连接上作用片和下作用片的连接片，所述上作用片、连接片、下作用片形成一钩槽，所述穿刺部从下作用片的端部向外延伸；4)、所述穿刺部刺入大鼠肩峰，且穿刺部紧贴大鼠肩峰的下表面行进、并贴着大鼠三角肌的后缘从大鼠肩峰外侧刺出，以将大鼠肩峰夹持在植入物的上作用片和下作用片之间；5)、将植入 部和大鼠肩峰固定，之后将穿刺部剪去；6)、假手术组大鼠在置入植入物后即刻取出植入部，实验组大鼠在置入植入物后不取出植入部；所述硬组织切片制作依次包括以下步骤:7)、分别在进行造模操作后的2周、4周、6周、8周处死A组、B组、C组、D组大鼠，获取被处死大鼠的双侧肩关节标本、并切割肩关节标本，且肩关节标本的底面与大鼠R下肌膜走形方向平行；8)、对每个大鼠的肩关节标本都依次进行固定操作、包埋操作、以及切片和磨片操作；所述固定操作为:将肩关节标本置于10%的甲醛水溶液中固定7天； 所述包埋操作为:将肩关节标本依次放置在的乙醇中进行各24h的梯度脱水，再将肩关节标本浸泡在浸塑液中30天；之后肩关节标本置于一包埋瓶中，并滴入聚甲基丙烯酸甲酯，拧紧包埋瓶的瓶盖，且对包埋瓶进行与大鼠标号一一对应的标记；将包埋瓶放置在60°C的水浴中聚合48h，所述聚甲基丙烯酸甲酯凝固成包埋块；所述切片和磨片操作为:取出包埋块，磨出组织面，并沿垂直于包埋块的长轴方向切片，之后将切片粘结于树脂载片上；研磨切片，直至切片厚度为40-60 μ m;对切片进行抛光；之后清洗切片，并将切片自然晾干；9)、比对假手术组大鼠的肩关节标本切片以及实验组大鼠的肩关节标本切片。
2.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述切片和磨片操作完成后，还需对切片进行VG染色操作，所述VG染色操作依次包括以下步骤:81)、将切片放置在0.1%的甲酸中浸泡3min后水洗；82)、将切片放置在20%的甲醇中浸泡2h后水洗3min；83)、将切片放置在60°C的水浴亚甲基蓝中浸泡5min后，60°C水洗3min；84)、将切片放置在苦味酸和品红的混合溶液中浸泡15min；85)、将切片用无水乙醇洗,并自然晾干。
3.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述上作用片上设有第一凹槽，下作用片上设有第二凹槽，所述第一凹槽和第二凹槽分别位于植入物的两侧；所述步骤5)中，植入部和大鼠肩峰通过蚕丝线固定，所述蚕丝线卡在第一凹槽和第二凹槽中。
4.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述穿刺部的端部为一尖头，且穿刺部的端部设有一延伸至所述尖头的倾斜面。
5.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述步骤7)中，切割后的肩关节标本的大小为15mmX 15mmX 15mm。
6.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述植入物的材料为聚醚醚酮。
7.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述步骤6)完成后，还对大鼠进行腹腔注射抗生素。
8.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:在进行步骤4)时，将大鼠放置在一固定装置上，所述固定装置包括底板、固定在底板中间的三棱柱支架、以及四根均匀分布在三棱柱支架四周的绑柱，所述绑柱底部与底板固定连接，所述三棱柱包括底面、以及对称设置的第一斜面和第二斜面，所述大鼠侧放在第一斜面或第二斜面上，且大鼠的四肢通过绑带捆绑在绑柱上。
9.根据权利要求1所述的微创建立大鼠慢性肩袖损伤模型的方法，其特征在于:所述步骤7)中，在切割肩关节标本前，先在大鼠R下肌的肌腹中点处、以及在大鼠肩峰处均插入大头针，再以两个大头针之间的连线作为切割标记来切割所获取的肩关节标本。
【文档编号】A61D1/00GK103919623SQ201410175179
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月27日 优先权日:2014年4月27日
【发明者】丁舒晨, 方学伟, 尹战海, 田臻, 王哲洋, 艾尼瓦尔江·达毛拉, 商清, 寨旭 申请人:丁舒晨