一种柃木的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种柃木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养和炼苗移栽。本发明的柃木组培方法操作简便，生长周期短，成活率高，可以短期内获得大量的柃木幼苗。
【专利说明】一种柃木的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及柃木组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 柃木，，别名，细叶菜、海岸柃野桂花，柃木被日本人尊称为 "神木"，是山茶科植物，常绿灌木与小乔木，是日本人的传统供神祭祖的吉祥物，市场需求 量大且稳定。目前，日本每年需求柃木插叶5亿?6亿束，中国出口约1.5亿束，出口金额 约60亿日元。分布于分布华东、华南、西南各地。以茎、叶、果入药。夏秋采集，晒干或鲜用。 性味苦、涩，平。祛风除湿，消肿，止血。用于风湿关节痛，腹水，外伤出血。目前，柃木的繁 殖还普遍采用自然繁殖，其组培快繁的方法尚无报道，使用组培快繁的方法对柃木进行快 速繁殖，可以提高柃木的使用率。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种柃木的快速繁殖方法，由该方法所制备得 到的怜木增殖系数1?，成活率1?，可以提1?怜木的利用率。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗lh，超净工作台 上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段 接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗 糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. 15mg/L2， 4-D+KIU 3mg/L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，增殖培养 出来的丛生芽放入生根培养基1/2MS+NAA0. lmg/L，生根诱导后，试管苗长约5cm左右，将生 根试管苗先进行7d的闭瓶炼苗，再打开瓶口炼苗5d，将清洗干净的幼苗放入ΚΜη0 4溶液中 浸泡4d，栽植于椰子壳：泥炭土 ：珍珠岩=2 :1 :1的基质中进行培养。
[0005] 采用本发明制备的柃木成活率为95%，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
[0007] 实施例1 取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗lh，超净工作台 上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段 接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗 糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. lmg/L2， 4-D+KIU 2mg/L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，增殖培养 出来的丛生芽放入生根培养基1/4MS+NAA0. lmg/L，生根诱导后，试管苗长约5cm左右，进行 炼苗移栽，柃木成活率为90%。
[0008] 实施例2 取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗lh，超净工作台 上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段 接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗 糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. 2mg/L2， 4-D+KTO. 4mg/L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，增殖培养 出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0. lmg/L，生根诱导后，试管苗长约5cm左右，进行 炼苗移栽，柃木成活率为92%。
[0009] 实施例3 取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗lh，超净工作台 上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段 接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗 糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. 15mg/L2， 4-D+KTO. 4mg/L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，增殖培养 出来的丛生芽放入生根培养基3/4MS+NAA0. lmg/L，生根诱导后，试管苗长约5cm左右，进行 炼苗移栽，柃木成活率为94%。
[0010] 实施例4 取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗lh，超净工作台 上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段 接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗 糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. 15mg/L2， 4-D+KTO. 2mg/L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x，增殖培养 出来的丛生芽放入生根培养基1/4MS+NAA0. lmg/L，生根诱导后，试管苗长约5cm左右，进行 炼苗移栽，柃木成活率为93%。
【权利要求】
1. 一种柃木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培 养和炼苗移栽，其主要步骤如下： (1) 取柃木带芽的茎段，按照常规的消毒方法对其进行灭菌处理； (2) 将步骤（1)消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方为WPM+NAAO. 2mg/ L+6-BA0. 5mg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照 20001x ； (3) 取步骤（2)诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+0. 1-0. 2mg/L2,4-D+KT0. 2-0. 4mg/ L+lg/L活性炭，附加蔗糖30g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 8,光照20001x ; (4) 取步骤（3)增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基1/4-3/4MS+NAA0. lmg/L ; (5) 取步骤（4)生根后的柃木试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养。
2. 按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1)中所述柃 木无菌芽的获得为，上午9-10点取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污 渍，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，次氯酸钠处理9min，无菌水冲洗5遍。
3. 按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（3)增殖培养 基中附加了 lg/L活性炭，能克服苗在增殖培养过程中褐化现象的出现。
4. 按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4)中的生根 培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6. 5g/L，PH5. 9,光照50001x，湿度60-70%。
5. 按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5)中柃木的 炼苗培养方法为将生根试管苗先进行7d的闭瓶炼苗，再打开瓶口炼苗5d，将清洗干净的幼 苗放入ΚΜη04溶液中浸泡4d，栽植于椰子壳：泥炭土 ：珍珠岩=2 :1 :1的基质中进行培养。
【文档编号】A01H4/00GK104186323SQ201410445987
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司