一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，包括珍珠伞无菌外植体的获得、芽的诱导分化、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽等步骤，本发明方法所制备的珍珠伞操作简单，周期短，为珍珠伞种质资源的开发和利用提供基础。
【专利说明】 一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及珍珠伞组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]珍珠伞,Art/isia maculosa ifez,紫金牛科,灌木,又称:紫绿果根、小罗伞、天青地红。根细长圆柱形。茎直立，细枝长10-17厘米，微带灰色。叶互生，椭圆状披针形，长8-14厘米，宽2.8-4.8厘米，先端略尖，边缘微波状；叶柄长约4?8毫米。伞形花序顶生:通常为两性花；花梗长约I厘米；花白色或带红色，通常有腺点。核果球形，红色，顶部有芒刺。种子I颗。花期4?5月。果期冬季。多生于亚热带山间、疏林潮湿处。分布我国中部及南部。全株治骨折、跌打、白喉、咽喉肿痛、胃溃疡、急性肠炎等症。舒筋活络，强筋壮骨，清咽利喉。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种珍珠伞的快速繁殖方法，由该方法所制备的珍珠伞操作简单，周期短，为珍珠伞种质资源的开发和利用提供基础。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取珍珠伞的带芽茎段，流水冲洗1.5h，超净工作台上70%的酒精处理30s，0.2%的氯化汞处理12min，无菌水冲洗7次，消毒处理过的珍珠伞带芽茎段接入B5+6_BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+氰化钾5mg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照ΙΟΟΟΙχ，温度24°C，湿度75%，诱导出来的腋芽放入培养基1/2B5+6_BA0.5mg/L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照30001x，温度24°C，湿度75%，增殖后的芽苗接入培养基1/2MS+IBA1-1.5mg/L+NAAl-l.5mg/L+AC2_3g/L中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂5.3g/L，pH5.9，光照60001x，温度25°C，选取苗长约5cm，根长约2cm的试管苗，放置于自然光和室温条件下两周，然后取出，洗去根部培养基，栽植于蛭石:泥炭=1:1的基质中，待长出新根后喷洒浓度为1.5X10—4农用硫酸链霉素喷洒防病，500倍IBA溶液浇灌，温度25 °C，湿度90%。
[0005]采用本发明制备的珍珠伞成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取珍珠伞的带芽茎段，流水冲洗1.5h，超净工作台上70%的酒精处理30s，0.2%的氯化汞处理12min，无菌水冲洗7次，消毒处理过的珍珠伞带芽茎段接入B5+6_BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+氰化钾5mg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照ΙΟΟΟΙχ，温度24°C，湿度75%，诱导出来的腋芽放入培养基1/2B5+6_BA0.5mg/L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照30001x，温度24°C，湿度75%，增殖后的芽苗接入培养基1/2MS+IBA1.0mg/L+NAAl.0mg/L+AC2g/L中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂5.3g/L，pH5.9，光照60001x，温度25°C，选取苗长约5cm，根长约2cm的试管苗，放置于自然光和室温条件下两周，然后取出，洗去根部培养基，栽植于蛭石:泥炭=1:1的基质中，待长出新根后喷洒浓度为1.5 X 10_4农用硫酸链霉素喷洒防病，500倍IBA溶液浇灌，温度25 °C，湿度90%，成活率89%。
[0008]实施例2
取珍珠伞的带芽茎段，流水冲洗1.5h，超净工作台上70%的酒精处理30s，0.2%的氯化汞处理12min，无菌水冲洗7次，消毒处理过的珍珠伞带芽茎段接入B5+6_BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+氰化钾5mg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照ΙΟΟΟΙχ，温度24°C，湿度75%，诱导出来的腋芽放入培养基1/2B5+6_BA0.5mg/L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照30001x，温度24°C，湿度75%，增殖后的芽苗接入培养基1/2MS+IBA1.5mg/L+NAAl.5mg/L+AC3g/L中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂5.3g/L，pH5.9，光照60001x，温度25°C，选取苗长约5cm，根长约2cm的试管苗，放置于自然光和室温条件下两周，然后取出，洗去根部培养基，栽植于蛭石:泥炭=1:1的基质中，待长出新根后喷洒浓度为1.5 X 10_4农用硫酸链霉素喷洒防病，500倍IBA溶液浇灌，温度25 °C，湿度90%，成活率90%。
[0009]实施例3
取珍珠伞的带芽茎段，流水冲洗1.5h，超净工作台上70%的酒精处理30s，0.2%的氯化汞处理12min，无菌水冲洗7次，消毒处理过的珍珠伞带芽茎段接入B5+6_BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+氰化钾5mg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照ΙΟΟΟΙχ，温度24°C，湿度75%，诱导出来的腋芽放入培养基1/2B5+6_BA0.5mg/L进行增殖培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照30001x，温度24°C，湿度75%，增殖后的芽苗接入培养基1/2MS+IBA1.5mg/L+NAAl.5mg/L+AC2g/L中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂5.3g/L，pH5.9，光照60001x，温度25°C，选取苗长约5cm，根长约2cm的试管苗，放置于自然光和室温条件下两周，然后取出，洗去根部培养基，栽植于蛭石:泥炭=1:1的基质中，待长出新根后喷洒浓度为1.5 X 10_4农用硫酸链霉素喷洒防病，500倍IBA溶液浇灌，温度25 °C，湿度90%，成活率91%。
【权利要求】
1.一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，包括珍珠伞无菌外植体的获得、芽的诱导分化、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取珍珠伞的带芽茎段，对其进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的珍珠伞带芽茎段接入B5+6-BAl.5mg/L+NAA0.05mg/L+氰化钾5mg/L培养基中进行腋芽的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.9，光照ΙΟΟΟΙχ，温度24°C，湿度75%; (3)取步骤(2)诱导出来的腋芽放入培养基l/2B5+6-BA0.5mg/L进行增殖培养，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.9，光照 30001χ，温度 24°C，湿度 75% ； (4)取步骤(3)增殖后的芽苗接入培养基1/2MS+IBA1-1.5mg/L+NAAl-l.5mg/L+AC2-3g/L中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂5.3g/L，pH5.9，光照60001x，温度25°C; (5)取步骤(4)生根后的试管苗进行炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(O中所述珍珠伞无菌带芽茎段的获得为，取珍珠伞的带芽茎段，流水冲洗1.5h，超净工作台上70%的酒精处理30s，0.2%的氯化汞处理12min无菌水冲洗7次。
3.按照权利要求1所述的一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)中珍珠伞幼苗茎段的诱导中附加了氰化钾，可以控制茎段的褐化。
4.按照权利要求1所述的一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)中珍珠伞生根培养中附加了 AC，可以促进生根并能防止试管苗褐化。
5.按照权利要求1所述的一种珍珠伞组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中珍珠伞的炼苗移栽方法为选取苗长约5cm,根长约2cm的试管苗,放置于自然光和室温条件下两周，然后取出，洗去根部培养基，栽植于蛭石:泥炭=1: I的基质中，待长出新根后喷洒浓度为1.5X 10_4农用硫酸链霉素喷洒防病，500倍IBA溶液浇灌，温度25°C，湿度90%。
【文档编号】A01H4/00GK104255456SQ201410462990
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司