一种柳兰的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种柳兰诱变育种的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的诱变育种、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法所制备的柳兰可以提高突变频率，得到丰富的变异体，增加选择机会，缩短育种周期，为选育新品种提供丰富的材料。
【专利说明】 一种柳兰的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及柳兰诱变育种的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]热生，Epilobium angustifolium Linn.柳叶菜科，多年生草本，高约I一 1.3米。茎直立，通常不分枝。叶互生，披针形，总状花序顶生，伸长，花序轴被短柔毛，苞片线形，长I—2厘米，花大，两性，红紫色。根、茎、叶、花、果均含鞣质，分布于我国西南、西北、华北至东北；北温带广布，北美洲、欧洲至日本，自然生于海拔较高的林缘、林间、山坡草地、河岸草丛及火烧或采伐迹地。耐寒。喜凉爽、湿润气候及湿润、肥沃、排水良好的土壤。稍耐阴。畏炎热、干旱的环境。柳兰全草70%丙酮提取物中分得9个鞣质类及其他酚性化合物，分别鉴定为3-氧-没食子酰基-D-葡萄糖、I，6- 二-氧-没食子酰基-β -D-吡喃型葡萄糖、1-氧-没食子酰基_4，6-六羟基联苯甲酰基-β -D-吡喃型葡萄糖、水杨梅丁素、英国栎鞣花酸、特里马素、虾子花素、绿原酸、没食子酸。根状茎或全草入药，有小毒，能调经活血、消肿止痛，主治月经不调、骨折、关节扭伤。柳兰繁殖采用种子繁殖，也可分株和扦插繁殖，诱变育种可以提高突变频率，得到丰富的变异体，增加选择机会，缩短育种周期，为选育新品种提供丰富的材料。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供柳兰诱变育种的快速繁殖方法，提高突变频率，得到丰富的变异体，增加选择机会，缩短育种周期，为选育新品种提供丰富的材料。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取柳兰花瓣，在流水冲洗3min，表面无污垢，超净工作台上次氯酸钠处理4min，无菌水冲洗5遍，吸水纸吸去表面水分，灭菌处理过的柳兰花瓣接入培养基配方为B5+NAAlmg/L+IBA2mg/L+50mg/LVC诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗室培养，温度25°C，诱导出来的愈伤组织做6tlCo-Y射线10_30Gy处理，加入分化培养基B5+NAA0.1-0.2mg/L+6-BAl-2mg/L中诱导分化，获得新品种植株。
[0005]采用本发明制备的柳兰新品种植株，生长速度快，药用次生代谢物含量高，能耗少，污染小。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取柳兰花瓣，在流水冲洗3min，表面无污垢，超净工作台上次氯酸钠处理4min，无菌水冲洗5遍，吸水纸吸去表面水分，灭菌处理过的柳兰花瓣接入培养基配方为B5+NAAlmg/L+IBA2mg/L+50mg/LVC诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗室培养，温度25°C，诱导出来的愈伤组织做6tlCo- Y射线1Gy处理，加入分化培养基Β5+ΝΑΑ0.lmg/L+6-BAlmg/L中诱导分化，获得新品种植株，诱变率75%。
[0008]实施例2
取柳兰花瓣，在流水冲洗3min，表面无污垢，超净工作台上次氯酸钠处理4min，无菌水冲洗5遍，吸水纸吸去表面水分，灭菌处理过的柳兰花瓣接入培养基配方为B5+NAAlmg/L+IBA2mg/L+50mg/LVC诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗室培养，温度25°C，诱导出来的愈伤组织做6tlCo- Y射线30Gy处理，加入分化培养基B5+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L中诱导分化，获得新品种植株，诱变率77%。
[0009]实施例3
取柳兰花瓣，在流水冲洗3min，表面无污垢，超净工作台上次氯酸钠处理4min，无菌水冲洗5遍，吸水纸吸去表面水分，灭菌处理过的柳兰花瓣接入培养基配方为B5+NAAlmg/L+IBA2mg/L+50mg/LVC诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗室培养，温度25°C，诱导出来的愈伤组织做6tlCo- Y射线20Gy处理，加入分化培养基B5+NAA0.lmg/L+6-BA2mg/L中诱导分化，获得新品种植株，诱变率79%。
【权利要求】
1.一种柳兰诱变育种的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的诱变育种、生根诱导，其主要步骤如下: (1)取柳兰的花瓣芽，在超净工作台上进行消毒处理； (2)取步骤(I)灭菌处理过的柳兰花瓣接入培养基配方为B5+NAAlmg/L+IBA2mg/L+50mg/LVC诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗室培养，温度25 °C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织做6ciCo-Y射线10-30Gy处理； (4)取步骤(3)诱导出来的愈伤组织加入分化培养基Β5+ΝΑΑ0.1-0.2mg/L+6-BAl-2mg/L中诱导分化。
2.按照权利要求1所述的一种柳兰诱变育种的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述诱导愈伤组织的外植体选择为柳兰的花瓣，花瓣是诱导愈伤组织的好材料。
3.按照权利要求1所述的一种柳兰诱变育种的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)柳兰无菌花瓣的获得为，取柳兰花瓣，在流水冲洗3min，表面无污垢，超净工作台上次氯酸钠处理4min,无菌水冲洗5遍,吸水纸吸去表面水分。
4.按照权利要求1所述的一种柳兰诱变育种的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)诱变育种选择6tlCo- Y射线能促进染色体结构发生显著变化，花期株型和花色，叶绿素含量、光合速率和次生代谢物含量等指标均发生了变化。
【文档编号】A01H1/06GK104255447SQ201410463157
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司