一种生产青葙拇指花的方法
【专利摘要】本发明涉及一种生产青葙拇指花的方法。本发明采用选用青葙种子作为外植体，接种在初代培养基表面，将青葙苗切断下胚轴，弃去下胚轴及根系，将子叶转接到花芽诱导培养基上，在花芽诱导培养基上培养后，转接到成花培养基上，将已出现花序的青葙苗切掉基部的黄叶及根系，转接到保鲜培养基上培养，将青葙苗的基部切去根部和主干的叶子，插入增殖培养基中，得到继代苗，选取顶端带有花苞的茎段竖直插入生根培养基上，长出根须，拇指花培育完成。本发明克服了开花时间不可控、不能够采用组培等快繁方式生产、也不可以较长时间保持花期等缺陷。本发明使用组织培养方法培育可控制开花条件、有效延长植物开花时间的拇指花快速、产业化生产的方法。
【专利说明】一种生产青葙拇指花的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生产拇指花的方法，特别涉及一种生产青葙拇指花的方法。
【背景技术】
[0002]拇指花又名试管花，是利用植物组培快繁技术，在封闭玻璃器皿中，通过改变培养基成分和培养条件，人为控制植物生长阶段，生产出的迷你观赏花。
[0003]试管花卉是目前市场上较流行的迷你携带花卉，因其植株小，长在精致的小试管或玻璃瓶内而得名。它是利用植物组培技术，在相对或绝对无菌的条件下，将事先培养好的植物植株放入拇指大的透明试管或艺术化的玻璃瓶中生长的一系列迷你植物的总称。
[0004]目前市售的试管花的技术还不成熟，大致分为以下几类:
[0005]第一类:简易型。采用仙人球、针蓉、生石花等比较矮小和精致的多肉植物，放入有培养土小容器中，成品即完成生产。此类植物易生根且生长缓慢，在一两个月外表无明显变化。生产成本低，生产速度快，生产工艺简单。
[0006]第二类:观叶植物。采用组培苗，切下3?4cm枝叶插入成品培养基，成品即完成生产。这类试管植物生产速度快，但是无花无根，保持时间短。
[0007]第三类:完整植物。在密闭容器内，通过组培技术培养的完整植株，有根、有茎、有叶和花。但是这类试管苗大多数存在植物形态变异，易受菌类污染，品种稀少和植株过大等问题。
[0008]青葙属觅科(Amaranthacae), 一年生草本,高0.3?I米,全体无毛；莖直立，有分枝；叶片矩圆披针形、披针形或披针状条形，长5?8cm。花多数密生，塔状或圆柱状穗状花序，长3?10cm，粉红，色彩淡雅。富有野趣，色彩明快。生长分布广泛，野生或栽培，易于育苗。青葙具有观赏性及药用价值，但花期仅在5?8月间，株高较高。
[0009]在本发明作出之前，目前试管花卉技术存在的问题，是受季节控制、开花时间不可控、不能够采用组培等快繁方式生产、也不可以较长时间保持花期，无法培育出有根、有茎、有叶、有花的真正1cm以下的完整拇指花植株。
【发明内容】
[0010]本发明的目的就是克服上述缺陷，提供一种生产青葙拇指花的方法。
[0011]本发明的技术方案是:
[0012]一种生产青葙拇指花的方法，其特征在于步骤如下:
[0013](I)发芽培养:选用青葙种子作为外植体，接种在初代培养基表面；所述初代培养基为:大量元素减半的MS标准培养基中加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?10g，吲哚丁酸
0.5?1.2mg,水至1L,调节pH到5.8?6.2 ;
[0014](2)花芽诱导培养:将青葙苗从子叶下方约Icm处切断下胚轴，弃去下胚轴及根系，将子叶转接到花芽诱导培养基上；所述花芽诱导培养基为:MS标准培养基添加蔗糖20?80g,卡拉胶4?9g,脱落酸0.3?1.0mg,水至1L,调节pH至5.8?6.2 ;
[0015](3)成花培养:青葙苗在花芽诱导培养基上培养20天后，修除根系转接到成花培养基上；培养约18?20天，陆续出现花序；所述成花培养基为:改良MS培养基，N含量减少至MS培养基的1/30?1/5，P含量增加至MS培养基的3?10倍，B含量增加至MS培养基的3?10倍,加入鹿糖35g,卡拉胶1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.01?0.08mg,卩引哚丁酸0.05?0.12mg,水至1L,调节pH到6.2 ；
[0016](4)保鲜培养:将已出现花序的青葙苗切掉基部的黄叶及根系，转接到保鲜培养基上，培养15?20天；所述保鲜培养基为:MS标准培养基加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?1g,细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.01?0.08mg,水至1L，调节pH到5.8?6.2 ;
[0017](5)增殖培养:将保鲜培养基内青葙苗的基部，切去根部和主干的叶子，竖直插入增殖培养基中，培养20?30天，即可快速得到4?10倍的继代苗；所述增殖培养基为:MS标准培养基加入鹿糖10?60g,卡拉胶3?1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.1?0.5mg,吲哚丁酸0.05?0.3mg,水至1L,调节pH到5.8?6.2 ;
[0018](6)生根培养:选取培养在保鲜培养基和增殖培养基中长出花苞的青葙苗，从距离花苞2cm的茎干切成两段，顶端带有花苞的茎段竖直插入生根培养基上，培养7?15天即可长出根须，拇指花培育完成；生根培养基为:MS标准培养基加入蔗糖20?40g，卡拉胶3?10g，细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.01?0.2mg,矮壮素I?5mg，水至1L，调节pH到5.8 ?6.2。
[0019]所述培养环境条件是:温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h。
[0020]所述步骤(2)中的青葙苗是苗龄为20?25天的青葙苗。
[0021]所述步骤(5)中在切去根部和主干的叶子后，把每棵植株切成2?3段，每段有2?4个腋芽。
[0022]本发明的优点和效果在于提供了一种使用组织培养方法培育可控制开花条件、有效延长植物开花时间的拇指花快速、产业化生产的方法。生产出的青葙拇指花造型迷你可爱，开花时间达到两个月之久，开花时间可由拇指花容器中的水热条件控制，兼具鲜花的观赏性及实用性。拇指花很好的克服了目前试管花卉市场存在的缺限，具有花期长、对容器外环境不敏感、适应能力强、只有拇指大小、开花时间可控制等优点。
[0023]本发明的其他具体优点和效果将在下面继续说明。
【具体实施方式】
[0024]本发明的技术思路是:
[0025]使用不同植物激素对植物植株进行综合处理，调控植物生长进度的原理，再结合切花进一步矮化植株，生产出有根、有茎、有叶、有花的真正1cm以下的完整拇指花植株。同时通过控制培养基配方和容器内部水热环境使植株按照人为设定时间开花，并能良好保存在拇指花容器中一段时间。
[0026]首先利用外施脱落酸浓度大时抑制茎、下胚轴、根、胚芽鞘或叶片生长的作用机理，对已经培育好的青葙苗进行脱落酸处理，将青葙侏儒化，产生3?5cm高的侏儒化植株。经处理的青葙苗叶子的光合作用增强，植株成长加快，提前进入成熟期。
[0027]然后对这些青葙苗进行成花处理，改变培养基的氮、磷和硼的含量，给拇指苗一个最适宜的开花条件。
[0028]成花后，再通过切花进一步矮化植株。针对目前出现试管花卉有花无根现象，利用矮壮素能抑制作物细胞伸长，但不抑制细胞分裂的原理，我们研发了能快速让植株生根，又能控制植株保持迷你化的生根保鲜培养基，生产出有根、有茎、有叶、有花的真正1cm以下的完整拇指花植株。
[0029]为了实现本发明的目的，本发明通过选种、种子表面清洗、种子表面消毒、发芽培养、花芽诱导培养、成花培养、保鲜培养、增殖培养、生根培养等九个步骤来实施。
[0030]下面结合一些【具体实施方式】对本发明进行进一步的阐述。但不仅限于将次【具体实施方式】作为上述发明的范围。
[0031]1.选种
[0032]选择黑色饱满的青葙种子，去除种皮及其他杂质，以便于清洗。
[0033]2.种子表面清洗
[0034]将种子置于200ml三角瓶中，加入5?8ml洗洁精，然后加入100?120ml自来水，反复摇动，5?8分钟后，倒去洗洁精溶液，然后注入自来水并摇洗I?2分钟，倒去洗涤液，重复2次。本流程目的在于去除种子表面蜡质层，并在清洗过程中漂去空瘪种子。
[0035]3.种子表面消毒
[0036]采用三步消毒法:用0.3%高锰酸钾将清洗好的种子消毒15分钟，倒去高锰酸钾溶液，用无菌水将种子及三角瓶冲洗3次。再用75%的乙醇对种子经行表面消毒lmin，弃去乙醇消毒液。然后用0.15%的升汞溶液进行15分钟的表面消毒，期间用无菌镊子搅动若干次。最后弃去升汞消毒液，用无菌水将种子及三角瓶清洗4?5遍。本流程的目的在于取出种子表面的细菌，使其能在无菌培养基中稳定快速繁殖。
[0037]4.初代培养
[0038]经表面消毒的种子均匀接种在初代培养基表面，I?2天后种子即可发芽。在温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h条件下，培养20?25天。初代培养基为:大量元素减半的MS标准培养基中加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?10g，吲哚丁酸0.5?1.2mg，水至1L，调节pH到5.8?6.2。
[0039]5.花芽诱导培养
[0040]将苗龄为20?25天的青葙苗从子叶下方约Icm处切断下胚轴，弃去下胚轴及根系，将子叶及生长点转接到花芽诱导培养基上。操作过程中弃去下胚轴的目的在于使青葙苗矮化，形成高度合适的拇指花。在温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h条件下，培养20天。花芽诱导培养基为:MS标准培养基添加蔗糖20?80g，卡拉胶4?9g,脱落酸0.3?1.0mg,水至1L,调节pH至5.8?6.2。
[0041]6.成花培养
[0042]青葙苗在花芽诱导培养基上培养20天后，修除根系转接到成花培养基上。成花培养基为改良MS培养基,其中的氮、磷、硼兀素的含量相对于一般的MS培养基有较大范围的调整，主要是为了诱导青葙苗开花。在温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h条件下，在该成花培养基上培养约18?20天，即可观察到花序陆续出现。成花培养基为:改良MS培养基，N含量减少至原来的1/30?1/5，P含量增加至原来的3?10倍，B含量增加至原来的3?10倍，加入蔗糖35g，卡拉胶10g，细胞分裂素6-苄基腺嘌呤 0.0l ?0.08mg，吲哚丁酸 0.05 ?0.12mg，水至 UMfpH 到 6.2。
[0043]7.保鲜培养
[0044]将已出现花序的青葙苗切掉基部的黄叶及根系，转接到保鲜培养基上，培养15?20天。在温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h条件下，培养3天后，青葙苗的叶子和枝干逐渐转绿，花朵颜色也逐渐转艳。保鲜培养基为:MS标准培养基加入鹿糖10?60g,卡拉胶3?1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.01?0.08mg,水至1L，调节pH到5.8?6.2。
[0045]8.增殖培养
[0046]将保鲜培养基内青葙苗的基部，切去根部和主干的叶子，但是不能破坏腋芽。再把每棵植株切成2?3段，每段有2?4个腋芽，竖直插入增殖培养基中。在温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h条件下，培养20?30天。腋芽长成2?3cm的侧枝，将侧枝切下转接到诱花培养基，即可快速得到4?10倍的继代苗，继代苗可再进行新一轮的拇指花培养。增殖培养基为:MS标准培养基加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?10g，细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.1?0.5mg,吲哚丁酸0.05?0.3mg,水至1L，调节pH到5.8?6.2。
[0047]9.生根培养
[0048]选取培养在保鲜培养基和增殖培养基中长出花苞的青葙苗，从距离花苞2cm的茎干切成两段，顶端带有花苞的茎段竖直插入含有矮壮素的生根培养基上。这里切花的目的是为了保持花苗进一步迷你化。在温度25 ± 2°C，光照强度2000 土 500lux，光照时间不低于每天6?12h条件下，培养7?15天即可长出根须，拇指花培育完成，可以保持观赏约2个月。生根培养基为:MS标准培养基加入蔗糖20?40g，卡拉胶3?10g，细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.01?0.2mg，矮壮素I?5mg，水至1L，调节pH到5.8?6.2。
[0049]实施例:
[0050]本实例中直接采集野生青葙种子，通过筛子筛选出饱满种子，清洗和消毒后的种子接种在初代培养基上，置于25±2°C和2000±5001ux光照条件下培养，每天光照8h。
[0051]将苗龄为20天的青葙苗从子叶下方约Icm处切断下胚轴，弃去下胚轴及根系，将子叶及生长点转接到花芽诱导培养基上。本实例中，花芽诱导培养基为:MS基本培养基添加蔗糖20g，卡拉胶6g，脱落酸0.3mg,水至1L，调节pH至5.8 ;青葙苗置于25±2°C和2000±5001ux光照条件下培养，每天光照8小时，培养20天。
[0052]将经过花芽诱导的青葙苗修除根系，然后转接到成花培养基上。本实例中，成花培养基优选为:改良MS培养基，N含量减少至原来的1/25，P含量增加至原来的2倍，B含量增加至原来的3倍,加入鹿糖30g,卡拉胶1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.08mg,水至1L,调节pH到6.2。青葙苗置于25±2°C和2000±5001ux光照条件下培养，每天光照8小时，培养15天。
[0053]将已在成花培养基中生长15天的青葙修去基部的黄叶及根系，转接到保鲜培养基中继续培养，约8天内95%以上花絮变为红色；本实例中，保鲜培养基为:MS基本培养基添加蔗糖20g，卡拉胶6g，6-苄基腺嘌呤0.03mg,水至1L，调节pH至5.8 ;青葙苗置于25±2°C和2000±500Iux光照条件下培养，每天光照8小时，培养25天。
[0054]将保鲜培养基内青葙苗的基部，切去根部和主干的叶子插入增殖培养基，但是不能破坏腋芽。本实例中，把每棵植株切成2段，每段有4个腋芽，插入增殖培养基。培养30天，每个腋芽可长成一棵继代苗。置于25 ± 2°C和2000 土 5001ux光照条件下培养，每天光照8h，一共增殖了 4倍的继代苗。
[0055]将保鲜培养基和增殖培养基中已长出花苞的青葙苗，切取离花苞2cm的茎干，保留3片叶子，然后竖直插入生根培养基。本实例中，生根培养基为:MS标准培养基加入蔗糖40g,卡拉胶6g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.1mg,矮壮素2mg,水至1L,调节pH到5.8。置于25±2°C和2000±5001ux光照条件下培养，每天光照8h，10天生根后得到3cm的迷你青葙，花色鲜艳，可保持60天的观赏期。
[0056]组培的青葙拇指花，高度约0.03米。室外自然生长的青葙，高度约I米。
[0057]以上仅为本发明专利的【具体实施方式】，本发明专利中的方法和配方在各种大量实验中均获得一致的效果，在不同时间和地点的重复性试验也获得了相同的结果，因此本发明的保护范围不仅仅局限于此，任何不经过创造性的更改和替换都应该涵盖在本发明保护范围内。因此，本发明的保护范围应以权利要求书所限定的范围为准。
【权利要求】
1.一种生产青葙拇指花的方法，其特征在于步骤如下: (1)发芽培养:选用青葙种子作为外植体，接种在初代培养基表面；所述初代培养基为:大量元素减半的MS标准培养基中加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?10g，吲哚丁酸0.5?1.2mg,水至1L,调节pH到5.8?6.2 ; (2)花芽诱导培养:将青葙苗从子叶下方约Icm处切断下胚轴，弃去下胚轴及根系，将子叶转接到花芽诱导培养基上；所述花芽诱导培养基为:MS标准培养基添加蔗糖20?80g,卡拉胶4?9g,脱落酸0.3?1.0mg,水至1L,调节pH至5.8?6.2 ; (3)成花培养:青葙苗在花芽诱导培养基上培养20天后，修除根系转接到成花培养基上；培养约18?20天，陆续出现花序；所述成花培养基为:改良MS培养基，N含量减少至MS培养基的1/30?1/5，P含量增加至MS培养基的3?10倍，B含量增加至MS培养基的3?10倍,加入鹿糖35g,卡拉胶1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.01?0.08mg,卩引哚丁酸0.05 ?0.12mg,水至 1L,调节 pH 到 6.2 ； (4)保鲜培养:将已出现花序的青葙苗切掉基部的黄叶及根系，转接到保鲜培养基上，培养15?20天；所述保鲜培养基为:MS标准培养基加入蔗糖10?60g，卡拉胶3?10g，细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.01?0.08mg,水至1L，调节pH到5.8?6.2 ; (5)增殖培养:将保鲜培养基内青葙苗的基部，切去根部和主干的叶子，竖直插入增殖培养基中，培养20?30天，即可快速得到4?10倍的继代苗；所述增殖培养基为:MS标准培养基加入鹿糖10?60g,卡拉胶3?1g,细胞分裂素6-节基腺嘌呤0.1?0.5mg, H引哚丁酸0.05?0.3mg,水至1L,调节pH到5.8?6.2 ; (6)生根培养:选取培养在保鲜培养基和增殖培养基中长出花苞的青葙苗，从距离花苞2cm的茎干切成两段，顶端带有花苞的茎段竖直插入生根培养基上，培养7?15天即可长出根须，拇指花培育完成；生根培养基为:MS标准培养基加入蔗糖20?40g，卡拉胶3?1g,细胞分裂素6-苄基腺嘌呤0.01?0.2mg,矮壮素I?5mg，水至1L，调节pH到5.8?6.2。
2.根据权利要求1所述的一种生产青葙拇指花的方法，其特征在于培养环境条件是:温度25±2°C，光照强度2000±5001ux，光照时间不低于每天6?12h。
3.根据权利要求1所述的一种生产青葙拇指花的方法，其特征在于步骤(2)中的青葙苗是苗龄为20?25天的青葙苗。
4.根据权利要求1所述的一种生产青葙拇指花的方法，其特征在于步骤(5)中在切去根部和主干的叶子后，把每棵植株切成2?3段，每段有2?4个腋芽。
【文档编号】A01H4/00GK104255493SQ201410481833
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月17日 优先权日:2014年9月17日
【发明者】陈晓晖, 王台虎 申请人:南京大渊美容保健有限公司