一种获取spf五指山小型猪的方法
【专利摘要】本发明公开了一种获取SPF五指山小型猪的方法。它包括猪群病原监测及种猪选择、麻醉、剖腹产、隔离器饲养、屏障环境饲养和病原生物学监测，所述的麻醉为：怀孕五指山小型猪母猪在妊娠期末期进行手术，先肌肉注射麻醉，母猪麻醉后消毒传入手术室，将母猪俯卧于手术台上，对母猪进行气管插管，插管完成后将母猪仰卧保定于手术台上，并开始静脉滴注质量分数5％葡萄糖生理盐水，然后观察母猪出现眼皮眨动、尾巴晃动时，立即上麻醉呼吸机，异氟烷先调为2-2.5μg/ml持续10-20min，使母猪安静，然后设为0.5-1μg/ml使母猪维持麻醉状态，其他设定指标如下：潮气量200-300ml，呼吸次数15-20次，氧分压20Pa，观察有没有出现胎动，如有胎动则开始剖腹产手术，手术前先将异氟烷调为2-2.5μg/ml，并维持20min。
【专利说明】一种获取SPF五指山小型猪的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于实验动物学实验动物标准化领域，具体涉及一种获取SPF五指山小型 猪的方法。
【背景技术】：
[0002] 犬和非人灵长类动物在生物医学非啮齿类动物研究中一直占据主要地位，但随着 动物福利和"3R"原则的推广，犬和非人灵长类动物逐渐不再适合作为实验动物使用。而猪 由于是一种肉用动物，且在药物动力学、生理学、生物化学和解剖学等多个方面和人类非常 接近，因此非常适合用于生物医学研究。其中小型猪由于体小，利于饲养、管理和遗传控制， 被认为是一种非常好的可以替代犬和非人灵长类动物的大型实验动物，已经广泛应用于皮 肤烧伤、肿瘤、免疫学、心血管疾病、营养学、器官移植、遗传疾病等生物医学研究的各个方 面。
[0003] 无特定病原体（SpecificpathogenFree,SPF)动物是指机体内无特定的微生物和 寄生虫存在的动物，是目前国外使用最广泛的实验动物。我国早在"九五"实验动物发展的 若干意见中就提出，2000年全国基本普及清洁级实验动物，重点科研项目使用的实验动物 要达到SPF级水平。目前大小鼠等小型啮齿类动物已经实现普及清洁级实验动物，主要科 研项目都开始使用SPF实验动物。而现在国内实验用小型猪一般都是普通饲养，本身携带 许多病原体，微生物状态复杂，很难符合实验动物的微生物学和寄生虫学控制等方面要求， 加之暴露于众多病原生物的普通环境中，作为医学实验动物会产生不良甚至严重后果。因 此，有必要开展SPF猪培育研究，以满足生物医学对高质量实验用猪的需求。
[0004] 净化猪群病原的常用方法有药物治疗性早期断奶技术（MEW)、隔离早期断奶技术 (SEW)、胚胎移植和无菌剖腹产等，这几种方法都有各自的特点。MEW技术的原理是在一个 有效防疫的猪群中，仔猪由于母源抗体的存在并不会立即感染所有的病原，通过对产前5d 至产后5d和产后10到20日龄的仔猪进行药物控制（抗生素），并早期断奶隔离饲养，就 可以避免仔猪受到许多病原微生物的感染。SEW技术的原理是母猪产前得到有效免疫，仔 猪出生后通过初乳可以获得较高的被动免疫，在被动免疫消失之前及时将仔猪和母猪隔离 饲养就可以减少甚至隔绝病原微生物对仔猪的影响。MEW和SEW技术可以控制许多病原的 感染，方法简单、生产成本较低，但也存在一些缺点，如母源性疾病净化不彻底，还有再度感 染的危险，另外由于哺乳期的缩短，可能影响部分仔猪的生长发育，尤其是部分体重较小的 仔猪难以处理。胚胎移植技术可以维持繁殖母猪的繁殖性能，获得较好的净化状态，但是由 于技术复杂、胚胎收集方法容易导致母猪子宫粘连、胚胎不宜长期保存等原因，目前在培育 SPF猪方面应用并不广泛。无菌剖腹产目前仍是应用最普遍、成熟、有效的获得SPF动物的 方法，该方法包括两种形式，一种是子宫切开，母猪可以重复利用，但技术条件要求较高，有 污染的可能性；二是子宫直接摘除，母猪只能利用一次，但操作相对简便，对病原的控制比 较彻底，可以隔绝绝大部分的病原感染。
【发明内容】
：
[0005] 本发明的目的是提供一种获取SPF五指山小型猪的方法，利用该方法能够减轻剖 腹产麻醉过程中麻醉药对猪胎儿的影响，使仔猪能够正常复苏，提高仔猪存活率，保证剖腹 广的顺利实施，为_效的获取SPF五指山小型猪创造了条件。
[0006] 本发明的获取SPF五指山小型猪的方法，包括猪群病原监测及种猪选择、麻醉、剖 腹产、隔离器饲养、屏障环境饲养和病原生物学监测，其特征在于，所述的麻醉为：怀孕母 猪在妊娠期末期进行手术，先肌肉注射麻醉，母猪麻醉后消毒传入手术室，将五指山小型猪 母猪俯卧于手术台上；对母猪进行气管插管，插管完成后将母猪仰卧保定于手术台上，并 开始静脉滴注质量分数5%葡萄糖生理盐水；注射麻醉大概可以维持3-3. 5h，然后观察母 猪出现眼皮眨动、尾巴晃动等变化时，立即上麻醉呼吸机，异氟烷先调为2-2. 5 y g/ml持续 10-20min，使母猪安静，然后设为0. 5-1 y g/ml使母猪维持麻醉状态，其他设定指标如下： 潮气量200-300ml，呼吸次数15-20次，氧分压20Pa左右，大概在注射麻醉药后4. 5-5h左 右猪胎儿复苏，观察有没有出现胎动，如有胎动则开始剖腹产手术，手术前先将异氟烷调为 2-2. 5 ii g/ml，并维持 20min。
[0007] 所述的肌肉注射麻醉,用肌肉注射麻醉药质量分数3%戊巴比妥钠0. 4mL/kg体 重、速眠新II 0. lmL/kg体重、阿托品2mL作前驱麻醉，如母猪未倒下，则加注质量分数3 %戊 巴比妥钠直至倒下，母猪倒下后消毒运入手术室。
[0008] 本发明的方法利用母猪代谢麻醉药，以减轻剖腹产麻醉过程中麻醉药对猪胎儿的 影响，使仔猪能够正常复苏，提高仔猪存活率，同时结合气体麻醉保证剖腹产的顺利实施。
[0009] 本发明的获取SPF五指山小型猪的方法，其采用注射麻醉药，再利用母体代谢麻 醉药，从而可以减轻麻醉药对猪胎儿的影响，提高了仔猪存活率，再结合气体麻醉药方法， 保证了手术的顺利进行。利用本发明的方法获得了 61头仔猪，其中存活仔猪55头，仔猪存 活率90. 2 %，存活率显著高于注射麻醉（获得20头仔猪，只有2头存活，仔猪存活率10 % )， 并与普通级封闭群五指山小型猪正常分娩水平相近，说明代谢麻醉药+复合麻醉适用于小 型猪生物净化剖腹产手术，可有效提高仔猪存活率。本发明的获得的SPF小型猪维持较好 的生物净化状态，获得了一种理想的SPF五指山小型猪，从而为其在生物医学中的应用奠 定了基础。
【具体实施方式】：
[0010] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0011] 实施例1 :
[0012] 本实施例的获取SPF五指山小型猪的方法，包括以下步骤：
[0013] 1 ?材料
[0014] ⑴猪群病原监测及种猪选择：对普通级封闭群五指山小型猪的猪繁殖与呼吸综合 征病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病毒、布氏杆菌和弓形虫等病原进行筛查，选择所检 病原全为阴性的母猪配种。获得猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬 病毒、布氏杆菌和弓形虫等病原阴性的封闭群五指山小型猪怀孕母猪8头，孕期lll±2d。
[0015] ⑵试剂：甲醛、高锰酸钾、质量分数3%戊巴比妥钠、速眠新II、阿托品、质量分数 1 %过氧乙酸、质量分数5%葡萄糖生理盐水、异氟烷等。
[0016] ⑶仪器设备：器械包括手术刀、止血钳、镊子、剪刀、纱布、缝线等，使用前高压灭 菌；隔离器、屏障猪舍使用前检测相关指标，合格后使用；注射器、输液器、手术台、麻醉呼 吸机（动物麻醉机Matrx/VMS;动物呼吸机Matrx/Model 3000)等。
[0017] ⑷乳品、饲料、饮用水和其他制剂：婴儿早段罐装奶粉，以60C〇辐照消毒（剂量为 20kGy)，并经抽样检测显示无菌；饲料为普通猪全价颗粒料分装后121°C，30min灭菌；饮用 水在隔离器里面为居民生活用水装瓶后121°C，30min灭菌，移到屏障设施后用居民生活用 水和盐酸配置成pH3. 0的酸化水；其他制剂包括右旋糖酐铁，益生菌为双歧杆菌、嗜酸乳杆 菌、肠球菌三联活菌等。
[0018] 2?剖腹产方法
[0019] ⑴母猪准备：观察母猪产前征兆，尽量接近自然顺产时间施行手术。术前12小时 母猪禁食不禁水，进入手术室前用1 %过氧乙酸对母猪进行全面的消毒。
[0020] ⑵手术室准备：手术室为万级屏障解剖室，使用前用甲醛（甲醛20ml+高锰酸钾 lOg/m 3)熏蒸消毒。
[0021] ?麻醉：先肌肉注射3%戊巴比妥钠（0.41111/1^体重）、速眠新11(0.11]1171^体 重）、阿托品2ml使母猪麻醉，如母猪未倒下，则可少量加注3%戊巴比妥钠（每次3ml左 右）。待母猪倒下后，用1 %过氧乙酸全身喷雾消毒，然后传入手术室，将母猪俯卧于手术台 上。对母猪进行气管插管，插管完成后将母猪仰卧保定于手术台上。
[0022] ⑷麻醉药代谢：给母猪静脉滴注质量分数5%葡萄糖生理盐水辅助麻醉药代 谢。注射麻醉大概可以维持3-3. 5h，观察母猪出现眼皮眨动、尾巴晃动等变化时，则应立 即上麻醉呼吸机，异氟烷先调为2?2. 5 y g/ml持续10-20min，使母猪安静，然后可设为 0. 5-1 ii g/ml使母猪维持麻醉状态，其他设定指标如下：潮气量200-300ml，呼吸次数15-20 次，氧分压20Pa左右。大概在注射麻醉药后（最后一次给药）4. 5-5h左右猪胎儿可以复苏， 观察有没有出现胎动，如有胎动则可以开始手术。手术前先将异氟烷调为2-2. 5 y g/ml，并 维持20min。
[0023] 设置单独注射麻醉组，其麻醉和麻醉药代谢步骤为：先肌肉注射3%戊巴比妥钠 (0. 4ml/kg体重）、速眠新II (0. lmL/kg体重）、阿托品2ml使母猪麻醉，如母猪未倒下，贝丨J 可少量加注3%戊巴比妥钠（每次3ml左右）。待母猪倒下后，用1%过氧乙酸全身喷雾消 毒，然后传入手术室直接开始剖腹产手术。
[0024] (5)剖腹产：按常规步骤对术部剃毛、消毒，沿腹正中线切开下腹，充分暴露子宫，迅 速将输卵管、子宫颈结扎，然后全子宫摘除，将子宫浸入预先放置1%过氧乙酸的消毒盆中， 30s内将子宫传送进隔离器。母猪放血安乐死。在隔离室内用手术刀和剪刀破开子宫，迅速 取出仔猪，用止血钳夹住脐带，将仔猪头部朝下，用吸引球吸出口腔、鼻腔的粘液，用纱布包 住手指刺激仔猪咽部，并拍打背部，待仔猪有自主呼吸后再用干纱布擦拭口鼻及全身，并进 行断脐、打耳号、称重、断齿等处理。从子宫结扎到取出仔猪的过程应该迅速，最好时间控制 在5min内。
[0025] 剖腹产手术的结果见表1，本实施例的复合麻醉组（即注射麻醉+麻醉药代谢+气 体麻醉）仔猪存活率明显高于注射麻醉组（对照组），平均存活数也显著高于注射麻醉组 (P< 0. 01)，说明本实施例的复合麻醉组的麻醉效果要明显好于注射麻醉组。
[0026] 表1剖腹产手术结果
[0027]
【权利要求】
1. 一种获取SPF五指山小型猪的方法，包括猪群病原监测及种猪选择、麻醉、剖腹产、 隔离器饲养、屏障环境饲养和病原生物学监测，其特征在于，所述的麻醉为：怀孕五指山小 型猪母猪在妊娠期末期进行手术，先肌肉注射麻醉，母猪麻醉后消毒传入手术室，将母猪俯 卧于手术台上，对母猪进行气管插管，插管完成后将母猪仰卧保定于手术台上，并开始静 脉滴注质量分数5%葡萄糖生理盐水，然后观察母猪出现眼皮眨动、尾巴晃动时，立即上麻 醉呼吸机，异氟烷先调为2-2. 5iig/ml持续10-20min，使母猪安静，然后设为0. 5-liig/ ml使母猪维持麻醉状态，其他设定指标如下：潮气量200-300ml，呼吸次数15-20次，氧 分压20Pa，观察有没有出现胎动，如有胎动则开始剖腹产手术，手术前先将异氟烷调为 2-2. 5 ii g/ml，并维持 20min。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的肌肉注射麻醉，用肌肉注射麻醉药 质量分数3%戊巴比妥钠0.4111171^体重、速眠新110.11]1171^体重、阿托品21]11作前驱麻醉， 如母猪未倒下，则加注质量分数3%戊巴比妥钠直至倒下，母猪倒下后消毒运入手术室。
【文档编号】A01K67/02GK104335972SQ201410592185
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】潘金春, 黄韧, 王希龙, 闵凡贵, 袁文 申请人:广东省实验动物监测所