一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法与流程

本发明涉及一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，属于植物快速繁殖技术领域。

背景技术：

随着社会的发展和生活水平的提高，水族箱也越来越流行。观赏水草是水族箱的重要组成成分。由于人们对水草的喜爱，大量仅以水草为主的观赏水族箱十分畅销。目前观赏水草品种已经超过500多种，其中绝大多数来原于美洲、非洲、东南亚等热带地区。金钱小榕也称金钱榕，是一种单子叶植物，属于天南星科水榕属，和水榕相比较，叶形呈圆形。其属于挺水性水草，生长缓慢，叶色浓绿，是中前景草的最好选择之一，十分非常流行，市场上往往供不应求。

金钱小榕的繁殖主要依靠对成年的茎进行分支，但是其生长十分缓慢，繁殖系数较低同时成本较高。植物组织培养技术能够利用侧芽，茎段等快速繁殖，缓解传统生产上的种苗繁殖率低下的问题。目前虽有一些观赏水草如水榕、红椒、绿椒等已经成功建立了组织培养技术体系，但是还没有金钱小榕相关的报道，也没有进行金钱小榕工厂化生产。观赏水草常年生长在水中，外植体常常带有多种细菌，导致无菌培养困难，严重制约组织培养技术的应用。通过建立组织培养技术能够在短期内大量提供金钱小榕的种苗，保障期周年供应市场。

针对以上的现状，本发明提供了一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，能有效增加种苗的繁殖系数，满足生产上对种苗的需求，进一步提高种植和销售者的收入，促进观赏水草产业的发展。

技术实现要素：

本发明的目的在于解决当前金钱小榕种苗的来源，提供一种快速、低成本的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方法如下：

一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，

(1)外植体选取与消毒：

①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体；

②去除多余的叶片，用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢，再用纸巾吸干；

③在超净工作台上，先用70％酒精浸泡10-30s，再用无菌水冲洗1次，3-5min；

④再用0.1-0.3％的升汞溶液消毒10-15min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体；

还包括以下步骤：

(2)改良MS培养基的制备：

改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50～60mg/L，其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；

(3)不定芽诱导：

将步骤(1)得到的消毒外植体，用无菌手术刀片切下侧芽，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养4周，得到金钱小榕不定芽；

诱导培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为50-80％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；

所述不定芽诱导培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为0.5-2mg/L，NAA的浓度为0.05-0.5mg/L；

(4)继代增殖：

将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基，进行继代培养4周，得到金钱小榕从苗；

继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；

所述继代增殖培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为1.5-2.5mg/L，NAA为0.05-0.5mg/L；

(5)无菌生根：

待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根，切下单株，接种于生根培养基中，进行生根培养20-30天，得到金钱小榕幼苗；

生根培养条件如下：培养温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；

所述无菌生根培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加NAA，NAA的浓度为0.5-3mg/L；

(6)炼苗与移栽

步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7天；

然后洗净根部培养基，用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部，放入直径为5cm的镂空塑料杯中，移至塑料大棚。

在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L。

在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L；

在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。

在所述无菌生根培养基中，NAA的浓度为1.5mg/L。

与现有技术相比较，本发明具备的有益效果：

利用本发明对金钱小榕茎段的腋芽进行组织培养快速繁殖，有效提高繁殖系数，缩短生产周期，提高种植效益，能够有效解决当前金钱小榕严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。

附图说明

图1继代增殖步骤得到的金钱小榕从苗。

图2无菌生根步骤得到的金钱小榕幼苗。

图3种植待上市的金钱小榕。

具体实施方式

实施例1

一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体选取与消毒：

①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体；

②去除多余的叶片，用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢，再用纸巾吸干；

③在超净工作台上，先用70％酒精浸泡10-30s，再用无菌水冲洗1次，3-5min；

④再用0.1-0.3％的升汞溶液消毒10-15min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体；

(2)改良MS培养基的制备：

改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L，其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；

(3)不定芽诱导：

将步骤(1)得到的消毒外植体，用无菌手术刀片切下侧芽，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养4周，得到金钱小榕不定芽；

诱导培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为50-80％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；

所述不定芽诱导培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L；

(4)继代增殖：

将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基，进行继代培养4周，得到金钱小榕从苗；

继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；

所述继代增殖培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。

(5)无菌生根：

待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根，切下单株，接种于生根培养基中，进行生根培养20-30天，得到金钱小榕幼苗；

生根培养条件如下：培养温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；

所述无菌生根培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加NAA，在所述无菌生根培养基中，NAA的浓度为1.5mg/L。

(6)炼苗与移栽

步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7天；

然后洗净根部培养基，用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部，放入直径为5cm的镂空塑料杯中，移至塑料大棚。

实施例2

改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50mg/L，其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；

所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L；

所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为1.5mg/L，NAA为0.05mg/L；

所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为0.5mg/L，

其余步骤与实施例1相同，不再赘述。

实施例3

改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为60mg/L，其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；

所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L；

所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为2.5mg/L，NAA为0.5mg/L；

所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为3mg/L，

其余步骤与实施例1相同，不再赘述。