一种独脚金的组织培养快速繁殖方法
【专利摘要】本发明提供了一种独脚金的组织培养快速繁殖方法，主要是通过摘取野生独脚金的腋芽茎段作为外植体，然后将经过灭菌处理的外植体置于诱导培养基上培养至产生不定芽，再将不定芽放入新的诱导培养基上继代培养以诱导不定芽快速增殖，最后将单株植株放入生根培养基上培养，诱导不定芽生根得到大量繁殖植株。本发明所公开的独脚金的组织培养快速繁殖方法能使1个腋芽在2个月内产生10?20个新芽，提高了独脚金的繁殖能力，缩短育苗时间，节省种植成本,也为独脚金的工厂化育苗提供了技术保障。
【专利说明】
一种独脚金的组织培养快速繁殖方法
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养领域，具体是通过诱导独脚金的顶芽或腋芽产生不定芽使独脚金快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002]独脚金属于玄参科独脚金属，是一种常用的药用植物，在治疗儿科清肝热消疳积方面有很大的药用价值，对肝火旺盛、肝炎、小儿腹泻、夜盲、厌食症、抗炎等方面也有一定的药用价值。独脚金适于生长在低海拔的荒山草地、田边、沟谷、耕地等处，它主要分布在我国西南部至东南部各省区，但各个地区的野生独脚金资源稀少，无法满足现阶段的药用需求，这主要是由于独脚金的种子微小、发芽率低、生长缓慢，且独脚金属于半寄生植物，对生长环境要求严格，使得野生独脚金资源非常稀少。目前，如何进一步开发独脚金的药用价值，已引起医学界的高度重视。但是，我们首要解决的是如何提升独脚金的产量，建立一套独脚金种苗的组织培养快速繁殖技术，促进独脚金商品化规模种植是我们急需解决的问题。
【发明内容】
[0003]为解决上述技术问题，本发明的目的是建立一种独脚金的种苗组织培养快速繁殖方法，以提高独脚金的繁殖系数，使种苗生产满足药用生产的需要。
[0004]实现本发明的目的所采用的技术方案如下:
[0005]—种独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，由以下步骤进行处理:
[0006]I)采摘独脚金植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽；
[0007]2)将步骤I)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒，再用无菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0008]3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为1900-2100LX的人工光照，同时控制培养温度为25-35°C，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm;
[0009]4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-
3.5cm，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；
[0010]5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤。
[0011]优选地，所述步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中的消毒时间为8-1 Omin。
[0012]优选地，所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成:ILMS培养基中添加有3mg 6-84和0.111^ IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。
[0013]优选地，所述步骤4)中的生根培养基是由以下成分组成:ILMS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。
[0014]优选地，所述步骤5)中植株炼苗处理天数为5-7天。
[00?5] 优选地，所述步骤5)中泥炭土和园土的质量比为(2-4):1。
[0016]本发明的有益技术效果是:
[0017]本发明通过在特定的培养基上培育含有腋芽的野生独脚金植物的茎段，建立了一套使独脚金组织快速繁殖方法，提高了独脚金的繁殖能力，缩短育苗时间，节省种植成本，也为独脚金的工厂化育苗提供了技术保障。该组织培养快速繁殖方法能使I个腋芽在2个月内产生10-20个新芽，极大提高了独脚金种苗繁殖能力，为工业化育苗和独脚金产业化发展的提供了有力的保障。且该方法能够全年生产种苗，有助于独脚金植物规模化种植，也为商业化种植提供保障。同时，对野生独脚金的种子资源进行收集和保存，有助于人们进一步研究野生独脚金的潜在药用价值。
【附图说明】
[0018]图1为本发明实施例一中腋芽外植体在诱导培养基中的培养图。
[0019]图2为本发明实施例一中不定芽在诱导培养基中的增殖图。
[0020]图3为本发明实施例一中不定芽在生根培养基中的培养图。
[0021]图4为本发明实施例二中顶芽外植体在诱导培养基中的培养图。
[0022]图5为本发明实施例二中不定芽在诱导培养基中的增殖图。
[0023]图6为本发明实施例二不定芽在生根培养基中的培养图。
[0024]图7为本发明实施例二中植株的炼苗状态图。
【具体实施方式】
[0025]下面，结合附图以及【具体实施方式】，对本发明做进一步描述:
[0026]实施例一
[0027]一种独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，由以下步骤进行处理:
[0028]I)采摘野生独脚金植株，切段，使每段含有一个腋芽；
[0029]2)将步骤I)中含有腋芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒8-10min，再用无菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0030]3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，其中诱导培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2，在人工光照强度为1900-2100LX，温度为25-35°C下进行培养，直至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽高度生长至0.8-1.5cm;
[0031]4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，其中生根培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节生根培养基的pH为
5.5-6.2,培养3-4周，至植株高度生长至2.5_3.5cm，其中，该培养过程中的人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；
[0032]5)将步骤4)中的植株炼苗处理5-7天，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤，其中泥炭土和园土的质量比为(2-4):1。
[0033]图1-图3为本实施例的培育状态图:其中，图1是以野生独脚金的腋芽茎段作为外植体，经消毒后，在超净工作台上将外植体接种到诱导培养基的培育图；从图2可见，腋芽茎段在诱导培养基中经过多次继代培养增生了大量不定芽；图3为不定芽单株在生根培养基上生长出根系，形成了再生植株。
[0034]实施例二
[0035]一种独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，由以下步骤进行处理:
[0036]I)采摘野生独脚金植株，切段，使每段含有一个顶芽；
[0037]2)将步骤I)中含有顶芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒8-10min，再用无菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0038]3)在超净工作台上将步骤2)中含有顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，其中诱导培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2，在人工光照强度为1900-2100LX，温度为25-35°C下进行培养，直至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次诱导培养，至不定芽高度生长至0.8-1.5cm;
[0039]4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，其中生根培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为
5.5-6.2,培养3-4周，待植株长至2.5_3.5cm，其中，该培养过程中的人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；
[0040]5)将步骤4)中的植株炼苗处理5-7天，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤，其中泥炭土和园土的质量比为(2-4):1。
[0041]如图4-7为本实施例的培育状态图:图4是以野生独脚金的顶芽茎段作为外植体，经消毒后，在超净工作台上将外植体接种到诱导培养基的培育图；图5可知，外植体在诱导培养基中经过多次继代培养增生了大量不定芽；图6为单株不定芽在生根培养基上生长出根系，形成再生植株；图7是对再生植株进行炼苗处理的过程，使植株定植后能够迅速适应不良环境条件，缩短缓苗时间，增强植株对低温、大风等的抵抗能力。
[0042]对于本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
【主权项】
1.一种独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，由以下步骤进行处理: 1)采摘独脚金植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽； 2)将步骤I)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒，再用无菌水清洗三次，每次清洗2-3min; 3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为1900-2100LX的人工光照，同时控制培养温度为25-35°C，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm; 4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm,其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同； 5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤。2.根据权利要求1所述的独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1 %升汞溶液中的消毒时间为8-1 Omin。3.根据权利要求1所述的独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。4.根据权利要求1所述的独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤4)中的生根培养基是由以下成分组成:IL MS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。5.根据权利要求1所述的独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5)中植株炼苗处理天数为5-7天。6.根据权利要求1所述的独脚金的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5)中泥炭土和园土的质量比为(2-4):1。
【文档编号】A01H4/00GK105830926SQ201610232290
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月13日
【发明人】蔡时可, 王继华, 罗焕明
【申请人】广东金作农业科技有限公司