1.一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法,其特征在于:
A外殖体消毒:选取在-4℃,保存30天以上的忽地笑小鳞茎,剥去外层鳞片,切除根部,经消毒试剂消毒后,无菌水冲洗4-5遍,最后用无菌滤纸吸干表面水分;
B丛生芽诱导:将消毒好的忽地笑切去上部1/2,将带有鳞茎盘的鳞茎均匀分为4-8块,接种到以下培养基中:MS基本培养基,适当浓度的植物生长激素6-卞基腺嘌呤(6-BA)3.0~5.0mg/L,吲哚乙酸(IBA)0.1~0.5mg/L蔗糖(食用糖)20~40g/L,适当pH值;培养温度28±1℃,光照强度1000~3000lx,光照时间10~16h,进行光照培养;
C愈伤组织诱导:将不定芽萌发后培养20天左右的小鳞茎切开,去除原有鳞片和褐化部分,接种到以下培养基中:MS基本培养基,蔗糖(食用糖)20~40g/L,适当浓度植物生长激素毒莠定(Picolarm)1.0~3.0mg/L,6-卞基腺嘌呤(6-BA)0.1~0.5mg/L,适当pH值;培养温度28±1℃;
D愈伤组织增殖:将诱导出20天左右的愈伤组织切下,接种到以下培养基上:MS基本培养基,适当植物生长激素毒莠定(Picolarm)1.0~2.0mg/L,6-卞基腺嘌呤(6-BA)1.0~2.0mg/L,培养温度28±1℃,光照时间10~16h,进行光照培养30~40天;
E愈伤组织的分化:将进行增殖培养后的愈伤组织切成2cm左右的小块,接种到以下培养基上:MS基本培养基,适当植物生长激素6-卞基腺嘌呤(6-BA)4.0~6.0mg/L,萘乙酸(NAA)0.1~0.5mg/L,培养温度25±1℃,光照时间10~16h,进行光照培养30~40天;
F生根培养:选取生长健壮的试管苗,连同小鳞茎接种到如下培养基中:1/2MS或MS基本培养基,蔗糖60~90g/L,适当浓度的植物生长激素萘乙酸(NAA)400~500mg/L,适当PH值,进行光照培养50~60天。
H炼苗移栽:将组培瓶盖打开,并添加少量的蒸馏水,进行有菌条件驯化;用镊子将组培苗从瓶中取出,移栽到已经灭菌的栽培基质中,进行遮阴驯化3周,期间不定期的喷施1/2MS营养液。