一种老年林麝延长泌香方法与流程

本发明属于麝养殖
技术领域：
，尤其涉及一种老年林麝延长泌香方法。
背景技术：
：麝香(moschus)主要由我国一级重点保护濒危野生药用动物林麝(moschusberezovskii)雄性个体分泌，是传统中药的重要组成部分。据《中国药典》2015年版记载，麝香具有开窍醒神，活血通经，消肿止痛的功效。现代研究表明，麝香有抗炎、抗肿瘤的作用、并对中枢神经系统、心脑血管系统等均有显著的影响。也因其香气浓郁，为世界公认的“四大动物香料”(麝香、灵猫香、河狸香、龙涎香)之冠，被用作高级化妆品的定香剂。由于其价格昂贵，人为猎麝取香致使野生资源枯竭，麝香产量急剧下降，造成传统中医药许多名贵验方因无麝香原料而名存实亡。麝香年产量少，自然情况下，一年只分泌一次麝香，这与其生理结构和泌香机制关系密切。早在20世纪80年代，科研工作者就已对麝类泌香机制的研究展开了卓有成效的研究，但由于技术条件的限制，主要集中在麝香囊的解剖结构和组织结构方面。这些研究结果使人们对林麝香腺的宏观解剖结构与超微结构有了较为全面的了解，在组织和细胞形态结构层面为开展林麝泌香机制和提高麝香产量研究提供了可以借鉴的理论依据。麝的泌香反应机制与性腺轴激素密切相关。毕书增等在总结前人经验的基础上，发现下丘脑-垂体-性腺轴激素是调节林麝麝香分泌活动关键因素。与此类似，汪建隆等研究表明性激素(促卵泡素fsh与促黄体生成素lh)可以影响麝香分泌；洪沂生等在对外源激素诱导林麝泌香方面做了大量的研究，结果表明外源雄性激素的诱导可提高林麝的泌香量，并可使切除睾丸和附睾的雄麝、失去自然泌香能力的雄麝和非泌香期的雄麝重新分泌麝香。也有研究表明麝的泌香受促黄体生成素释放激素(lrh)的调节；尹淑媛、戴卫国进一步证明了外源雄性激素可诱导雄麝的泌香活动；此外，相关研究还显示，不同年龄阶段、不同泌香周期公麝的雄激素含量均有明显的变化规律。以上研究结果表明性腺轴激素能够诱导林麝产生泌香活动，是调节林麝麝香分泌活动的关键因素。由于麝特殊的生理结构，只有公麝才产香，母麝不产香，而麝的寿命只有12～15年，产香的高峰期也就5～7年。程建国等研究表明，2.5岁-7.5岁的公麝为有效取香率峰值段，8.5岁以上的雄麝随着年龄的增大，雄麝受到体质、疾病等多种因素的影响，尤其雄激素分泌减少、香腺细胞萎缩的影响，导致雄麝泌香功能逐渐下降，有效取香率呈逐年下降趋势，有的仅泌少量的香或不泌香。根据四川养麝研究所多年生产数据记载，若在公麝泌香过程中，出现生病或过强的应激反应，会在出现反应当年或后续几年停止泌香。由于林麝是濒危保护动物，又是特种养殖经济动物，在人工圈养中，也只能长期饲喂，不能增加收益，这无形的增加了饲养成本。综上所述，现有技术存在的问题是：8.5岁以上的雄麝随着年龄的增大，雄麝受到体质、疾病等多种因素的影响，尤其雄激素分泌减少、香腺细胞萎缩的影响，导致雄麝泌香功能逐渐下降，有效取香率呈逐年下降趋势，有的仅泌少量的香或不泌香.技术实现要素：针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种老年林麝延长泌香方法。本发明是这样实现的，一种老年林麝延长泌香方法，所述老年林麝延长泌香方法包括以下步骤：步骤一，药剂准备：载药棒—促性腺素释放素类似物复合，将药物包埋到30万单位的胶原蛋白中后进行原位冷冻干燥，构建胶原蛋白-丙酸睾丸酮，胶原蛋白-促性腺素释放素缓释剂；步骤二，高剂量通过微创植入埋植在雄麝颈部皮下。进一步，所述老年林麝延长泌香方法采用外源生物缓释技术，对连续多年不产香的林麝分高剂量和中剂量进行皮下埋置。进一步，所述老年林麝延长泌香方法采用复合配制激素药物及受体调节剂为泌香剂，以具备三螺旋结构能强劲锁住药物分子的大分子胶原蛋白和羟基骨水泥生物材料作包裹剂制作皮下埋置。本发明的优点及积极效果为：延长动物的使用年限，提高麝香产量，增加经济效益，尝试性的采用了外源生物缓释技术，对连续多年不产香的林麝分高剂量和中剂量进行皮下埋置，前期工作结果表明体内埋置激素后，不泌香的雄麝出现了典型的泌香反应，提供了事实依据。通过现代生物缓释制药技术手段，采用复合配制激素药物及受体调节剂为泌香剂，以具备三螺旋结构能强劲锁住药物分子的大分子胶原蛋白和羟基骨水泥生物材料作包裹剂制作皮下埋置，通过增加下丘脑相关激素受体的剂量，诱发垂体分泌正反馈激素，促进性激素分泌，使连续三年不泌香的青中年麝和已经停止泌香的老公麝泌香；为林麝泌香机制研究提供理论基础，也对增加中医药动物药麝香产量有重要作用。通过制备不同激素及生物包埋缓释棒剂植入公麝皮下或微囊剂肌肉注射，通过血液运载，匀速激活受体，诱导下丘脑-垂体-性腺轴靶相激素释放或增加，激发停止泌香老公麝和已有一次泌香中青年公麝重启泌香，延长公麝泌香年限，以达到麝香增产的目的。国内未见该方面研究技术的报道。由于林麝的产香年限有限，8.5岁以后，产香量逐年减少甚至大部分出现停滞泌香反应。而且在公麝泌香过程中，出现生病或过强的应激反应，会在出现反应当年或后续几年停止泌香。采用源头激素通过正反馈刺激性腺轴释放性腺激素，以此使不泌香的公麝泌香，能够在养殖群体数量有限的情况下提高麝香产量，将大大提高林麝的经济效益。应用现代生物缓释制药技术手段，采用复合配制激素药物及受体调节剂为泌香剂，以具备三螺旋结构能强劲锁住药物分子的大分子胶原蛋白和羟基骨水泥生物材料作包裹剂制作皮下埋置，通过增加下丘脑相关激素受体的剂量，诱发垂体分泌正反馈激素，促进性激素分泌麝香，对麝香泌香机制提供了理论支持。使不泌香的公麝泌香，有助于改善圈养情况下濒危保护动物林麝的生存质量，为增加中医药动物药麝香的产量提供技术支持，也有利于促进人工养麝产业化发展。附图说明图1是本发明实施例提供的老年林麝延长泌香方法流程图。图2是本发明实施例提供的不同施药方式对性激素水平的影响示意图。图3是本发明实施例提供的胶原蛋白-促性腺素释放激素对性激素水平的影响示意图。图4是本发明实施例提供的胶原蛋白-雄激素对性激素水平的影响示意图。图5是本发明实施例提供的肌注雄激素对性激素水平的影响示意图。图6是本发明实施例提供的不同剂量胶原蛋白-促性腺素释放激素对动物性激素水平的影响示意图。图7是本发明实施例提供的不同剂量胶原蛋白-雄激素对动物性激素水平的影响示意图。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。如图1所示，本发明实施例提供的老年林麝延长泌香方法包括以下步骤：s101：药剂准备：载药棒—促性腺素释放素类似物复合，将药物包埋到30万单位的胶原蛋白中后进行原位冷冻干燥，构建胶原蛋白-丙酸睾丸酮，胶原蛋白-促性腺素释放素缓释剂；s102：高剂量通过微创植入埋植在雄麝颈部皮下。下面结合实验对本发的应用效果作详细的描述。1实验材料与方法选取成年雄麝6头，按用药方式与种类分组。用药后，每天采血量4毫升，离心获血清0.6毫升，储存于-80℃，液氮罐送样。将采集的血清进行甾体类性激素检测。1.1埋植法药剂准备：载药棒—胶原蛋白与雄激素、促性腺素释放素类似物复合，将药物包埋到30万单位的胶原蛋白中后进行原位冷冻干燥，构建胶原蛋白-丙酸睾丸酮，胶原蛋白-促性腺素释放素缓释剂。埋植：通过微创植入雄麝颈部皮下。1.2注射法药剂准备：载药缓释微球—油包液型，将酶解为1万单位的小分子胶原蛋白和药物结合形成载药缓释微球，与注射用液混匀成悬浮液，备用。固定麝：采用保定床(由固定板和支架两部分组成)固定麝，或三人配合将麝直接固定在抓麝人的双腿上。快捷、安全、短时间内抓到麝，抓麝时伺机迅速抓住麝的后肢向上提起使其前肢着地。换手后握住麝的两后肢一手再抓住两前肢。在操作椅上坐下，将麝背颈部或后腿暴露在外，一人扶住其头部以免挣扎时头部晃动其獠牙伤人。用一块布将麝的眼睛遮住，但注意不要将鼻部蒙住，以免影响麝呼吸。同时还应注意不要压迫到麝心脏。注射：为避免微球形成絮状凝集物而影响使用，立即将针头插入缓慢将药瓶内的药液吸入注射器；发现药物有沉淀，应将注射器轻轻倒2次，使其形成均匀的混悬液后才可进行注射。另外，提前做好准备并使麝肌肉松弛也至关重要。采用事先将注射微球吸于注射管中，准备好消毒棉球，保定好麝后，快速进针，将微球注入麝颈部皮下。1.3用药剂量与用药方式表1用药剂量与用药方式用药标识药量与用药方式t，3雄激素即丙酸睾丸酮100毫克//125毫克//150毫克，分三次注射做对照。t，中雄激素即丙酸睾丸酮载药500-600毫克，中剂量长效剂包埋。l，中促性腺素释放素类似物载药600微克，中剂量长效剂包埋。t，高雄激素即丙酸睾丸酮载药800毫克，高剂量长效剂包埋。t，低雄激素即丙酸睾丸酮载药400毫克，低剂量长效剂包埋。l，高促性腺素释放素类似物载药800微克，高剂量长效剂包埋。l，低促性腺素释放素类似物载药400微克，低剂量长效剂包埋。表2实验方法与过程动物类型耳号药品类型药量采样时间实验方法林麝10003t600mg2016.6.22颈部埋置，缝合2针林麝05259l600ug2016.6.22颈部埋置，缝合3针林麝08255丙睾酮375mg2016.6.22左腿肌肉注射1:1.25:1.5比格犬735bt800mg2016.6.22背部埋置，缝合3针比格犬201t400mg2016.6.22背部埋置，缝合3针比格犬250l800ug2016.6.22背部埋置，缝合3针比格犬238l400ug2016.6.22背部埋置，缝合3针注：每天采血量4毫升，离心获血清0.6毫升，储存于-80℃，液氮罐送样。2实验结果与分析2.1施药方式、施药类型和施药剂量对性激素水平的影响2.1.1施药方式对性激素水平的影响如图2所示，施药方式：肌注丙酸睾丸酮(ck)，埋置胶原蛋白-雄激素(p-t)，埋置胶原蛋白-促性腺素释放素(p-l)。实验显示手术埋置对麝影响较大，因此施药方式需要改进为非手术。对麝性雄激素(t)、孕激素(p)、雌激素(e2)水平的影响：三种施药方式在麝血清t/p变化趋势相近，麝血清t在第2天达峰，麝血清p在第6天达峰；施药方式ck和p-l麝血清e2在第5天达峰，施药方式p-t则麝血清e2在第5天开始升，第7天未降。施药方式p-l与ck在麝血清e2/t/p变化趋势更接近，麝血清e2在第4天持续上升，第6天下降；麝血清t在第2天达峰，第3天持续缓慢下降；麝血清p在第4天升高后持续到第7天。施药方式p-t与ck在麝血清t在第2天达峰；ck麝血清e2在第5天达峰，p-t麝血清e2在第5天升持续未降；p-t麝血清p第6天达峰，ck持续未降。据报道，泌香前期睾酮、雌二醇和孕酮含量均处于较低水平，泌香盛期均升到各自最高峰。泌香末期又均迅速降低到与其泌香前期接近的水平。也有报道，泌香盛期睾酮的含量达到最高峰，显著高于其他各期，泌香后期睾酮含量急剧下降，泌香期后继续下降。雌二醇也呈现出与睾酮相似的变化规律，泌香盛期雌二醇的含量也达到最高峰。对本实验进行结果分析表明，林麝的泌香量与整个泌香期睾酮、雌二醇的含量之间呈显著正相关。实验显示采用雄激素350-400mg/只、促性腺素释放激素400ug/只，已足以使动物体内睾酮和雌二醇激素水平出现峰值，因此可排除使用高剂量。但对雄麝泌香效果有待进一步实验证实。2.1.2施药类型对性激素水平的影响如图3-图5所示，施药类型：胶原蛋白-促性腺素释放激素，胶原蛋白-雄激素，雄激素。由上图实验结果可知胶原蛋白-雄激素与胶原蛋白-促性腺素释放激素相比，胶原蛋白-促性腺素释放激素使动物体内性激素水平出现峰值与对照(肌注雄激素)更接近。促性腺素释放激素为性腺轴最上层激素，众多报道证实，其对动物繁殖上的副作用小于甾体类的雄激素，但最后还应以泌香量才能得出评价结论。2.1.3施药剂量对性激素水平的影响如图6所示，低剂量和中剂量的胶原蛋白-促性腺素释放激素对动物血清e2/p/t变化规律相似；动物血清e2和t在第3、第5、第7天出现峰，e2峰谷起伏大，t第2天出峰，第4天谷小；动物血清p在第4升持续高缓慢降。如图7所示，高剂量的胶原蛋白-促性腺素释放激素对动物血清t在第1、第3、第5、第7天出现峰；e2在第5、第7天出峰；动物血清p在第3天略高，一直低。低剂量胶原蛋白-雄激素和肌注雄激素(见图5)对动物血清e2/p变化规律相似；动物血清e2在第5出现峰，第3、第6天为谷；动物血清p在第2天后缓慢持续升高；动物血清t第2天出峰，以后降低。高/中剂量胶原蛋白-雄激素对动物血清e2变化规律相似，在第5天出峰值；高剂量胶原蛋白-雄激素动物血清p和t一直低值延伸；中剂量胶原蛋白-雄激素与低剂量胶原蛋白-雄激素和肌注雄激素(见图5)动物血清e2/t/p变化规律相似；动物血清e2在第5出现峰，第4、第6天为谷；动物血清p在第4天后缓慢升高；动物血清t第2天出峰，以后降低。2.2施药方式与剂量对停止泌香公麝的影响自然情况下，林麝每年5-7月份泌香一次，泌香时间5-7天。泌香时停食，有香味溢出，香囊膨大、睾丸红肿下垂，触摸均温度升高(发烫)。生产中，通常以林麝停食为泌香反应的标志，停食的天数也就是泌香的天数。开始采食标志着泌香反应结束。开始采食到完全恢复采食的时间有个体差异，短的一天，长的达15天。对林麝进行药物埋置并观察起对药物的反应，结果见表3。表3雄性林麝对药物的反应结果注：05259香味浓烈时间大约3天，10003号香味时间5天，08255有香味时间5天。3只林麝在施药后，分别在不同时间均出现典型的泌香反应。结合上述图2的激素检测结果：三种施药方式在麝血清t/p变化趋势相近，麝血清t在第2天达峰，麝血清p在第6天达峰；施药方式ck和p-l麝血清e2在第5天达峰，施药方式p-t则麝血清e2在第5天开始升，第7天未降。根据以上激素检测结果再结合麝出现泌香反应的时间可以推测血清e2含量与麝泌香反应具有显著相关性，当血清e2升高到峰值时麝停食出现泌香反应。10003号雄麝，泌香结束开始采食的第3天，因背部埋植伤口、腿部感染化脓，食量很少，用抗生素治疗，排出大量脓液及块状药物载体，清洗伤口。处理伤口次日采食量增加到一半以上。2016年10月18日，对6.22日埋植激素的3只林麝进行取香，结果如下：10003——10月18日取香黄豆大小一粒，稀，棕色，香味淡；05259——9月22号，下颌断裂脱落，头部化脓并发肺部感染引起死亡，取香3.94克，褐色，泥浆状；08255——10月18日取香9.88克，浅棕色。实验显示手术埋置对麝影响较大，创口难以愈合，取香量少，分析其原因可能是采用块状手术埋置在皮下的方法，由于块状分子量大，在皮下降解慢，可能会导致药物以外的损伤，使愈合时间延长，从而影响促泌香效果。本发明提供的生物缓释促性腺素释放素仿生诱导雄麝泌香的方法采用仿生控释剂一次植入或注入，都可模拟多次注射生理诱导雄麝泌香，同时兼顾了技术推广简洁便利；雄麝仿生控释剂植入后应激反应小，随伤口恢复快，短时间可见正常觅食，从而保证了麝生长及生命安全；埋植用药棒载体为胶原蛋白，其作为生物材料不仅安全、生物相容性好，而且为皮肤主要组分，对止血、组织修复有促进作用；但埋置方法是微创手术，现场操作易因消毒不严造成感染。促性腺素释放素类似物为性腺轴最上级促性腺激素分泌因子，可生理性控制性腺轴上激素的分泌，其本身为多肽类物质，免疫原性低(不易产生耐药性)，在体内降解为氨基酸营养物质，没有毒副作用与残留。不仅对雄麝泌香增量有益，而且对麝群繁衍，野生动物保护起到很好的示范作用。注射用微球，采用16号兽用针头及普通注射器在颈部皮下注射即可完成，操作简便，对动物刺激小。便于在生产场推广应用。两次实验6只公麝，共计取湿香24.49克(促泌香13.82克+二次泌香10.67克)，效果显著。本发明采用埋置生物缓释剂，通过不同施药品种、方式、剂量对动物血清三种甾体类性激素变化规律的探究，为进一步深入研究麝的泌香机制和提高麝产香量提供了事实依据。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12