本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种泥鳅繁育精量化生产方法。
背景技术：
泥鳅（misgurnusanguillicaudatus）属鲤形目花鳅亚科鳅科泥鳅属，在我国已成为重要的特种水产经济品种。目前泥鳅的苗种主要来源于野生捕捞，由于过度捕捞、水域资源污染等原因，泥鳅苗种的天然资源急剧减少，远不能满足养殖业的需要，因此泥鳅人工繁育工作的开展势在必行。开展泥鳅人工繁育精量化生产，合理安排苗种生产，提高苗种生产效率，减少劳动强度及繁育成本显得至关重要。
目前泥鳅人工繁育方法主要有全人工繁育和半人工繁育，这两种繁育技术大多停留在粗放的经验总结水平，催产时机掌握不当等因素导致受精率低，孵化率不高，而且对卵粒无法准确计量，苗种生产稳定性差。苗种培育阶段，大多采取开口仔鱼直接下塘培育，受池塘条件、开口饵料、管理水平等诸多因素影响，仔鱼死亡率极高，培育成活率大多在20%以下。
目前，已公开的泥鳅繁育方法中，如中国专利申请号为“201310279033.x”的泥鳅工厂化育苗方法，这种采用车间生产工艺，提高了工作效率，使用解冻微型海水轮虫作为仔鱼开口饵料，解冻的轮虫容易败坏水质，需使用磺胺类杀菌药，实际生产中操作不当，容易导致仔鱼死亡率增加；如中国专利申请号为“201410179451.6”的一种泥鳅工厂化人工繁殖提供成活率的育苗方法，采用自然交配法、挤精法或剖腹取精囊法，虽然能够提高催产率、受精率和孵化率，但是劳动强度大，繁育成本高；如中国专利申请号为“201410379073.6”的一种高成活率泥鳅繁育方法，提高了鳅苗成活率，但没有对亲鳅产卵量、苗种生产量进行精确计量。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种可以提高泥鳅繁育效率的方法，通过测定雌鳅相对怀卵量、产卵率，以及卵的受精率、孵化率和仔鱼培育成活率等指标，实现精量化泥鳅苗种繁育生产。
本发明一种泥鳅繁育精量化生产方法，技术方案包括以下步骤：
（1）雌鳅繁殖力估算
在泥鳅人工繁殖生产前，随机取0.5%~4%的亲本雌鳅称量体重，并解剖观察卵巢中卵粒，卵粒呈金黄色半透明，说明卵已经成熟，并将卵巢称重。建立雌鳅体重与怀卵量的线性回归方程，利用回归方程，通过测定雌鳅的平均体重，计量雌鳅的相对怀卵量，初步估算其繁殖力。
（2）计算产卵率
（3）计算受精率
亲鳅产卵受精结束后，随机取卵粒样品，3~5次重复，在受精卵胚胎发育的原肠中期阶段，用肉眼观察卵，卵内卵黄与卵膜分界明显的为受精卵，浑浊不轻的为未受精卵，计算受精率。
（4）计算孵化率
将受精卵收集放入网箱，采用静水网箱孵化方式进行受精卵孵化。网箱底部用系有重物，防止网箱底部上浮，网箱水深控制在10~30cm，箱底须完全脱离孵化池底，有利于网箱内外水体交流。受精卵孵化时间为22~35h，及时收集孵出仔鱼，并转入水箱或水泥池进行苗种培育，水深设置为20~30cm。与此同时，随机取受精卵样品计数受精卵数量并单独进行孵化，3~5次重复，待仔鱼孵出后计数孵出的仔鱼数量，计算孵化率。
（5）计算仔鱼培育成活率
采用丰年虫作为泥鳅仔鱼的开口饵料，泥鳅仔鱼开口摄食时间需与丰年虫幼体培育时间准确衔接，泥鳅仔鱼孵化出后24~36h内，开始孵化培育丰年虫；泥鳅仔鱼开口摄食后0~5d内每天投喂丰年虫，丰年虫投喂密度为10~20ind/ml；泥鳅仔鱼开口摄食后5d后逐步减少丰年虫投喂量，同时增加配合饲料的投喂量，配合饲料的蛋白质含量为40%~45%，完成泥鳅仔鱼由摄食丰年虫饵料到摄食配合饲料的转变，15d后只投喂配合饲料，投喂频率为3~4次/d；仔鱼培育30~45d后，转入养殖池塘饲养或苗种出售。与此同时，随机取初孵仔鱼样品并计数，在泥鳅仔鱼培育池中设置小型网箱进行培育，3~5次重复，培育期末计数存活的仔鱼，并计算仔鱼培育成活率。仔鱼培育期间的水体添加食盐，维持盐度在1‰~2‰范围内，可以有效抑制细菌滋生，提高仔鱼成活率。
（6）泥鳅苗种产量估算
在泥鳅繁育过程中，测定雌鳅相对怀卵量、产卵率，以及卵的受精率、孵化率和仔鱼培育成活率，相应的计算公式为：相对怀卵量（粒/g）=（样品卵粒数/样品重量）×卵巢重量/（雌鳅体重-卵巢重量）；产卵率（%）=100×（产卵前雌鳅平均相对怀卵量-产卵后雌鳅平均相对怀卵量）/产卵前雌鳅平均相对怀卵量；受精率（%）=100×受精卵数/卵总数；孵化率（%）=100×出膜鱼苗数/受精卵数；仔鱼培育成活率（%）=100×（仔鱼培育后存活尾数）/仔鱼培育前尾数。
泥鳅苗种产量估算公式为：苗种产量（尾）=雌鳅总重×相对怀卵量×产卵率×受精率×孵化率×仔鱼培育成活率。
作为优选，所述步骤（2）中，亲鳅催产操作前，使用间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（ms-222）作为麻醉剂，在水温为20℃时，麻醉剂使用浓度为200mg/l，随着水温增加，可以适当提高麻醉剂的浓度，每次麻醉的亲鳅数量控制在200尾以内，亲鳅麻醉后立即注射催产剂，然后放入清水中使其自然苏醒，麻醉剂溶液现配现用，当日内的麻醉剂溶液可以重复使用。
本发明与现有技术相比，具有如下优势：
（1）本方法能够对亲本量、产卵量、仔鱼培育量准确计量，根据苗种需求量，合理控制苗种生产规模；
（2）本方法在亲鳅注射催产剂前，将亲鳅麻醉，有效提高了人工催产效率，有利于于泥鳅规模化的繁育生产；
（3）本方法能够准确掌握泥鳅仔鱼开口摄食时间，并选用活体丰年虫作为开口饵料，同时通过搭配投喂配合饲料，实现泥鳅仔鱼由摄食丰年虫饵料到摄食配合饲料的转变，提高仔鱼培育的成活率，降低生产成本；
（4）本方法通过在泥鳅仔鱼培育水体中添加一定量的食盐，降低水体细菌滋生，减少仔鱼疾病发生，提高仔鱼培育成活率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步的描述。
实施例1：
（1）亲本量：雌鳅1000尾、雄鳅1200尾，随机选取35尾逐个雌鳅编号称重，并解剖将卵巢称重。计算出雌鳅的平均体重为29.5g，根据体重与怀卵量的测定数据建立回归方程：y=119.26x1.2923（r2=0.9883），推算出每kg雌鳅的怀卵量为89.8万粒。
（2）亲鳅注射催产剂之前，使用浓度为200mg/l的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（ms-222）将亲鳅麻醉，然后注射催产剂，每尾雌鳅催产剂用量为：绒毛膜促性腺激素（hcg）125iu、促黄体素释放性腺激素（lrh-a2）0.3ug和马来酸地欧酮（dom）0.2mg，雄鳅剂量减半。亲鳅注射催产剂后放入产卵池，水深控制在50~80cm范围内，在水温为21.0~22.5℃时，催产剂注射后的效应时间为15h，亲鳅达到效应时间开始产卵受精至6h后，将亲鳅捕出，随机取35尾雌鳅进行解剖，并将卵巢称重，计算出雌鳅产卵率为65.5%。同时随机取卵粒样品，3次重复，在受精卵胚胎发育的原肠中期阶段，用肉眼观察卵，卵内卵黄与卵膜分界明显的为受精卵，计数受精卵数量，计算受精率为98.2%。
（3）将受精卵收集后放入网箱，采用静水网箱孵化方式进行孵化。网箱底部用系有重物，防止网箱底部上浮，网箱水深为15cm，箱底须完全脱离孵化池底，有利于网箱内外水体交流。在水温为21.0~22.8℃时，受精卵经过31h后孵出仔鱼，将仔鱼收集转入水泥池，水深控制在20~30cm范围内。与此同时，随机取受精卵样品，计数受精卵数量并单独进行孵化，3次重复，待仔鱼孵出后计数孵出的仔鱼数量，计算出仔鱼的孵化率为97.8%。
（4）在仔鱼孵出后30h内，开始培育丰年虫。丰年虫孵出后，用于投喂泥鳅仔鱼。
（5）仔鱼开口摄食后投喂丰年虫，投喂密度为10ind/ml，连续投喂5d，5d后逐步减少丰年虫的投喂量，同时增加配合饲料（蛋白含量为45%）的投喂量，至第15d之后，只投喂配合饲料，仔鱼培育期间水体的盐度为1‰，仔鱼培育至45d，体长达到4~7cm，这时候可以转入养殖池塘饲养或苗种出售。与此同时，随机取初孵仔鱼样品并计数，在泥鳅仔鱼培育池中设置小型网箱进行培育，5次重复，培育期末计数存活的仔鱼，仔鱼培育成活率为82.4%。
（6）根据泥鳅苗种产量估算公式：苗种产量（尾）=雌鳅总重×相对怀卵量×产卵率×受精率×孵化率×仔鱼培育成活率，计算出苗种产量=29.5kg×89.8万粒/kg×65.5%×98.2%×97.8%×82.4%=1373.1万尾。
以上经过实际生产应用，1000尾雌鳅和1200尾雄鳅配组，雌鳅总重29.5kg，可实现泥鳅仔鱼的产量约1370万尾。
实施例2：
（1）亲本量：雌鳅1000尾、雄鳅1400尾，随机选取35尾逐个雌鳅编号称重，并解剖将卵巢称重。计算出雌鳅的平均体重为34.3g，根据体重与怀卵量的测定数据建立回归方程：y=67.23x1.4022（r2=0.9436），推算出每kg雌鳅的怀卵量为108.2万粒。
（2）亲鳅注射催产剂之前，使用浓度为220mg/l的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（ms-222）将亲鳅麻醉，然后注射催产剂，每尾雌鳅催产剂用量为：绒毛膜促性腺激素（hcg）125iu、促黄体素释放性腺激素（lrh-a2）0.3ug和马来酸地欧酮（dom）0.2mg，雄鳅剂量减半。亲鳅注射催产剂后放入产卵池，水深控制在50~80cm范围内，水温为23.5~25.5℃时，催产剂注射后的效应时间为12h，亲鳅达到效应时间开始产卵受精5h后，将亲鳅捕出，随机取35尾雌鳅进行解剖，并将卵巢称重，计算出雌鳅产卵率为58.8%。同时随机取卵粒样品，3次重复，在受精卵胚胎发育的原肠中期阶段，用肉眼观察卵，卵内卵黄与卵膜分界明显的为受精卵，计数受精卵数量，计算受精率为98.6%。
（3）将受精卵收集后放入网箱，采用静水网箱孵化方式进行孵化。网箱底部用系有重物，防止网箱底部上浮，网箱水深控制在20cm，箱底须完全脱离孵化池底，有利于网箱内外水体交流。在水温为23.5~26.0℃时，受精卵经过26h后孵出仔鱼，将仔鱼收集转入水泥池，水深为30cm。与此同时，随机取受精卵样品，计数受精卵数量并单独进行孵化，3次重复，待仔鱼孵出后计数孵出的仔鱼数量，计算出仔鱼的孵化率为95.7%。
（4）在仔鱼孵出后24h内，开始培育丰年虫。丰年虫孵出后用于投喂泥鳅仔鱼。
（5）仔鱼开口摄食后投喂丰年虫，投喂密度为15ind/ml，连续投喂5d，5d后逐步减少丰年虫的投喂量，同时增加配合饲料（蛋白含量为42%）的投喂量，至第15d之后，只投喂配合饲料，仔鱼培育期间水体的盐度为2‰，仔鱼培育至40d，体长达到4~7cm，这时候可以转入养殖池塘饲养或苗种出售。与此同时，随机取初孵仔鱼样品并计数，在泥鳅仔鱼培育池中设置小型网箱进行培育，5次重复，培育期末计数存活的仔鱼，仔鱼培育成活率为81.2%。
（6）根据泥鳅苗种产量估算公式：苗种产量=雌鳅总重×相对怀卵量×产卵率×受精率×孵化率×仔鱼培育成活率，计算出苗种产量=34.4kg×108.2万粒/kg×58.8%×98.6%×95.7%×81.2%=1676.9万尾。
以上经过实际生产应用，1000尾雌鳅和1400尾雄鳅配组，雌鳅总重34.4kg，可实现泥鳅仔鱼的产量约1670万尾。