本发明属于小麦品种选育技术领域，尤其涉及一种提高小麦x玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法。
背景技术：
小麦×玉米远缘杂交生产小麦单倍体，经染色体加倍形成纯合小麦双单倍体新品系，是缩短小麦育种纯合年限的有效手段，其中，成胚率低是制约其应用的主要障碍。受亲本、环境和操作流程影响，在单倍体生产诸环节中，各种文献报道的成胚率变幅最大，后续的成胚、胚拯救、染色体加倍、育苗等均不是最大的限制因素。提高成胚率，是双单倍体生产的关键步骤。
影响成胚率的主要因素是受精和激素诱导。据报道，优化后的激素诱导技术，可使成胚率接近受精率，目前报道的最高受精率为10-30%。受精过程涉及花粉和柱头的相互识别和花粉管伸长等过程，因此认为，小麦x玉米远缘杂交过程中的关键步骤是扰乱识别机制，提高受精率。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题就是提供一种提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法。
为解决上述问题，本发明采用的技术方案包括下列步骤：
第一步，小麦去雄
小麦开花前1-2天手工去雄，保留穗中部10个小穗、每个小穗外侧2个小花，套袋隔离外来花粉；
第二步，授玉米粉
授玉米粉前1-2小时，将去雄的小麦穗浸入已经调好水温在50-58度的水浴锅中7-15秒，取出自然风干，待柱头恢复蓬松绒毛状态后，授以新鲜玉米粉；
第三步，成胚
授粉后第二天，以75ppm2,4-二氯苯氧乙酸+50ppm2,5-二氯-6-甲氧基苯甲酸水溶液处理已经授粉的小麦穗，15-18天后，在解剖镜下剥取其中幼胚，进入幼胚拯救程序。
其附加技术特征为：所述水浴锅的水温为54度，去雄的小麦穗浸入已经调好水温在54度的水浴锅中10秒。
本发明所提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，是以小麦与玉米等其它禾本科植物杂交为手段，以谋求获得小麦单倍体或远缘杂交种为目的的育种操作。小麦x玉米杂交属科内种间远缘杂交，存在对异源花粉的识别机制，常规条件下的成功率低。温水杀雄和温水诱导多胚实验中，温水处理作为杀雄手段或诱导多胚的方法，难以掌握，效果不好。但有一个意外收获，温水处理后，小麦x玉米远缘杂交的成胚率明显提高。经初步验证，其机制为，温水洗脱了小麦柱头上的可溶性糖，洗脱量12.5±5.8ug糖/mg干柱头，较常温水的洗脱量6.2±3.2ug/mg提高2倍，降低了小麦柱头对玉米花粉的识别能力。而温水对可溶性蛋白质的洗脱仅为常温水的1.05倍，超过56度或者15秒钟可杀死小麦柱头。本发明所提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，利用超过室温的最佳温度为54度的温水处理去雄后的小麦穗10秒钟，大大提高小麦×玉米杂交授粉成功率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法做进一步详细说明。
实施例1
本发明提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，包括下列步骤：
第一步，小麦去雄
小麦开花前1天手工去雄，保留穗中部10个小穗、每个小穗外侧2个小花，套袋隔离外来花粉；
第二步，授玉米粉
授玉米粉前1小时，将去雄的小麦穗浸入已经调好水温在50度的水浴锅中15秒，取出自然风干，待柱头恢复蓬松绒毛状态后，授以新鲜玉米粉；
第三步，成胚
授粉后第二天，以75ppm2,4-二氯苯氧乙酸+50ppm2,5-二氯-6-甲氧基苯甲酸水溶液处理已经授粉的小麦穗，15天后，在解剖镜下剥取其中幼胚，进入幼胚拯救程序。
实施例2
本发明提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，包括下列步骤：
第一步，小麦去雄
小麦开花前1.5天手工去雄，保留穗中部10个小穗、每个小穗外侧2个小花，套袋隔离外来花粉；
第二步，授玉米粉
授玉米粉前1.5小时，将去雄的小麦穗浸入已经调好水温在54度的水浴锅中10秒，取出自然风干，待柱头恢复蓬松绒毛状态后，授以新鲜玉米粉；
第三步，成胚
授粉后第二天，以75ppm2,4-二氯苯氧乙酸+50ppm2,5-二氯-6-甲氧基苯甲酸水溶液处理已经授粉的小麦穗，16天后，在解剖镜下剥取其中幼胚，进入幼胚拯救程序。
实施例3
本发明提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，包括下列步骤：
第一步，小麦去雄
小麦开花前2天手工去雄，保留穗中部10个小穗、每个小穗外侧2个小花，套袋隔离外来花粉；
第二步，授玉米粉
授玉米粉前2小时，将去雄的小麦穗浸入已经调好水温在58度的水浴锅中7秒，取出自然风干，待柱头恢复蓬松绒毛状态后，授以新鲜玉米粉；
第三步，成胚
授粉后第二天，以75ppm2,4-二氯苯氧乙酸+50ppm2,5-二氯-6-甲氧基苯甲酸水溶液处理已经授粉的小麦穗，18天后，在解剖镜下剥取其中幼胚，进入幼胚拯救程序。
附表1为最优温度筛选实验。参照谷子温水杀雄方法，选择50-60℃温水处理去雄后1-2天的小麦穗，处理时间10秒，同天授粉不处理的相同组合作对照，材料为应用杂交组合良星99x邯4589。结果表明50-56℃均能是成胚率提高，最佳处理温度为54℃，效果最好。其中，ck为不处理的对照。水浴锅温度控制精度±0.5℃，环境对其波动范围有一定影响，所以每2℃进行试验处理。处理时间：上午9点左右，授玉米粉之前1-2小时。58℃处理的已经有部分被烫死，无胚产生，与对照比增长率为-100%，60℃时已完全烫死，无数据。
附表1
附表2为组合间成胚率比较实验。以恒温54℃温水、10秒进行试验重复，不同组合平均成胚率提高148%，以同天授粉常温水处理的相同组合作为对照（ck）。
附表2
附表3为可溶性总糖实验。准备好20株小麦去雄材料，每株去雄20小花。
取20个早1天去雄的柱头+子房，放入2.0mlep管中，将预先加热到54度、室温的水1000ul加入ep管中，用移液器上下吹吸10次，用时10秒，将水吸出，全部转移到20ml试管中，加入80%（v/v）硫酸配制的2%（g/v）蒽酮试剂4ml，沸水浴加热5分钟，同时以100ug/ml标准葡萄糖为标准曲线，水为对照，冷却后625nm比色，重复10次。表中糖含量为雌蕊经水洗脱下来的糖重量而非雌蕊实际糖含量。
本发明所提供的提高小麦×玉米杂交授粉成功率的温水浸泡柱头法，不仅限于上述实施例，凡在本发明基础上所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。