本发明属于植物组织保存技术领域，具体涉及一种藏红花球茎玻璃化液氮低温保存方法。
背景技术：
超低温保存是上世纪70年代发展起来的一项现代种质资源离体保存技术。通常在液氮中保存，被保存材料细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止，处在相对稳定的生物学状态，达到长期保存种质的目的，超低温保存是目前唯一不需要连续继代的中长期保存方式。玻璃化法超低温保存是将细胞或组织置于由一定比例的渗透性和非渗透性保护剂组成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足够快的降温速率下固化成非结晶的玻璃化态，并以这种玻璃态在低温下保存。玻璃化法因操作简单快捷，成本低，适宜保存种类广泛，保存材料遗传性稳定，保存效果好等优点，是近十年来用于优良种质资源中长期保存的首选方法。
藏红花别名番红花、西红花，是一种鸢尾科番红花属的多年生花卉，也是一种常见的香料。是西南亚原生种，最早由希腊人人工栽培。主要分布在欧洲、地中海及中亚等地，明朝时传入中国，《本草纲目》将它列入药物之类，目前在中国的江浙及华北等地都有栽培，是一种名贵的中药材。可从其柱头中提取香料和藏红花甙、藏红花苦甙和藏红花醛等主要天然色素，藏红花甙是对冠心病具有显著疗效的活性成分，临床用于治疗胸痹心痛、心绞痛，疗效显著，有效剂量小，安全性大，具有显著的经济和社会效益，同时其柱头在亚洲和欧洲作为药用，有镇静、祛痰、解痉作用，用于胃病、调经、麻疹、发热、黄胆、肝脾肿大等的治疗。
但是藏红花只有柱头可入药，因适宜栽培的地区有限、条件苛刻等因素，产量极低，资源极其有限，致使其价格昂贵，一直被誉为“植物黄金”。由于藏红花不能进行有性生殖，只能通过球茎进行无性繁殖，且栽培条件下其球茎退化现象严重，导致种质资源严重缺乏。
技术实现要素：
针对上述藏红花球茎退化现象严重，导致种质资源严重缺乏的问题，本发明提供一种藏红花球茎玻璃化液氮低温保存方法，其目的在于：可以长期保存藏红花的种质，避免栽培过程中球茎退化导致无种质资源可用。
本发明采用的技术方案如下：
一种藏红花球茎玻璃化液氮低温保存方法，其特征在于，包括如下步骤：
[1]种源准备：选出生长良好的球茎，将选出的球茎用清水洗净，杀菌，在阴暗通风处摊开晾干；
[2]预培养：将经过步骤[1]处理的球茎接种到预培养基中，培养10天，培养温度为26-30℃；
[3]装载：在室温下用50％的玻璃化溶液处理经步骤[2]培养后的球茎2-2.5小时；
[4]脱水及冻存：脱水处理后，在0℃下用50％玻璃化溶液处理10分钟，然后更换玻璃化溶液，放入液氮中保存。
采用该技术方案后，藏红花球茎内的植物组织都被玻璃化而冷冻保存在液氮中，酶和微生物的活性都降到最低。当需要的时候，只需要进行复苏就能用来作为种质繁殖新的藏红花植株。
优选的，步骤[1]选用的球茎为利用植物组织培养生产的无损伤的藏红花球茎，所述球茎的重量≥5g。选择合适的球茎可以保证复苏后再进行组织培养的发芽率。
优选的，步骤[1]所述杀菌过程为用配制好的质量百分比浓度为0.08％的高锰酸钾杀菌溶液浸没球茎25分钟，然后清水洗去表面残留杀菌液。
优选的，步骤[2]所述培养基为改良ms培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸2.5mg/l、6-糠氨基嘌呤1.5mg/l、萘乙酸2.5mg/l、植物凝胶2.5g/l、蔗糖65g/l。
优选的，步骤[3]及步骤[4]所述玻璃化溶液为含有500g/l丙三醇，100g/l乙二醇，250g/l二甲基亚砜，0.6mol/l蔗糖和0.5g/l石墨烯量子点的ms培养液。该配方的玻璃化溶液对植物组织的玻璃化效果良好，石墨烯量子点作为外源物质对植物玻璃化超低温保存起到促进作用。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1.藏红花球茎内的植物组织都被玻璃化而冷冻保存在液氮中，酶和微生物的活性都降到最低。当需要的时候，只需要进行复苏就能用来作为种质繁殖新的藏红花植株。
2.选择合适健康的球茎，再辅以杀菌操作和培养基的培养，可以保证冷冻复苏后，再次对球茎进行组织培养可以有很高的发芽率。
3.玻璃化溶液对植物组织的玻璃化效果良好，石墨烯量子点作为外源物质对植物玻璃化超低温保存起到促进作用。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本发明的具体实施方式为：
[1]种源准备：选出生长良好的球茎，球茎为利用植物组织培养生产的无损伤的藏红花球茎，所述球茎的重量≥5g；将选出的球茎用清水洗净，然后用配制好的质量百分比浓度为0.08％的高锰酸钾杀菌溶液浸没球茎25分钟，然后清水洗去表面残留杀菌液，在阴暗通风处摊开晾干；
[2]预培养：将经过步骤[1]处理的球茎接种到预培养基中，培养10天，培养温度为26-30℃，培养基为改良ms培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸2.5mg/l、6-糠氨基嘌呤1.5mg/l、萘乙酸2.5mg/l、植物凝胶2.5g/l、蔗糖65g/l；
[3]装载：在室温下用50％的玻璃化溶液处理经步骤[2]培养后的球茎2-2.5小时，玻璃化溶液为含有500g/l丙三醇，100g/l乙二醇，250g/l二甲基亚砜，0.6mol/l蔗糖和0.5g/l石墨烯量子点的ms培养液；
[4]脱水及冻存：脱水处理后，在0℃下用50％玻璃化溶液处理10分钟，然后更换玻璃化溶液，放入液氮中保存。
以上所述实施例仅表达了本技术的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本技术保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本技术技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本技术的保护范围。