本发明涉及一种印度块菌接种方法，尤其是一种华山松种子育苗接种印度块菌的方法，属于野生菌种植技术领域。
背景技术：
印度块菌(tuberindicum)，又名松露，俗名猪拱菌、无娘果等，被称为“国际第一名菌”。印度块菌富含17种氨基酸、8种维生素、适量的蛋白质、以及雄性酮、甾醇、鞘脂、脂肪酸、氨基酸及微量元素等50余种生理活性成分，并含有人体自身不能合成的8种氨基酸、锌、锰、铁、钙、磷、硒等必需营养素，具有增强免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、疗痔等药用价值，具有抗癌活性，对癌细胞有一定的抑制作用，可以激发脑细胞活力。由于野生印度块菌产量低，需要依靠人工栽培来满足日益增长的市场需求，而有效的接种方法不仅是印度块菌菌根化生产的前提，也是块菌栽培成败的关键。
华山松（pinusarmandiifranch.）是松科中的著名常绿乔木品种之一，喜温凉湿润气候，不耐寒及湿热，稍耐干燥瘠薄。出可供建筑、家具及木纤维工业原料用材和化工原料外，还有较高的药用保健价值。松枝可治“黄水”病、水肿病、虫病，松香可治“龙”病、风湿性关节炎等，松球果可治疗咳嗽痰喘、气管炎、咽喉疼痛，松针可治疗风湿关节痛、跌打瘀痛、流行性感冒、高血压等，松树皮可用于骨折、外伤出血，松花粉外用治疗痈疖毒疮、久溃不敛等。
目前，国内外虽有少量关于印度块菌的栽培接种技术，并一定程度地运用到人工栽培实践中，但多停留在探索阶段，技术还远不成熟。华山松作为印度块菌的宿主植物之一，在印度块菌的人工栽培中受到关注，但现有华山松接种技术尚不成熟，接种效果不理想，接种成功率较低，导致印度块菌栽培的成本增加、产量受限，难以推广应用，需要研究有效的华山松印度块菌人工接种方法。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是针对现有印度块菌人工栽培中接种成功率低、成本高等不足，提出一种华山松种子育苗接种印度块菌的方法，通过宿主植物幼苗培育和营造菌种生长环境，提高印度块菌接种成功率，降低生产成本。
为解决上述技术问题，本发明提供一种华山松种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取优质华山松种子，用无菌水清洗干净，然后放入浓度0.05-0.1%的多菌灵中浸泡15-30min进行消毒灭菌处理，取出后用无菌水冲洗2-3次，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2-3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度50-80目的细末状，再按1：5-10的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（3）制备接种基质：按生荒土20-40%、河沙5-15%、珍珠岩5-15%、火烧土15-25%、松树菌根土30-40%的重量比，取干燥的生荒土、河沙、珍珠岩、火烧土，粉碎至粒度小于等于4mm后与松散的松树菌根土混合均匀，再调整含水率为40-50%（即加水调整），得到接种基质备用；
（4）制作苗床：选择保湿、保温、排灌条件好的温室大棚，在大棚中设置苗床，苗床间留步道，然后将步骤（3）制备好的接种基质填实在苗床里；
（5）播种育苗：取步骤（1）中预处理后的华山松种子，将其浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中24-36h，取出晾干后播入步骤（4）制作的苗床中接种基质里，播种后在上面铺盖一层细松林土，播种深度1-2cm；保持温室大棚内适当的温度、湿度和光照，不定期对苗床浇水、除草，保持接种基质的湿润，使其表土不裂开，直至华山松出苗长至苗高10-15cm，得到华山松幼苗；
（6）菌根苗培育：从苗床中取出步骤（5）培育的华山松幼苗，将每棵断其主根后，再次浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中接种3-5min，取出后在温室大棚内移栽，用步骤（3）制备好的接种基质单株装袋进苗，保持温室大棚内适当的温度、湿度和光照，进行浇水、松土、除草和施肥苗期管理，保持接种基质湿度40-60％，直至华山松幼苗长至苗高100-120cm，，即得到印度块菌菌根苗。
所述步骤（5）中，种子出芽后，每月施用步骤（2）制备的块菌菌种液2-3次，直至华山松出苗长成幼苗，以增强印度块菌的接种效果。
所述步骤（3）制备的接种基质的ph值为6.7-7.5（采用常规方法调整），宜为微酸至中性，以利于华山松种子的出苗、生长和菌种的生长。
所述步骤1.3中制备接种基质的松树菌根土是取自松林中伴生有印度块菌的华山松树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好。松类育苗不能缺少菌根菌，如缺少松树菌根土时，接种后可能会生长不良。
所述步骤（4）中苗床的长、宽、深分别为2-3m、1-1.5m、1-1.5m，苗床间的步道宽40-50cm。
所述步骤（5）中华山松种子的播种时间宜在每年的3-4月，以提高种子的出苗率和接种的效果；播种密度为每平方米250-300粒。
所述步骤（5）中铺盖的细松林土为普通华山松林中的表层土壤，经消毒灭菌后，粉碎至粒度2mm以下使用，所铺盖的细松林土一般厚5-10mm。
所述步骤（5）和（6）中，温室大棚内温度为25-30℃、湿度为75-85%、光照度为25000-30000lux。
所述步骤（5）中，除草遵循除早、除小、除了的原则，做到床面和步道无杂草，除草时防止松动苗根，每次浇水早、晚进行并浇透。
所述步骤（5）中，华山松幼苗长到5厘米左右开始间苗、补苗，在阴雨天进行，间苗、补苗后随即浇水。
本发明中接种基质的成分配比、接种时间等各参数均可根据实际需要具体确定，保证良好的接种效果即可。
本发明采用带有印度块菌菌种和恰当组分的接种基质，利用特殊的接种育苗方法，通过多环节的多重菌种布施，为印度块菌菌种在松树树苗根部的宿生营造了良好的环境，大大提高了接种的成功率，降低了人工种植印度块菌的成本，可使印度块菌的接种率达到87%以上。具有方法可靠、接种率高、成本低等优点，适宜广泛推广使用。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详尽描述。实施例中未注明的技术或产品，均为现有技术或可以通过购买获得的常规产品。
实施例1：本华山松种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取优质华山松种子，用无菌水清洗干净，然后放入浓度0.05%的多菌灵中浸泡30min进行消毒灭菌处理，取出后用无菌水冲洗2次，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度80目的细末状，再按1：10的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（3）制备接种基质：按生荒土20%、河沙15%、珍珠岩15%、火烧土20%、松树菌根土30%的重量比，取干燥的生荒土、河沙、珍珠岩、火烧土，粉碎至粒度2mm以下后与取自松林中伴生有印度块菌的华山松树下表层土壤的松散松树菌根土混合均匀，再调整含水率为40%、ph值为6.7，得到接种基质备用；
（4）制作苗床：选择保湿、保温、排灌条件好的温室大棚，按40cm宽的步道，间隔在大棚中设置长、宽、深分别为2m、1m、1m的苗床，然后将步骤（3）制备好的接种基质填实在苗床里；
（5）播种育苗：每年的3月，取步骤（1）中预处理后的华山松种子，将其浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中24h，取出晾干后，按每平方米250粒的播种密度播入步骤（4）制作的苗床中接种基质里，播种后在上面铺盖一层厚10mm、经消毒灭菌和粉碎至1.5mm的华山松林中表层细松林土，播种深度1cm；控制温室大棚内温度25℃、湿度75%、光照量30000lux，不定期对苗床浇水、除草，保持接种基质的湿润，使其表土不裂开，种子出芽后，每月施用步骤（2）制备的块菌菌种液2次，直至华山松出苗长至苗高10cm，得到华山松幼苗；除草遵循除早、除小、除了的原则，做到床面和步道无杂草，除草时防止松动苗根，每次浇水早、晚进行并浇透；幼苗长到5厘米左右开始间苗、补苗，在阴雨天进行，间苗、补苗后随即浇水；
（6）菌根苗培育：从苗床中取出步骤（5）培育的华山松幼苗，将每棵断其主根后，再次浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中接种3min，取出后在温室大棚内移栽，用步骤（3）制备好的接种基质单株装袋进苗，控制温室大棚内温度25℃、湿度75%、光照度30000lux，进行浇水、松土、除草和施肥苗期管理，保持接种基质湿度40％，直至华山松幼苗长至苗高100cm，，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为82%，种植后第8年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3.5kg/亩提高到8kg/亩，且块菌促进了华山松的生长发育，同时华山松又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例2：本华山松种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取优质华山松种子，用无菌水清洗干净，然后放入浓度0.1%的多菌灵中浸泡15min进行消毒灭菌处理，取出后用无菌水冲洗3次，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2遍后置于粉碎机中粉碎至粒度50目的细末状，再按1：5的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（3）制备接种基质：按生荒土40%、河沙5%、珍珠岩5%、火烧土20%、松树菌根土30%的重量比，取干燥的生荒土、河沙、珍珠岩、火烧土，粉碎至粒度4mm以下后与取自松林中伴生有印度块菌的华山松树下表层土壤的松散松树菌根土混合均匀，再调整含水率为50%、ph值为7.5，得到接种基质备用；
（4）制作苗床：选择保湿、保温、排灌条件好的温室大棚，按50cm宽的步道，间隔在大棚中设置长、宽、深分别为3m、1.5m、1.5m的苗床，然后将步骤（3）制备好的接种基质填实在苗床里；
（5）播种育苗：每年的4月，取步骤（1）中预处理后的华山松种子，将其浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中36h，取出晾干后，按每平方米300粒的播种密度播入步骤（4）制作的苗床中接种基质里，播种后在上面铺盖一层厚5mm、经消毒灭菌和粉碎至2mm的华山松林中表层细松林土，播种深度2cm；控制温室大棚内温度30℃、湿度85%、光照量25000lux，不定期对苗床浇水、除草，保持接种基质的湿润，使其表土不裂开，种子出芽后，每月施用步骤（2）制备的块菌菌种液3次，直至华山松出苗长至苗高15cm，得到华山松幼苗；除草遵循除早、除小、除了的原则，做到床面和步道无杂草，除草时防止松动苗根，每次浇水早、晚进行并浇透；幼苗长到5厘米左右开始间苗、补苗，在阴雨天进行，间苗、补苗后随即浇水；
（6）菌根苗培育：从苗床中取出步骤（5）培育的华山松幼苗，将每棵断其主根后，再次浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中接种5min，取出后在温室大棚内移栽，用步骤（3）制备好的接种基质单株装袋进苗，控制温室大棚内温度30℃、湿度85%、光照度28000lux，进行浇水、松土、除草和施肥苗期管理，保持接种基质湿度60％，直至华山松幼苗长至苗高120cm，，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为90%，种植后第5年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3.5kg/亩提高到14kg/亩，且块菌促进了华山松的生长发育，同时华山松又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例3：本华山松种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取优质华山松种子，用无菌水清洗干净，然后放入浓度0.08%的多菌灵中浸泡20min进行消毒灭菌处理，取出后用无菌水冲洗3次，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2遍后置于粉碎机中粉碎至粒度60目的细末状，再按1：7的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（3）制备接种基质：按生荒土30%、河沙10%、珍珠岩10%、火烧土15%、松树菌根土35%的重量比，取干燥的生荒土、河沙、珍珠岩、火烧土，粉碎至粒度3mm以下后与取自松林中伴生有印度块菌的华山松树下表层土壤的松散松树菌根土混合均匀，再调整含水率为45%、ph值为6.8，得到接种基质备用；
（4）制作苗床：选择保湿、保温、排灌条件好的温室大棚，按45cm宽的步道，间隔在大棚中设置长、宽、深分别为2.3m、1.2m、1.3m的苗床，然后将步骤（3）制备好的接种基质填实在苗床里；
（5）播种育苗：每年的4月，取步骤（1）中预处理后的华山松种子，将其浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中30h，取出晾干后，按每平方米280粒的播种密度播入步骤（4）制作的苗床中接种基质里，播种后在上面铺盖一层厚8mm、经消毒灭菌和粉碎至1.8mm的华山松林中表层细松林土，播种深度1.5cm；控制温室大棚内温度28℃、湿度80%、光照量25000lux，不定期对苗床浇水、除草，保持接种基质的湿润，使其表土不裂开，种子出芽后，每月施用步骤（2）制备的块菌菌种液3次，直至华山松出苗长至苗高12cm，得到华山松幼苗；除草遵循除早、除小、除了的原则，做到床面和步道无杂草，除草时防止松动苗根，每次浇水早、晚进行并浇透；幼苗长到5厘米左右开始间苗、补苗，在阴雨天进行，间苗、补苗后随即浇水；
（6）菌根苗培育：从苗床中取出步骤（5）培育的华山松幼苗，将每棵断其主根后，再次浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中接种4min，取出后在温室大棚内移栽，用步骤（3）制备好的接种基质单株装袋进苗，控制温室大棚内温度28℃、湿度80%、光照度25000lux，进行浇水、松土、除草和施肥苗期管理，保持接种基质湿度50％，直至华山松幼苗长至苗高105cm，，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为87%，种植后第6年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3.5kg/亩提高到12kg/亩，且块菌促进了华山松的生长发育，同时华山松又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例4：本华山松种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取优质华山松种子，用无菌水清洗干净，然后放入浓度0.06%的多菌灵中浸泡25min进行消毒灭菌处理，取出后用无菌水冲洗3次，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度70目的细末状，再按1：8的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（3）制备接种基质：按生荒土24%、河沙13%、珍珠岩12%、火烧土18%、松树菌根土33%的重量比，取干燥的生荒土、河沙、珍珠岩、火烧土，粉碎至粒度2.5mm以下后与取自松林中伴生有印度块菌的华山松树下表层土壤的松散松树菌根土混合均匀，再调整含水率为43%、ph值为6.9，得到接种基质备用；
（4）制作苗床：选择保湿、保温、排灌条件好的温室大棚，按50cm宽的步道，间隔在大棚中设置长、宽、深分别为3m、1.5m、1.5m的苗床，然后将步骤（3）制备好的接种基质填实在苗床里；
（5）播种育苗：每年的4月，取步骤（1）中预处理后的华山松种子，将其浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中32h，取出晾干后，按每平方米260粒的播种密度播入步骤（4）制作的苗床中接种基质里，播种后在上面铺盖一层厚7mm、经消毒灭菌和粉碎至1.6mm的华山松林中表层细松林土，播种深度1.6cm；控制温室大棚内温度26℃、湿度80%、光照量26000lux，不定期对苗床浇水、除草，保持接种基质的湿润，使其表土不裂开，种子出芽后，每月施用步骤（2）制备的块菌菌种液3次，直至华山松出苗长至苗高11cm，得到华山松幼苗；除草遵循除早、除小、除了的原则，做到床面和步道无杂草，除草时防止松动苗根，每次浇水早、晚进行并浇透；幼苗长到5厘米左右开始间苗、补苗，在阴雨天进行，间苗、补苗后随即浇水；
（6）菌根苗培育：从苗床中取出步骤（5）培育的华山松幼苗，将每棵断其主根后，再次浸泡在步骤（2）制备好的印度块菌菌种液中接种4min，取出后在温室大棚内移栽，用步骤（3）制备好的接种基质单株装袋进苗，控制温室大棚内温度27℃、湿度80%、光照度26000lux，进行浇水、松土、除草和施肥苗期管理，保持接种基质湿度43％，直至华山松幼苗长至苗高105cm，，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为82%，种植后第7年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3.5kg/亩提高到10kg/亩，且块菌促进了华山松的生长发育，同时华山松又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
上面对本发明的技术内容作了说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下对本发明的技术内容做出各种变化，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。