本发明涉及一种印度块菌接种方法，尤其是一种板栗树种子育苗接种印度块菌的方法，属于野生菌种植技术领域。
背景技术：
印度块菌(tuberindicum)，又名松露，俗名猪拱菌、无娘果等，被称为“国际第一名菌”。印度块菌富含17种氨基酸、8种维生素、适量的蛋白质、以及雄性酮、甾醇、鞘脂、脂肪酸、氨基酸及微量元素等50余种生理活性成分，并含有人体自身不能合成的8种氨基酸、锌、锰、铁、钙、磷、硒等必需营养素，具有增强免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、疗痔等药用价值，具有抗癌活性，对癌细胞有一定的抑制作用，可以激发脑细胞活力。由于野生印度块菌产量低，需要依靠人工栽培来满足日益增长的市场需求，而有效的接种方法不仅是印度块菌菌根化生产的前提，也是块菌栽培成败的关键。
板栗树为乔木，可高达20米，树皮暗灰色，不规则深裂，有纵沟，皮上有许多黄灰色的圆形皮孔，主要栽培品种类型多达300余个以上。栗子中不仅含有大量淀粉，而且富含蛋白质、维生素等多种营养元素，素有“干果之王”的美称。栗子味道香甜可口，肉质美味，是一种价廉物美、富有营养的滋补品及补养的良药。据记载公元前栗树在我国就已广有栽培，早为人民食用。
目前，国内外虽有少量关于印度块菌的栽培接种技术，并一定程度地运用到人工栽培实践中，但多停留在探索阶段，技术还远不成熟。板栗树作为印度块菌的宿主植物之一，在印度块菌的人工栽培中受到关注，但现有板栗树接种效果也并不理想，接种成功率较低，导致印度块菌栽培的成本增加、产量受限，需要研究有效的板栗树印度块菌人工接种方法。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是针对现有印度块菌人工栽培中接种成功率低、成本高等不足，提出一种板栗树种子育苗接种印度块菌的方法，通过宿主植物幼苗培育和营造菌种生长环境，提高印度块菌接种成功率，降低生产成本。
为解决上述技术问题，本发明提出一种板栗树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：
（1）种子预处理：取0-4℃下冰箱内保藏3-4个月的云南板栗种子，在无菌条件下进行消毒处理：首先用浓度30-40％的h2o2液体浸泡1-1.5小时，擦洗后用无菌水冲洗干净；然后放到浓度30-35%的乙醇中进行第二次消毒10-20min，用无菌水冲洗干净；再放入浓度1.5-5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒15-30min；最后用无菌水冲洗2-3次，得到预处理后的板栗种子，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌根液：取伴生有印度块菌菌种的板栗树树根根须，置于粉碎机中粉碎至粒度50-80目的细末状，再按1：3-5的体积比加入无菌水，得到块菌菌根液备用；
（3）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，清洗干净后用无菌水冲洗2-3次，然后置于粉碎机中粉碎至粒度50-80目的细末状，再按1：5-10的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（4）制备育苗基质：按1：0.8-1：7-9的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土粉碎至粒度小于等于4mm并混合均匀，再加入步骤（2）制备的块菌菌根液，使混合料含水率达45-55％，得到育苗基质备用；
（5）制备接种基质：按1：0.8-1：3-4：2-4的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土、板栗树菌根土粉碎至粒度小于等于4mm并混合均匀，适量拌入水使含水率达到40-50%，得到接种基质备用；
（6）播种育苗：在温室大棚中，控制适当的温度、湿度、光照度，将步骤（1）中预处理后的板栗种子，按3-5cm的深度播入步骤（4）得到的育苗基质中，再按常规方法进行浇水、除草等育苗管理，至种子出苗后1-2个月，得到板栗树幼苗；
（7）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（6）所得板栗树幼苗，将板栗树幼苗的根系浸入步骤（3）制备的印度块菌菌种液中至少3.5min，取出后植入步骤（5）所得接种基质中，控制温室大棚内适当的温度、湿度、光照度，按常规方法进行浇水、除草等苗期管理，并每月对幼苗施步骤（3）制备的块菌菌种液2-3次，经4-6个月的培育，即得到印度块菌菌根苗。
所述板栗种子是生长在海拔1500m以上区域，产量高、坚果大、连续结果能力强的单株板栗树的种子。
所述步骤（4）和（5）制备的育苗基质和接种基质的ph值为6.7-7.5，为微酸或中性，以利于板栗树种子的出苗、生长和菌种的生长。
所述步骤（5）中制备接种基质的板栗树菌根土是取自板栗树林中伴生有印度块菌的板栗树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好。育苗缺少松树菌根土时，接种后可能导致生长不良。
所述步骤（6）中，种子出芽后，每月施用步骤（3）制备的块菌菌种液2-3次，以增强印度块菌的接种效果。
所述步骤（7）中板栗树幼苗植入接种基质的密度为每平方米100-300株。
所述步骤（6）中板栗树种子的播种时间宜在每年的2-3月。
所述步骤（6）和（7）中，控制温室大棚内的温度为20-26℃、湿度为75-85%、光照度为20000-28000lux。
本发明中育苗基质和接种基质的成分配比、接种基质湿度、幼苗种植密度、温室大棚内的温度和湿度等各参数均可根据实际需要具体确定，保证良好的接种效果即可。
本发明采用带有印度块菌菌种和恰当组分的育苗基质、接种基质，利用特殊的接种育苗方法，通过多环节的多重菌种布施，为印度块菌菌种在板栗树苗根部的宿生营造了良好的环境，大大提高了接种的成功率，降低了人工种植印度块菌的成本，可使印度块菌的接种率达到87%以上。菌根苗移栽种植后5-7年进入收获期，单产8kg/亩以上。具有方法可靠、接种率高、成本低等优点，适宜广泛推广使用。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详尽描述。实施例中未注明的技术或产品，均为现有技术或可以通过购买获得的常规产品。
实施例1：本板栗树种子育苗接种印度块菌的方法的具体步骤如下：
（1）种子预处理：取生长在云南地区海拔1500m以上区域、产量高、坚果大、连续结果能力强的单株云南板栗树的种子，在0℃下冰箱内保藏4个月后进行无菌消毒处理：首先用浓度30％的h2o2液体浸泡1.5小时，擦洗后用无菌水冲洗干净；然后放到浓度30%的乙醇中进行第二次消毒20min，用无菌水冲洗干净；再放入浓度1.5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒30min；最后用无菌水冲洗2次，得到预处理后的板栗种子，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌根液：取伴生有印度块菌菌种的板栗树树根根须，置于粉碎机中粉碎至粒度80目的细末状，再按1：5的体积比加入无菌水，得到块菌菌根液备用；
（3）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，清洗干净后用无菌水冲洗2次，然后置于粉碎机中粉碎至粒度80目的细末状，再按1：10的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（4）制备育苗基质：按1：0.8：7的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土粉粉碎至粒度2mm以下并混合均匀，再加入步骤（2）制备的块菌菌根液，使混合料含水率达45％，调整育苗基质的ph值为7.0，得到育苗基质备用；
（5）制备接种基质：按1：0.8：3：2的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土、板栗树菌根土粉碎至粒度4mm以下并混合均匀，适量拌入水使含水率达到50%，调整接种基质的ph值为7.0，得到接种基质备用；所用板栗树菌根土取自板栗树林中伴生有印度块菌的板栗树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好；
（6）播种育苗：每年的2月份，在温室大棚中，控制棚内温度20℃、湿度75%、光照度20000lux，将步骤（1）中预处理后的板栗种子，按5cm的深度播入步骤（4）得到的育苗基质中，再按常规方法进行浇水、除草等育苗管理，种子出芽后，每月再施用步骤（3）制备的块菌菌种液2次，保持育苗基质45%的含水率，至种子出苗后1个月，得到板栗树幼苗；
（7）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（6）所得板栗树幼苗，将板栗树幼苗的根系浸入步骤（3）制备的印度块菌菌种液中3.5min，取出后按每平方米100株的密度植入步骤（5）所得接种基质中，控制温室大棚内温度20℃、湿度75%、光照度20000lux，按常规方法进行浇水、除草等苗期管理，并每月对幼苗施步骤（3）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质50%的含水率，经6个月的培育，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，由于采用上述技术方案，块菌栽培与土壤、气候条件关系密切。通过本发明能够使块菌的单产由2kg/亩提高到8kg/亩，种植后到第7年进入收获期；且块菌可以促进板栗树的生长发育，同时板栗树又可以促进块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例2：本板栗树种子育苗接种印度块菌的方法的具体步骤如下：
（1）种子预处理：取生长在云南地区海拔1500m以上区域、产量高、坚果大、连续结果能力强的单株云南板栗树的种子，在4℃下冰箱内保藏4个月后进行无菌消毒处理：首先用浓度40％的h2o2液体浸泡1小时，擦洗后用无菌水冲洗干净；然后放到浓度35%的乙醇中进行第二次消毒10min，用无菌水冲洗干净；再放入浓度5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒15min；最后用无菌水冲洗3次，得到预处理后的板栗种子，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌根液：取伴生有印度块菌菌种的板栗树树根根须，置于粉碎机中粉碎至粒度50目的细末状，再按1：3的体积比加入无菌水，得到块菌菌根液备用；
（3）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，清洗干净后用无菌水冲洗３次，然后置于粉碎机中粉碎至粒度50目的细末状以下细末状，再按1：5的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（4）制备育苗基质：按1：1：9的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土粉碎至粒度小于等于4mm并混合均匀，再加入步骤（2）制备的块菌菌根液，使混合料含水率达55％，调整育苗基质的ph值为6.7，得到育苗基质备用；
（5）制备接种基质：按1：1：4：4的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土、板栗树菌根土粉碎至粒度小于等于4mm并混合均匀，适量拌入水使含水率达到40%，调整接种基质的ph值为6.7，得到接种基质备用；所用板栗树菌根土取自板栗树林中伴生有印度块菌的板栗树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好；
（6）播种育苗：每年的3月份，在温室大棚中，控制棚内温度26℃、湿度85%、光照度28000lux，将步骤（1）中预处理后的板栗种子，按3cm的深度播入步骤（4）得到的育苗基质中，再按常规方法进行浇水、除草等育苗管理，种子出芽后，每月再施用步骤（3）制备的块菌菌种液3次，保持育苗基质湿度55％，至种子出苗后2个月，得到板栗树幼苗；
（7）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（6）所得板栗树幼苗，将板栗树幼苗的根系浸入步骤（3）制备的印度块菌菌种液中15min，取出后按每平方米300株的密度植入步骤（5）所得接种基质中，控制温室大棚内温度26℃、湿度85%、光照度28000lux，按常规方法进行浇水、除草等苗期管理，并每月对幼苗施步骤（3）制备的块菌菌种液2次，保持接种基质湿度40％，经4个月的培育，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，由于采用上述技术方案，块菌栽培与土壤、气候条件关系密切。通过本发明能够使块菌的单产由2kg/亩提高到12kg/亩，种植后到第4年进入收获期；且块菌可以促进板栗树的生长发育，同时板栗树又可以促进块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例3：本板栗树种子育苗接种印度块菌的方法的具体步骤如下：
（1）种子预处理：取生长在云南地区海拔1500m以上区域、产量高、坚果大、连续结果能力强的单株云南板栗树的种子，在2℃下冰箱内保藏3.5个月后进行无菌消毒处理：首先用浓度35％的h2o2液体浸泡1.5小时，擦洗后用无菌水冲洗干净；然后放到浓度32%的乙醇中进行第二次消毒12min，用无菌水冲洗干净；再放入浓度3%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒20min；最后用无菌水冲洗3次，得到预处理后的板栗种子，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌根液：取伴生有印度块菌菌种的板栗树树根根须，置于粉碎机中粉碎至粒度60目的细末状，再按1：4的体积比加入无菌水，得到块菌菌根液备用；
（3）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，清洗干净后用无菌水冲洗３次，然后置于粉碎机中粉碎至粒度70目的细末状，再按1：7的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（4）制备育苗基质：按1：0.9：8的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土粉碎至粒度3mm以下并混合均匀，再加入步骤（2）制备的块菌菌根液，使混合料含水率达50％，调整育苗基质的ph值为7.5，得到育苗基质备用；
（5）制备接种基质：按1：0.9：3.5：3的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土、板栗树菌根土粉碎至粒度3mm以下并混合均匀，适量拌入水使含水率达到45%，调整接种基质的ph值为7.5，得到接种基质备用；所用板栗树菌根土取自板栗树林中伴生有印度块菌的板栗树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好；
（6）播种育苗：每年的3月份，在温室大棚中，控制棚内温度25℃、湿度80%、光照度25000lux，将步骤（1）中预处理后的板栗种子，按4cm的深度播入步骤（4）得到的育苗基质中，再按常规方法进行浇水、除草等育苗管理，种子出芽后，每月再施用步骤（3）制备的块菌菌种液2次，保持育苗基质50%的含水率，至种子出苗后1.5个月，得到板栗树幼苗；
（7）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（6）所得板栗树幼苗，将板栗树幼苗的根系浸入步骤（3）制备的印度块菌菌种液中8min，取出后按每平方米200株的密度植入步骤（5）所得接种基质中，控制温室大棚内温度25℃、湿度80%、光照度25000lux，按常规方法进行浇水、除草等苗期管理，并每月对幼苗施步骤（3）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质45%的含水率，经5个月的培育，即得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，由于采用上述技术方案，块菌栽培与土壤、气候条件关系密切。通过本发明能够使块菌的单产由2kg/亩提高到9kg/亩，种植后到第5年进入收获期；且块菌可以促进板栗树的生长发育，同时板栗树又可以促进块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
实施例4：本板栗树种子育苗接种印度块菌的方法的具体步骤如下：
（1）种子预处理：取生长在云南地区海拔1500m以上区域、产量高、坚果大、连续结果能力强的单株云南板栗树的种子，在3℃下冰箱内保藏3个月后进行无菌消毒处理：首先用浓度32％的h2o2液体浸泡1.2小时，擦洗后用无菌水冲洗干净；然后放到浓度32%的乙醇中进行第二次消毒16min，用无菌水冲洗干净；再放入浓度2%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒18min；最后用无菌水冲洗3次，得到预处理后的板栗种子，置于培养皿中备用；
（2）制备块菌菌根液：取伴生有印度块菌菌种的板栗树树根根须，置于粉碎机中粉碎至粒度70目的细末状，再按1：3.5的体积比加入无菌水，得到块菌菌根液备用；
（3）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，清洗干净后用无菌水冲洗2次，然后置于粉碎机中粉碎至粒度60目的细末状，再按1：8的体积比加入无菌水，得到印度块菌菌种液备用；
（4）制备育苗基质：按1：0.8：8的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土粉碎至粒度2.5mm以下并混合均匀，再加入步骤（2）制备的块菌菌根液，使混合料含水率达48％，调整育苗基质的ph值为6.9，得到育苗基质备用；
（5）制备接种基质：按1：0.8：3.5：4的重量比，取干燥的河沙、蛭石、生荒土、板栗树菌根土粉碎至粒度2.5mm以下并混合均匀，适量拌入水使含水率达到46%，调整接种基质的ph值为6.9，得到接种基质备用；所用板栗树菌根土取自板栗树林中伴生有印度块菌的板栗树下的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好；
（6）播种育苗：每年的2月份，在温室大棚中，控制棚内温度24℃、湿度75%、光照度26000lux，将步骤（1）中预处理后的板栗种子，按4cm的深度播入步骤（4）得到的育苗基质中，再按常规方法进行浇水、除草等育苗管理，种子出芽后每月再施用步骤（3）制备的块菌菌种液2次，保持育苗基质48%的含水率，至种子出苗后2个月，得到板栗树幼苗，增强印度块菌的接种效果；
（7）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（6）所得板栗树幼苗，将板栗树幼苗的根系浸入步骤（3）制备的印度块菌菌种液中15min，取出后按每平方米250株的密度植入步骤（5）所得接种基质中，控制温室大棚内温度24℃、湿度75%、光照度26000lux，按常规方法浇水、除草等苗期管理，并每月对幼苗施步骤（3）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质46%的含水率，经4.5个月的培育，得到印度块菌菌根苗。
本实施例通过采用本发明方法，由于采用上述技术方案，块菌栽培与土壤、气候条件关系密切。通过本发明能够使块菌的单产由2kg/亩提高到10kg/亩，种植后到第6年进入收获期；且块菌可以促进板栗树的生长发育，同时板栗树又可以促进块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。
上面对本发明的技术内容作了说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下对本发明的技术内容做出各种变化，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。