本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种水晶草的组培方法。
背景技术：
：水晶草为补血草属白花丹科植物，花较小，死后花仍不败，与勿忘我类似。水晶草花叶同生，茎高约10～50cm，喜欢阳光。多生长在山坡、崖壁、石缝和山路边。随着人们生活水平的提高，人们越来越喜欢给送亲朋好友送鲜花或干花，或是用鲜花或干花来装饰自己的屋子。水晶草的用量大大增加，使得水晶草供不应求。现有的水晶草繁殖采用种子繁殖，其繁殖较慢。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种水晶草的组培方法，用以提高水晶草组培苗的生根率和生根数。为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的离体组织置于0.05％～0.2％氯化汞溶液中消毒3～30分钟，然后用无菌水清洗0～5次；s2、脱分化：将脱毒的离体组织置于脱分化培养基上，在温度为15～28℃、光照强度为3000～8000lx、光照时间为8～16小时/天的条件下培养，得愈伤组织；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为15～28℃、光照强度为3000～8000lx、光照时间为8～16小时/天的条件下培养；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15～28℃、光照强度为3000～8000lx、光照时间为8～20小时/天的条件下培养10～20天，得生根苗；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值5～8、ec值500～25000μs/cm的营养土中，光照强度3000～20000lx，15～25天后得可移栽的水晶草幼苗。在本发明提供的水晶草的组培方法中，优选地，所述离体组织为叶片、叶柄、根、茎、花或花穗。在本发明提供的水晶草的组培方法中，优选地，所述脱分化培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.2～1.0mg/l+naa0.1～0.6mg/l+连翘提取物0.8～1.6mg/l；或n6+6-ba0.2～1.0mg/l+naa0.1～0.6mg/l+连翘提取物0.5～1.3mg/l；或b5+6-ba0.2～1.0mg/l+naa0.1～0.6mg/l+连翘提取物0.3～1.5mg/l。在本发明提供的水晶草的组培方法中，优选地，所述增殖培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.1～1.0mg/l+naa0.05～0.8mg/l+刺五加浸膏1.0～2.0mg/l；或n6+6-ba0.1～1.0mg/l+naa0.05～0.8mg/l+刺五加浸膏0.6～1.5mg/l；或b5+6-ba0.1～1.0mg/l+naa0.05～0.8mg/l+刺五加浸膏1.0～2.0mg/l。在本发明提供的水晶草的组培方法中，优选地，所述再分化培养基的组分及其含量为：1/2ms+naa0.2～2.0mg/l+iba0～2.0mg/l+iaa0～10mg/l+连翘提取物0.5～2.6mg/l；或n6+naa0.2～2.0mg/l+iba0～2.0mg/l+iaa0～10mg/l+连翘提取物0.4～1.5mg/l；或b5+naa0.2～2.0mg/l+iba0～2.0mg/l+iaa0～10mg/l+连翘提取物0.8～1.8mg/l。在本发明提供的水晶草的组培方法中，优选地，在所述步骤s5中，ph值6～7、ec值为1500～15000μs/cm，光照强度为8000～15000lx。采用上述技术方案，由于在增殖培养基中加入了刺五加浸膏，防止了褐化现象的发生；在再分化培养基中加入了连翘提取物，提高了水晶草组培苗的生根率和生根数。附图说明图1为本发明水晶草的组培方法的流程图。具体实施方式下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。实施例1本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的叶柄置于0.2％氯化汞溶液中消毒3分钟，然后用无菌水清洗5次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草叶柄置于脱分化培养基上，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为8小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.2mg/l+naa0.6mg/l+连翘提取物1.6mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.05mg/l+刺五加浸膏1.0mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养10天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：1/2ms+naa2.0mg/l+iba2.0mg/l+iaa10mg/l+连翘提取物0.5mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值8、ec值25000μs/cm的营养土中，光照强度20000lx，15天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例2本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的叶片置于0.05％氯化汞溶液中消毒30分钟，然后用无菌水清洗1次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草叶片置于脱分化培养基上，在温度为15℃、光照强度为8000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：n6+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+连翘提取物1.3mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：b5+6-ba0.1mg/l+naa0.8mg/l+刺五加浸膏1.0mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养10天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：b5+naa2.0mg/l+iba1.0mg/l+iaa2mg/l+连翘提取物1.8mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值5、ec值500μs/cm的营养土中，光照强度3000lx，25天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例3本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的根置于0.10％氯化汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水清洗3次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草根置于脱分化培养基上，在温度为20℃、光照强度为6000lx、光照时间为12小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：b5+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+连翘提取物1.5mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为15℃、光照强度为8000lx、光照时间为8小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：n6+6-ba1.0mg/l+naa0.05mg/l+刺五加浸膏0.6mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养10天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：n6+naa2.0mg/l+iba0.2mg/l+iaa1mg/l+连翘提取物1.5mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值7、ec值15000μs/cm的营养土中，光照强度15000lx，20天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例4本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的花置于0.15％氯化汞溶液中消毒15分钟，然后用无菌水清洗2次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草花置于脱分化培养基上，在温度为16℃、光照强度为5000lx、光照时间为10小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：b5+6-ba0.5mg/l+naa0.4mg/l+连翘提取物1.0mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为20℃、光照强度为5000lx、光照时间为13小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：b5+6-ba0.5mg/l+naa0.3mg/l+刺五加浸膏1.2mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为25℃、光照强度为4000lx、光照时间为10小时/天的条件下培养15天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：n6+naa1.0mg/l+iba0.5mg/l+iaa5mg/l+连翘提取物0.4mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值7、ec值10000μs/cm的营养土中，光照强度10000lx，18天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例5本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的叶柄置于0.2％氯化汞溶液中消毒3分钟，然后用无菌水清洗5次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草叶柄置于脱分化培养基上，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为8小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.2mg/l+naa0.6mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.05mg/l+刺五加浸膏1.0mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养30天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：1/2ms+naa2.0mg/l+iba2.0mg/l+iaa10mg/l+连翘提取物0.5mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值8、ec值25000μs/cm的营养土中，光照强度20000lx，15天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例6本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的叶柄置于0.2％氯化汞溶液中消毒3分钟，然后用无菌水清洗5次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草叶柄置于脱分化培养基上，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为8小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.2mg/l+naa0.6mg/l+连翘提取物1.6mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.05mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养32天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：1/2ms+naa2.0mg/l+iba2.0mg/l+iaa10mg/l+连翘提取物0.5mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值8、ec值25000μs/cm的营养土中，光照强度20000lx，15天后得可移栽的水晶草幼苗。实施例7本实施例提供了一种水晶草的组培方法，包括如下步骤：s1、脱毒：将水晶草的叶柄置于0.2％氯化汞溶液中消毒3分钟，然后用无菌水清洗5次；s2、脱分化：将脱毒的水晶草叶柄置于脱分化培养基上，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为8小时/天的条件下培养，得愈伤组织；脱分化培养基的组分及其含量为：ms+6-ba0.2mg/l+naa0.6mg/l+连翘提取物1.6mg/l；s3、增殖培养：将愈伤组织转移至增殖培养基中，在温度为28℃、光照强度为3000lx、光照时间为16小时/天的条件下培养；增殖培养基的组分及其含量为：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.05mg/l+刺五加浸膏1.0mg/l；s4、再分化：将增殖后愈伤组织转移至再分化培养基中，在温度为15℃、光照强度为3000lx、光照时间为20小时/天的条件下培养40天，得生根苗；再分化培养基的组分及其含量为：1/2ms+naa2.0mg/l+iba2.0mg/l+iaa10mg/l；s5、炼苗：将生根苗从培养瓶中取出，用清水洗净培养基，栽培在ph值8、ec值25000μs/cm的营养土中，光照强度20000lx，15天后得可移栽的水晶草幼苗。为了验证本发明的有益效果，按以上各实施例的方法对水晶草进行组培育苗，对各指标进行考查，结果见表1。表1按各实施例的方法进行组培育苗幼苗的各项目结果组别苗高/cm叶片/片生根率/％生根数/条根系状况其它实施例1>6>9966完整、较发达、新鲜无病害实施例2>6>9958完整、较发达、新鲜无病害实施例3>7>9987完整、较发达、新鲜无病害实施例4>6>8967完整、较发达、新鲜无病害实施例5>4<5865完整、较弱无病害实施例6<4<6855完整、较弱褐化实施例7<4<6733完整、较弱无病害由上表可以看出，实施例1至4所得的组培苗各指标都优于实施例5至6所得组培苗。在实施例6中，由于在增殖培养基中并未添加刺五加浸膏，出现褐化的现象，可见，在增殖培养基中添加刺五加浸可以防止褐化现象的发生。在实施例7中，由于在再分化培养基中并未添加连翘提取物，实施例7所得的组培苗生根率较低、生根数较少，可见，在再分化培养基中加入连翘提取物，有提高组培苗生根率和生根数的作用。以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。当前第1页12