本发明涉及兜兰繁育组培技术领域，特别涉及一种兜兰新品种培育及组培快繁方法。
背景技术：
兜兰(Paphiopedilum)，又称“拖鞋兰”、“仙履兰”，是兰科兜兰属植物的统称，由于其独特的花朵造型、绚丽的花朵色彩、持久的观赏花期而具有极高的观赏价值，备受市场欢迎。兜兰的栽培和育种历史悠久，发展至今已拥有数量巨大的杂交品种，在全世界范围内拥有最为众多的爱好者。近年来，我国兜兰产业发展迅速，市场需求量急速增加。但由于生态环境的破坏和过度采挖，兜兰已成为世界上最濒危的植物物种之一，所有野生种类均被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约(CITES)》附录I而被禁止交易。兜兰主要分布于亚洲热带地区至太平洋岛屿，我国是兜兰的分布中心，但我国大陆在兜兰的新品种选育、繁殖和产业化栽培方面的研究起步较晚，特别是新培育的新品种极少，严重地影响了兜兰产业的发展。
兜兰杂交种比原生种姿态更为优美，抗逆性强，花色更为丰富多彩，也能够在国际上进行交易，现已成为世界兜兰产业的主流产品，但兜兰杂交种子由于胚胎发育不完全，在自然状态下极难萌发，常用的无菌播种技术多存在萌发率低、成苗困难等问题。
兜兰的传统繁殖方式为分株繁殖，传统的无性分株繁殖法，繁殖周期长、繁殖系数低，每年只能增殖1-3倍，繁殖难度较大。兜兰无菌播种和组织培养难度大，如何实现兜兰的快速繁殖是兰科植物研究的重点。兜兰的组培快繁方法，可以采用无菌播种与试管快速成苗的方法，在短时间内实现大规模种植以满足市场需求，在兜兰的新品种培育及快速繁殖方面具有极其深远的现实意义。
技术实现要素：
根据现有技术中存在的技术缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，得到萌发率高、成苗快、种苗品质好的高效兜兰杂交育种及种苗繁殖技术，解决现有兜兰新品种培育与繁殖过程存在的萌发率低、成苗困难、繁殖周期长、繁殖系数低及繁殖难度大等问题。
为了实现本发明的技术目的，本发明一种兜兰新品种培育及组培快繁方法的技术方案是：
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，所述兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，所述两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集所述父本的花粉授于所述母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将所述外植体用70%-80%的酒精浸泡30-60s，然后将其置于0.1%-0.2%的升汞溶液中消毒10-20min，将消毒后的所述外植体用无菌水漂洗4-5次后切开得到粉末状种子，将所述粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；所述种子萌发的培养条件为暗培养，所述暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，所述暗培养的光照强度为1800-2000lux；
所述种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，所述基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；所述抗坏血酸的浓度为80-100mg/L，所述赤霉素的浓度为40-60mg/L，所述活性炭的浓度为1.8-2g/L，所述香蕉泥的浓度为40-50g/L，所述琼脂粉的浓度为6-7g/L，所述白砂糖的浓度为25-30g/L；
（3）壮苗生根：将长成的所述小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；所述壮苗生根的培养条件为暗培养，所述暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，所述暗培养的光照强度为1800-2000lux；
所述壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 所述基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），所述吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.3-0.6mg/L；
（4）试管苗移栽：当所述小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗7-15天，然后将植株从所述培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将所述植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度15-28℃，湿度大于70%；
所述混合基质包括兰石、蕨根与树皮，所述兰石：蕨根：树皮为1:0.5-2:0.5-2。
作为本发明的进一步改进，所述人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去所述父本与所述母本的唇瓣。
作为本发明的进一步改进，所述人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为所述父本，选择后开花的亲本为所述母本。
作为本发明的进一步改进，所述外植体为成熟果荚，所述成熟果荚的状态为果荚未开裂。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：人工杂交授粉、无菌播种与种子萌发、壮苗生根与试管苗移栽，操作性强，应用价值高，杂交成功率高，尤其对花期不遇的优良兜兰杂交亲本十分有效；组织快繁过程采用独特的培养基，提高了兜兰杂交种子的萌发率，成苗快，种苗品质好。
无菌播种阶段采用刚成熟但未开裂的果荚，以果荚果柄部位开始变黄为准，这时果内的种子可相互分离，容易播种；且未开裂的果荚灭菌容易，只需对果荚表皮灭菌即可，提高种子萌发率。
种子萌发培养基，通过生化手段，在培养基中添加抗坏血酸，有效阻止酚类物质氧化成褐色的醌类物质；通过生理手段，在培养基中添加赤霉素和香蕉泥，调节种子生理状况，打破种子休眠，促进种子萌发；通过物理手段，在培养基中添加活性炭，吸收酚类、醌类物质，减少组织褐化，从而提高种子萌发率。繁育过程使用的种子萌发培养基通过生化、生理和物理三方面的协同作用，相互促进，能够显著提高兜兰种子萌发率，缩短兜兰种子萌发时间，同时降低外植体褐化率。
试管苗移栽过程，可大大提高繁殖系数，具有成苗快，种苗品质好、生长势强等优势，能够得到整齐化一的种苗，并在短时间内提供大量的种苗，为兜兰种苗的生产提供了一条有效的途径，实现产业化种植。
本发明一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，通过人工杂交授粉、无菌播种与种子萌发、壮苗生根与试管苗移栽的过程，得到了萌发率高、成苗快、种苗品质好的高效兜兰杂交育种及种苗繁殖技术，解决了现有兜兰新品种培育与繁殖过程存在的萌发率低、成苗困难、繁殖周期长、繁殖系数低及繁殖难度大等问题。本发明提供的兜兰新品种培育及组织快繁方法具有操作性强、应用价值高及杂交成功率高等特点，尤其对花期不遇的优良兜兰杂交亲本十分有效；组织快繁过程采用独特的培养基，提高了兜兰杂交种子的萌发率，具有成苗快，种苗品质好、生长势强等优势，能够得到整齐化一的种苗，并在短时间内提供大量的种苗，为兜兰种苗的生产提供了一条有效的途径，实现产业化种植。
具体实施方式
为对本发明有益效果作进一步阐述，进行了大量试验，特别说明的是，本发明试验旨在说明本发明技术的有益效果，绝不仅限于本发明的范围。
实施例1
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集父本的花粉授于母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将外植体用70%-80%的酒精浸泡30-60s，然后将其置于0.1%-0.2%的升汞溶液中消毒10-20min，将消毒后的外植体用无菌水漂洗4-5次后切开得到粉末状种子，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；种子萌发的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1800-2000lux；
种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；抗坏血酸的浓度为80-100mg/L，赤霉素的浓度为40-60mg/L，活性炭的浓度为1.8-2g/L，香蕉泥的浓度为40-50g/L，琼脂粉的浓度为6-7g/L，白砂糖的浓度为25-30g/L；
（3）壮苗生根：将长成的小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；壮苗生根的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1800-2000lux；
壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.3-0.6mg/L；
（4）试管苗移栽：当小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗7-15天，然后将植株从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度15-28℃，湿度大于70%；
混合基质包括兰石、蕨根与树皮，兰石：蕨根：树皮为1:0.5-2:0.5-2。
人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去父本与母本的唇瓣。
人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为父本，选择后开花的亲本为母本。
外植体为成熟果荚，成熟果荚的状态为果荚未开裂。
本实施例中，种子萌发率可达55％以上，并有效缩短了兜兰种子的萌发时间，降低了外植体的褐化率；植株移栽成活率可达92%以上。
实施例2
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集父本的花粉授于母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将外植体用70%的酒精浸泡30s，然后将其置于0.1%的升汞溶液中消毒10min，将消毒后的外植体用无菌水漂洗4次后切开得到粉末状种子，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；种子萌发的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1800lux；
种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；抗坏血酸的浓度为80mg/L，赤霉素的浓度为40mg/L，活性炭的浓度为1.8g/L，香蕉泥的浓度为40g/L，琼脂粉的浓度为6g/L，白砂糖的浓度为25g/L；
（3）壮苗生根：将长成的小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；壮苗生根的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1800lux；
壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.3mg/L；
（4）试管苗移栽：当小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗7天，然后将植株从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度15℃，湿度为70%；
混合基质包括兰石、蕨根与树皮，兰石：蕨根：树皮为1:0.5:0.5。
人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去父本与母本的唇瓣。
人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为父本，选择后开花的亲本为母本。
外植体为成熟果荚，成熟果荚的状态为果荚未开裂。
本实施例中，种子萌发率为56％，并有效缩短了兜兰种子的萌发时间，降低了外植体的褐化率；植株移栽成活率为93%。
实施例3
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集父本的花粉授于母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将外植体用75%的酒精浸泡40s，然后将其置于0.13%的升汞溶液中消毒13min，将消毒后的外植体用无菌水漂洗4次后切开得到粉末状种子，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；种子萌发的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1900lux；
种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；抗坏血酸的浓度为90mg/L，赤霉素的浓度为50mg/L，活性炭的浓度为1.85g/L，香蕉泥的浓度为45g/L，琼脂粉的浓度为6.5g/L，白砂糖的浓度为27g/L；
（3）壮苗生根：将长成的小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；壮苗生根的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1900lux；
壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.4mg/L；
（4）试管苗移栽：当小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗10天，然后将植株从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度20℃，湿度为75%；
混合基质包括兰石、蕨根与树皮，兰石：蕨根：树皮为1:1:1。
人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去父本与母本的唇瓣。
人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为父本，选择后开花的亲本为母本。
外植体为成熟果荚，成熟果荚的状态为果荚未开裂。
本实施例中，种子萌发率为56％，并有效缩短了兜兰种子的萌发时间，降低了外植体的褐化率；植株移栽成活率为92%。
实施例4
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集父本的花粉授于母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将外植体用75%的酒精浸泡50s，然后将其置于0.17%的升汞溶液中消毒17min，将消毒后的外植体用无菌水漂洗5次后切开得到粉末状种子，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；种子萌发的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1950lux；
种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；抗坏血酸的浓度为95mg/L，赤霉素的浓度为55mg/L，活性炭的浓度为1.9g/L，香蕉泥的浓度为47g/L，琼脂粉的浓度为6.5g/L，白砂糖的浓度为29g/L；
（3）壮苗生根：将长成的小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；壮苗生根的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为1950lux；
壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.5mg/L；
（4）试管苗移栽：当小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗13天，然后将植株从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度25℃，湿度为75%；
混合基质包括兰石、蕨根与树皮，兰石：蕨根：树皮为1:1.5:1.5。
人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去父本与母本的唇瓣。
人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为父本，选择后开花的亲本为母本。
外植体为成熟果荚，成熟果荚的状态为果荚未开裂。
本实施例中，种子萌发率为57％，并有效缩短了兜兰种子的萌发时间，降低了外植体的褐化率；植株移栽成活率为93%。
实施例5
一种兜兰新品种培育及组培快繁方法，兜兰新品种培育及组织快繁包括以下步骤：
（1）人工杂交授粉：选定用于杂交的两种兜兰亲本，两种兜兰亲本互为父本、母本进行杂交，采集父本的花粉授于母本的柱头上，完成授粉；
（2）无菌播种与种子萌发：选用饱满的杂交后的果实作为外植体，将外植体用80%的酒精浸泡60s，然后将其置于0.1%的升汞溶液中消毒20min，将消毒后的外植体用无菌水漂洗5次后切开得到粉末状种子，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养至长成小苗；种子萌发的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为2000lux；
种子萌发培养基的基础培养基为1/4MS 培养基，基础培养基中添加有抗坏血酸、赤霉素、活性炭、香蕉泥、琼脂粉与白砂糖；抗坏血酸的浓度为100mg/L，赤霉素的浓度为60mg/L，活性炭的浓度为2g/L，香蕉泥的浓度为50g/L，琼脂粉的浓度为7g/L，白砂糖的浓度为30g/L；
（3）壮苗生根：将长成的小苗分开，接种到壮苗生根培养基上培养至长成具有2-3 条根、3-4 片叶的完整植株；壮苗生根的培养条件为暗培养，暗培养的光暗周期为12h光照/12h 黑暗，暗培养的光照强度为2000lux；
壮苗生根培养基的基础培养基为1/4MS培养基， 基础培养基中添加有吲哚乙酸（IBA），吲哚乙酸（IBA）的浓度为0.6mg/L；
（4）试管苗移栽：当小苗形成的植株长至3-4cm高时，将培养瓶转至自然光照下炼苗15天，然后将植株从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将植株移入混合基质中进行培养，培养温室需保持温度28℃，湿度为80%；
混合基质包括兰石、蕨根与树皮，兰石：蕨根：树皮为1:2:2。
人工杂交授粉阶段，授粉前需要先除去父本与母本的唇瓣。
人工杂交授粉阶段，当所选定的两个兜兰亲本不在同一时间开花时，选择先开花的亲本为父本，选择后开花的亲本为母本。
外植体为成熟果荚，成熟果荚的状态为果荚未开裂。
本实施例中，种子萌发率为56％，并有效缩短了兜兰种子的萌发时间，降低了外植体的褐化率；植株移栽成活率为91%。
以上所述，仅是本发明的较好实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实例所作的任何简单修改、变换材料等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。