本发明涉及一种鱼类人工繁殖方法。
背景技术
滩头鱼是雅罗鱼亚科三块鱼属(tribolodon)几种土著经济种的统称，有名远东红鳍鱼，勃氏雅罗鱼，大红线。2016年4月-6月在黑龙江东宁县绥芬河根据滩头鱼不同繁殖群体洄游时间和形态学差异，对增殖放流群体的亲本采样，在实验室完成了dna条形码验证。对前期绥芬河称谓的“滩头雅罗鱼”分类归属进行了纠正，结果发现绥芬河洄游的滩头鱼主要生殖群体为珠星三块鱼tribolodonhakonensis和三块鱼(t.brandtii)(已经接受，待发表于《中国水产科学》，2018年)。珠星雅罗鱼t.hakonensis和三块鱼(t.brandtii)，分类上属于硬骨鱼类osteichthyes，鲤形目cypriniformes，鲤科cyprinidae，雅罗鱼亚科的三块鱼属(tribolodon)，主要分布于太平洋西北部的日本海及一些内陆淡水河流,包括俄罗斯的滨海省、哈巴罗夫斯克和萨哈林,日本和朝鲜半岛,在中国仅分布于绥芬河和图们江流域。绥芬河是日本海的主要河流之一，三块鱼属鱼类性腺发育成熟后，分批溯河而上进入河口，在急滩哨口处水中产卵，故名“滩头鱼”，产卵后立即返回近海区。受精卵在淡水河流中孵化，鱼苗顺流至近海水域进行生长和肥育。滩头鱼已经成为绥芬河和图们江的地标性产品，市场价格连年上升。但是由于缺少有效的渔业资源管理，大量的人工捕捞加上生态环境的恶化，造成滩头鱼渔业资源的急剧下降。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决大量人工捕捞、生态环境的恶化导致滩头鱼渔业资源急剧下降的技术问题，提供了一种珠星三块鱼人工繁殖方法。
珠星三块鱼人工繁殖方法按照以下步骤进行：
一、亲鱼采集捕捞；
二、亲鱼催产：
在气温为19-24℃、水温18-19℃条件下，注射lhrha2和dom，雌鱼lhrha2的注射量为20μg/kg、dom的注射量为2mg/kg，雄鱼lhrha2的注射量为10μg/kg、dom的注射量为1mg/kg，将注射完lhrha2和dom的雌雄鱼放入同一个水泥池，水深0.3米，同时进行水流刺激，水流量为0.7l/s-1.2l/s，溶氧量为6.0-10.5mg/l；
三、受精：
亲鱼催产23小时后，每小时随机从池中捞出3-5条雌鱼，挤压腹部，待卵粒顺利自由流出，则正式开始采集卵子和精液；采用挤压法分别采集成熟的卵粒和精液到干燥、干净的塑料采卵盒，每70尾雌鱼的卵粒放到一个采集盒，每20-35尾雄鱼精液收集到一个采集盒中；待所有雄鱼精液采集结束后，将精液倒入盛有成熟卵粒的采集盒中，搅拌使精液和卵粒充分均匀混合，搅拌结束后，倒入清水覆盖卵粒和精液，搅拌10s-30s，激活精子，完成受精；
四、静置2分钟后，继续加入少许清水，再静置1分钟后，转入盛有5-10倍水体的水盆中，进行漂洗，漂洗期间，用手顺时针搅拌受精卵进行漂洗，洗去多余的精液；
五、反复操作步骤四中漂洗过程6-8次，使受精卵进行吸水膨胀15-20分钟，受精卵体积膨胀3-5倍；
六、孵化：将经过步骤五处理的受精卵转入第二个水泥池中的移动式鱼类人工孵化装置中进行孵化，每个玻璃孵化瓶7装入46-67万受精卵，水泥池水深0.53米，溶氧量为6.6-10.5mg/l，在孵化过程中，水泥池底部的水泵2抽水分流接入玻璃孵化瓶7的注水口通过反冲式水流运动搅拌受精卵，出水管14下方的网箱16在整个孵化过程中，4/5深度沉入在水中；
七、消毒处理：
在受精后4小时，停止玻璃孵化瓶7进水水流，沿中间供水管11加入10ml质量浓度为5％的亚甲基蓝溶液后，缓慢加入少许水把亚甲基蓝溶液缓慢冲入玻璃孵化瓶7底部，打开分水阀12，利用水流反冲使亚甲基蓝溶液缓慢地充分包围受精卵，关闭分水阀12，静置消毒处理15分钟后，再次打开分水阀12，排走亚甲基蓝溶液到污水处理系统，每天消毒3次，持续消毒到鱼苗发育至尾牙期，停止消毒，每天更换3次池水，每次池水交换量为4800-7200l水，注水至玻璃孵化瓶7水流流速为0.25l/s；当鱼苗破膜后，水泥池中产生大量的泡沫，用抄网打捞泡沫，同时每天交换4-6次池水，注水至玻璃孵化瓶水流流速为0.25l/s；待鱼苗上浮平游，从玻璃孵化瓶出水管14进入下方的网箱16；鱼58-72h出膜，然后将玻璃孵化瓶流速降至0.18-0.2l/s继续孵化，8-10天全部出苗，将孵出的仔苗不断移出网箱，转移到第三个水泥池的网箱中进行鱼苗培育，当鱼苗的卵黄囊消失之后，开始饲喂鸡蛋黄配置的水溶液，每天2次；2天后，饲喂丰年虫5-10天，即完成珠星三块鱼人工繁殖。
本发明旨在为恢复珠星三块鱼的生态渔业资源、大规模养殖提供苗种，提供一种可扩大的工厂化生产的人工繁殖方法。采用本发明方法受精率可达98.2％，平均受精率93.5％。
孵化率可达87.5％，平均孵化率为83.1％，180小时后，珠星三块鱼鱼苗能够平游，人工繁殖获得成功。
附图说明
图1是本发明中使用的移动式鱼类人工孵化装置的结构示意图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式珠星三块鱼人工繁殖方法按照以下步骤进行：
一、亲鱼采集捕捞；
对体色鲜艳，有三条桔色(背部、侧线鳞、腹部)的珠星雅罗鱼进行筛选。在5月10日-5月30日，进行5批次生产(如果设备和空间足够大，可以单批次完成)，每批次400尾，雌雄比例2:1。在池塘中选择3龄雌鱼体长26-30cm、体重0.3kg以上，腹部柔软膨大、性腺发育至第v期的鱼为雌亲鱼；3龄雄鱼体长26-30cm，体重0.3kg以上，头部鳃盖处及背部手摸粗糙，且有明显的大量追星，轻轻挤压腹部有精液外流的鱼为雄性亲鱼。将每批次的亲鱼在水泥池中饲养，水泥池(规格：长5米，宽3米，深0.7米)。。
二、亲鱼催产：
在气温为19-24℃、水温18-19℃条件下，注射lhrha2和dom，雌鱼lhrha2的注射量为20μg/kg、dom的注射量为2mg/kg，雄鱼lhrha2的注射量为10μg/kg、dom的注射量为1mg/kg，将注射完lhrha2和dom的雌雄鱼放入同一个水泥池，水深0.3米，同时进行水流刺激，水流量为0.7l/s-1.2l/s，溶氧量为6.0-10.5mg/l；
三、受精：
亲鱼催产23小时后，每小时随机从池中捞出3-5条雌鱼，挤压腹部，如果有卵粒顺利自由流出，则正式开始采集卵子和精液；采用挤压法分别采集成熟的卵粒和精液到干燥、干净的塑料采卵盒，每70尾雌鱼的卵粒放到一个采集盒，每20-35尾雄鱼精液收集到一个采集盒中；待所有雄鱼精液采集结束后，将精液倒入盛有成熟卵粒的采集盒中，搅拌使精液和卵粒充分均匀混合，搅拌结束后，倒入清水覆盖卵粒和精液，搅拌10s-30s，激活精子，完成受精；
四、静置2分钟后，继续加入少许清水，再静置1分钟后，转入盛有5-10倍水体的水盆中，进行漂洗，漂洗期间，用手顺时针搅拌受精卵进行漂洗，洗去多余的精液；
五、反复操作步骤四中漂洗过程6-8次，使受精卵进行吸水膨胀15-20分钟，受精卵体积膨胀3-5倍；
六、孵化：将经过步骤五处理的受精卵转入第二个水泥池中的移动式鱼类人工孵化装置中进行孵化，每个玻璃孵化瓶7装入46-67万受精卵，水泥池水深0.53米，溶氧量为6.6-10.5mg/l，在孵化过程中，水泥池底部的水泵2抽水分流接入玻璃孵化瓶7的注水口通过反冲式水流运动搅拌受精卵，出水管14下方的网箱16在整个孵化过程中，4/5深度沉入在水中；
七、消毒处理：
在受精后4小时，停止玻璃孵化瓶7进水水流，沿中间供水管11加入10ml质量浓度为5％的亚甲基蓝溶液后，缓慢加入少许水把亚甲基蓝溶液缓慢冲入玻璃孵化瓶7底部，打开分水阀12，利用水流反冲使亚甲基蓝溶液缓慢地充分包围受精卵，关闭分水阀12，静置消毒处理15分钟后，再次打开分水阀12，排走亚甲基蓝溶液到污水处理系统，每天消毒3次，持续消毒到鱼苗发育至尾牙期，停止消毒，每天更换3次池水，每次池水交换量为4800-7200l水，注水至玻璃孵化瓶7水流流速为0.25l/s；当鱼苗破膜后，水泥池中产生大量的泡沫，用抄网打捞泡沫，同时每天交换4-6次池水，注水至玻璃孵化瓶水流流速为0.25l/s；待鱼苗上浮平游，从玻璃孵化瓶出水管14进入下方的网箱16；鱼58-72h出膜，然后将玻璃孵化瓶流速降至0.18-0.2l/s继续孵化，8-10天全部出苗，将孵出的仔苗不断移出网箱，转移到第三个水泥池的网箱中进行鱼苗培育，当鱼苗的卵黄囊消失之后，开始饲喂鸡蛋黄配置的水溶液，每天2次；2天后，饲喂丰年虫5-10天，即完成珠星三块鱼人工繁殖。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中在气温为20-23℃、水温18℃条件下，注射lhrha2和dom。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤二中在气温为21℃、水温19℃条件下，注射lhrha2和dom。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本具体实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二中在气温为22℃、水温18℃条件下，注射lhrha2和dom。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本具体实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤六中所述网箱16长3米、宽70cm、深70cm。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本具体实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤七中所述尾牙期为发育45-52h的受精卵。其它与具体实施方式一至五之一相同。
具体实施方式七：本具体实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤七中每次池水交换量为4.8-7.2m3水。其它与具体实施方式一至六之一相同。
采用下述实验验证本发明效果：
实验一：
珠星三块鱼人工繁殖方法按照以下步骤进行：
一、亲鱼采集捕捞；
对体色鲜艳，有三条桔色(背部、侧线鳞、腹部)的珠星雅罗鱼进行筛选。在5月10日-5月30日，进行5批次生产(如果设备和空间足够大，可以单批次完成)，每批次400尾，雌雄比例2:1。在池塘中选择3龄雌鱼体长26-30cm、体重0.3kg以上，腹部柔软膨大、性腺发育至第v期的鱼为雌亲鱼；3龄雄鱼体长26-30cm，体重0.3kg以上，头部鳃盖处及背部手摸粗糙，且有明显的大量追星，轻轻挤压腹部有精液外流的鱼为雄性亲鱼。将每批次的亲鱼在水泥池中饲养，水泥池(规格：长5米，宽3米，深0.7米)。在池中放入由细绳固定的棕榈叶片，用于后期产卵情况的检查。
二、亲鱼催产：
在气温为19-24℃、水温18-19℃或23-25℃条件下，注射lhrha2促黄体素释放激素a2和dom马来酸地欧酮，雌鱼lhrha2的注射量为20μg/kg、dom的注射量为2mg/kg，雄鱼lhrha2的注射量为10μg/kg、dom的注射量为1mg/kg，将注射完lhrha2和dom的雌雄鱼放入同一个水泥池，水深0.3米，同时进行水流刺激，水流量为1.2l/s，溶氧量为6.6-10.5mg/l；
三、受精：
亲鱼催产23小时后，每小时随机从池中捞出3-5条雌鱼，挤压腹部，如果有卵粒顺利自由流出，则正式开始采集卵子和精液；采用挤压法分别采集成熟的卵粒和精液到干燥、干净的塑料采卵盒，每70尾雌鱼的卵粒放到一个采集盒，每20-35尾雄鱼精液收集到一个采集盒中；待所有雄鱼精液采集结束后，将精液倒入盛有成熟卵粒的采集盒中，用鹅毛搅拌使精液和卵粒充分均匀混合，搅拌结束后，倒入清水覆盖卵粒和精液，搅拌10s-30s，激活精子，完成受精；
四、静置2分钟后，继续加入少许清水，再静置1分钟后，转入盛有5-10倍水体的水盆中，进行漂洗，漂洗期间，用手顺时针搅拌受精卵进行漂洗，洗去多余的精液；
五、反复操作步骤四中漂洗过程6-8次，使受精卵进行吸水膨胀15-20分钟，受精卵体积膨胀3-5倍；
六、孵化：将经过步骤五处理的受精卵转入第二个水泥池中的移动式鱼类人工孵化装置中进行孵化，每个玻璃孵化瓶7装入46-67万受精卵，每批次有6个玻璃孵化瓶7，水泥池水深0.53米，溶氧量为6.6-10.5mg/l，在孵化过程中，水泥池底部的水泵2抽水分流接入玻璃孵化瓶7的注水口通过反冲式水流运动搅拌受精卵，出水管14下方的网箱16在整个孵化过程中，4/5深度沉入在水中。
七、消毒处理：
在受精后4小时，停止玻璃孵化瓶7进水水流，沿中间供水管11加入10ml质量浓度为5％的亚甲基蓝溶液后，缓慢加入少许水把亚甲基蓝溶液缓慢冲入玻璃孵化瓶7底部，打开分水阀12，利用水流反冲使亚甲基蓝溶液缓慢地充分包围受精卵，关闭分水阀12，静置消毒处理15分钟后，再次打开分水阀12，排走亚甲基蓝溶液到污水处理系统，每天消毒3次，持续消毒到鱼苗发育至尾牙期，停止消毒，每天更换3次池水，每次池水交换量为4800-7200l水，注水至玻璃孵化瓶7水流流速为0.25l/s；当鱼苗破膜后，水泥池中产生大量的泡沫，用抄网打捞泡沫，同时每天交换4-6次池水，注水至玻璃孵化瓶水流流速为0.25l/s；待鱼苗上浮平游，从玻璃孵化瓶出水管14进入下方的网箱16；鱼胚胎58-72h出膜，然后将玻璃孵化瓶流速降至0.18-0.2l/s继续孵化，8-10天全部出苗，将孵出的仔苗不断移出网箱，转移到第三个水泥池的网箱中进行鱼苗培育，当鱼苗的卵黄囊消失之后，开始饲喂鸡蛋黄配置的水溶液，每天2次；2天后，饲喂丰年虫5-10天，即完成珠星三块鱼人工繁殖。
2018年5月10日-5月30日，共催产5批次珠星三块鱼，每批次小计450尾亲鱼，其中雌性300，雄性150尾；每批次分别有42,50,48,53和60尾雌鱼通过注射激素没有产卵，平均51尾；催产率分别为86％,83％,84％,82％和80％。每批次获得受精卵分别为241.2万，262.8万，280.6万，244.8万和252.2万，总计获得受精卵1281.4万。卵粒直径平均为2.1mm，怀卵量平均为200粒/g卵巢或者32粒/g体重。受精率分别为98.2％，95.3％，83.5％，93.9％和96.7％，平均受精率93.5％。
水温为18-19℃时，人工受精后58-60小时后，鱼胚胎开始出膜，66-67小时后，约有60-70％出膜；全部鱼苗出膜时间为86小时；全部仔鱼上浮180小时。当水温为23-25℃时，人工受精38-40小时后，鱼胚胎开始出膜，46-47小时，约有50-60％出膜。
水温为18-19℃时，孵化率分别为87.5％,84.9％，79.2％，82.3％和81.6％，平均孵化率为83.1％，出苗为：211万,223万,222万,201万和206万，总计获得1063万鱼苗。180小时后，珠星三块鱼鱼苗能够平游，人工繁殖获得成功。