本发明属于水生生物卵子短期保存平衡液的制备和应用领域，涉及鲟鱼卵子保存平衡液。
背景技术：
鱼类卵子在排出体外后，会因为形态和生物化学变化而变得过熟，这些变化会对卵子的活力产生不良影响，因此，如何延长鱼类卵子的活力时间在水产养殖上显得越来越重要。鲟鱼在人工催产过程中常出现雌鱼产卵和雄鱼产精不同步的问题，如何在短期内保持卵子的活力，以及较高的受精率和孵化率，是鲟鱼人工繁殖中必须解决的一个实际问题。温度、光照、氧气、ph、保存液等多种因素均会影响鱼类卵子短期保存的效果。西伯利亚鲟和小体鲟等的卵子短期保存已有研究报道，国内外尚没有关于采用平衡液对中华鲟卵子、史氏鲟卵子和达氏鲟卵子进行短期保存的报道。
技术实现要素：
为解决上述技术问题，本发明提供鲟鱼卵子保存平衡液，实现了中华鲟卵子、史氏鲟卵子和达氏鲟卵子的短期保存，解决人工繁殖鲟鱼雌雄催产效应时间不同所带来的技术难题。
本发明的方案是：
一种鲟鱼卵子保存平衡液，其特征在于，所述平衡液包括：葡萄糖：0.8-1.2g/l，hepes缓冲盐：0.92-0.98g/l，牛血清白蛋白bsa：0.5-1.6g/l，nah2po4：0.35-0.45g/l，kcl：0.35-0.42g/l，mgso4：0.19-0.28g/l，nacl：5-8g/l，cacl2：0.141-0.153g/l，青霉素：18-22万iu/l，硫酸链霉素：0.15-0.25g/l，ph值调至与体腔液相同。
优选地，所述平衡液包括：葡萄糖：0.8-1g/l，hepes缓冲盐：0.92-0.95g/l，牛血清白蛋白bsa：0.5-0.8g/l，nah2po4：0.35-0.41g/l，kcl：0.35-0.38g/l，mgso4：0.19-0.23g/l，nacl：5-7.25g/l，cacl2：0.141-0.147g/l，青霉素：18-20万iu/l，硫酸链霉素：0.15-0.2g/l，ph值调至与体腔液相同。
优选地，葡萄糖：1-1.2g/l，hepes缓冲盐：0.95-0.98g/l，牛血清白蛋白bsa：0.8-1.6g/l，nah2po4：0.41-0.45g/l，kcl：0.38-0.42g/l，mgso4：0.23-0.28g/l，nacl：7.25-8g/l，cacl2：0.147-0.153g/l，青霉素：20-22万iu/l，硫酸链霉素：0.2-0.25g/l，ph值调至与体腔液相同。
优选地，所述平衡液包括：葡萄糖1.0g/l，hepes缓冲盐：0.95g/l，牛血清白蛋白bsa：0.8-1.2g/l，nah2po4：0.41g/l，kcl：0.38g/l，mgso4：0.23g/l，nacl：7.25g/l，cacl2：0.147g/l，青霉素：20万iu/l，硫酸链霉素：0.2g/l，ph值调至与体腔液相同。
优选地，所述平衡液采用1mol/l的naoh和浓盐酸调节ph与体腔液相同。
本发明有益效果：
1、本发明的一种鲟鱼卵子保存平衡液应用于中华鲟卵子、史氏鲟卵子和达氏鲟卵子的短期保存，具体保存方法如下：将鲟鱼的新鲜卵子完全浸泡于上述平衡液中，于16℃下保存6小时后，即可进行受精。
2、本发明的鲟鱼卵子保存平衡液在适合的温度下，实现了中华鲟卵子、史氏鲟卵子、达氏鲟卵子的短期保存，经保存后的中华鲟卵子具有高达77.35％的受精率和80.06％的孵化率以及0％的畸形率，史氏鲟卵子具有高达89.97％的受精率和91.24％的孵化率以及0％的畸形率，达氏鲟卵子具有高达90.03％的受精率和89.45％的孵化率以及0.47％的畸形率，解决了人工繁殖鲟鱼雌雄催产效应时间不同所带来的技术难题。
3、平衡液中的各种盐离子成分主要起调节渗透压的作用，hepes缓冲盐作为氢离子缓冲剂，能在较长时间内维持平衡液的ph值在恒定范围，葡萄糖起调节渗透压和提供能量的作用，加入了牛血清白蛋白bsa，bsa不仅能作为稳定剂维持卵子中酶的活性，还能为卵子提供能量，对卵子活力的保存起重要作用。
4、我们这个可以用于多种鲟鱼卵子的保存，不针对某一确定物种，克服了不同鲟鱼体腔液的生化组成不同的问题，扩大了应用范围，可用于所有鲟鱼卵子的保存。
5、本发明的卵子而且可以保存6小时。
6、体腔液的ph与卵子活力相关，当体腔液ph与保存液有差值时，卵子活力会加速减弱，缩短保存时间，本保存液的ph没有固定值，而是与体腔液相同，因此能最大限度保存卵子活力。
具体实施方式
下面结合实施例来进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。
实施例1
平衡液的配制
基础平衡液包括：葡萄糖1.0g/l，hepes缓冲盐0.95g/l，nah2po40.41g/l，kcl0.38g/l，mgso40.23g/l，nacl7.25g/l，cacl20.147g/l，青霉素：20万iu/l，硫酸链霉素：0.2g/l，ph为7.0，体腔液ph为7.36，保存温度为16℃，保存时间2小时。结果如表1：
表1
保存效果很不理想，猜测因基础平衡液溶液里无蛋白质，分别向平衡液中加入bsa0.8g/l、1.0g/l、1.2g/l进行实验2，保存液ph为7.0，体腔液ph为7.44，保存温度为16℃，保存时间分别为2小时和6小时。结果如下表2：
表2
从表2的结果可以看出，卵子在改良过的平衡液中保存2小时可达到与新鲜卵子接近的活力，但保存6小时后卵子活力显著下降。将保存液ph调至与体腔液一致后，进行实验3，结果如下表3：
表3
表3确定保存液最终成分为：葡萄糖1.0g/l，hepes缓冲盐0.95g/l，牛血清白蛋白bsa：0.8-1.2g/l，nah2po40.41g/l，kcl0.38g/l，mgso40.23g/l，nacl7.25g/l，cacl20.147g/l，青霉素：20万iu/l，硫酸链霉素：0.2g/l，ph值调至与体腔液一致。
表1-3均采用中华鲟卵子，确定后经试验确定也可以用于史氏鲟和达氏鲟或其他鲟鱼卵子的保存。
最佳保存方法的确定
设定了2个保存时间：2小时，6小时，一个保存温度16℃，共确定了2个不同保存条件的实验组和一个对照组。
挑选质量最好的一尾雌鱼的卵子作为保存的实验材料。首先将300粒新产出的同一批卵子作为对照组，与实验组在同等条件下，出卵后直接进行受精、脱粘、孵化。同时将1200粒卵子平均放入两个搪瓷盘中并加入平衡液，平衡液加入量以将卵子完全浸泡为宜，将搪瓷盘覆上保鲜膜后放入16℃水浴锅中保存。每个实验组保存到预设的保存时间后，分别取出300粒卵子，加入适量精子，精卵比在105：1以上，加水激活精子并不断搅拌，1分钟后用清水冲洗2-3次，对受精卵进行脱粘处理，将脱粘后的受精卵平均分成3份，每份100粒，放置于九宫格孵化筛中孵化，孵化期间水温控制在接近16℃。
统计各处理组的受精率、孵化率、仔鱼畸形率，结果见表4、5、6。
表4不同保存时间对中华鲟卵子受精率、孵化率和畸形率的影响
表5不同保存时间对史氏鲟卵子受精率、孵化率和畸形率的影响
表6不同保存时间对达氏鲟卵子受精率、孵化率和畸形率的影响
从表4-6中可以看出：采用本平衡液在16℃下保存鲟鱼卵子6小时，能保存与新鲜卵子接近的活力，此条件下中华鲟卵子具有高达77.35％的受精率和80.06％的孵化率以及0％的畸形率，史氏鲟卵子具有高达89.97％的受精率和91.24％的孵化率以及0％的畸形率，达氏鲟卵子具有高达90.03％的受精率和89.45％的孵化率以及0.47％的畸形率。
实施例2
一种鲟鱼卵子保存平衡液，所述平衡液包括：
nacl：5-8g/l，hepes缓冲盐：0.92-0.98g/l，nah2po4：0.35-0.45g/l，葡萄糖：0.8-1.2g/l，kcl：0.35-0.42g/l，牛血清白蛋白bsa：0.5-1.6g/l，cacl2：0.141-0.153g/l，青霉素：18-22万iu/l，mgso4：0.19-0.28g/l，硫酸链霉素：0.15-0.25g/l，ph值调至与体腔液相同。
实施例3
一种鲟鱼卵子保存平衡液，所述平衡液包括：
nacl：5g/l，hepes缓冲盐：0.92g/l，nah2po4：0.35g/l，葡萄糖：0.8g/l，kcl：0.35g/l，牛血清白蛋白bsa：0.5g/l，cacl2：0.141g/l，青霉素：18万iu/l，mgso4：0.19g/l，硫酸链霉素：0.15g/l，ph值调至与体腔液相同。
实施例4
一种鲟鱼卵子保存平衡液，所述平衡液包括：
nacl：8g/l，hepes缓冲盐：0.98g/l，nah2po4：0.45g/l，葡萄糖：1.2g/l，kcl：0.42g/l，牛血清白蛋白bsa：1.6g/l，cacl2：0.153g/l，青霉素：22万iu/l，mgso4：0.28g/l，硫酸链霉素：0.25g/l，ph值调至与体腔液相同。
实施例5
一种鲟鱼卵子保存平衡液，所述平衡液包括：
nacl：6.5g/l，hepes缓冲盐：0.94g/l，nah2po4：0.38g/l，葡萄糖：0.9g/l，kcl：0.37g/l，牛血清白蛋白bsa：0.7g/l，cacl2：0.145g/l，青霉素：19万iu/l，mgso4：0.21g/l，硫酸链霉素：0.18g/l，ph值调至与体腔液相同。
实施例5
一种鲟鱼卵子保存平衡液，所述平衡液包括：
nacl：7.67g/l，hepes缓冲盐：0.97g/l，nah2po4：0.44g/l，葡萄糖：1.1g/l，kcl：0.39g/l，牛血清白蛋白bsa：1.3g/l，cacl2：0.151g/l，青霉素：21万iu/l，mgso4：0.25g/l，硫酸链霉素：0.23g/l，ph值调至与体腔液相同。
以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。