本发明涉及植物繁殖技术领域，具体涉及一种五唇兰与火焰兰属间杂交快速高效培育兰花新品种的方法。
背景技术：
五唇兰(doritispulcherrimalindl.或phalaenopsispulcherrima(lindl.)j.j.sm.)为兰科蝴蝶兰属多年生常绿草本植物，东亚特有种，原产于我国海南和一些东南亚地区的野生兰。五唇兰花型美丽，色彩娇艳，具有较高的观赏价值，是蝴蝶兰杂交的重要亲本，以其作为亲本的蝴蝶兰属杂交种被列为五唇蝶兰属，这些杂交种的切花和盆花在国际兰花市场上颇受欢迎。如美国最大的兰花栽培商hausermann兰花公司，杂交后植株开出的花朵比原种花型更大，花姿更美。五唇兰具肥厚的气生根，茎很短，单轴生长。叶向两边生长，长圆形或狭椭圆形。小苗时全株小叶片淡紫色，长大后叶面绿色，叶背淡紫红色。总状花序疏生数朵花，花通常具香气，花期8～9月。杂交五唇蝶兰植株粗壮，叶近基生，肉质，绿色微带红色，花梗从基部生出，高60～90cm，花枝和开花。五唇兰在我国栽培较少，国外兰花自1923年杂交育种至今，品种颇多，比原生种观赏效果更高，花色和花型更美观，而且生长势更强，栽培容易，很适合商业化生产。
火焰兰属(reanathera)植物全世界约有21种，为附生或半附生植物，分布于东南亚至喜马拉雅地区，包括华南地区，我国原产3种。我国产的3种火焰兰其中1种ren.coccinea产广东，海南地区，植株高大生长健旺，2种(ren.imschootiana和ren.sinica)产云南。火焰兰生长健旺，花色艳丽，花数众多，远观如火焰般绚丽，具有很高的园艺应用价值和育种价值；是国际花卉市场上十分流行的高档花卉，在世界上具有大量的爱好者。而且其生长环境为热带亚热带，适合在华南地区栽培，未来有希望在华南地区建立其育种和生产基地，形成类似蝴蝶兰、石斛兰的产业。火焰兰已成为世界上濒危的植物物种之一，所有野生种类均被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(cites)附录中而被禁止贸易。
火焰兰杂交种比原生种花型花姿更为优美，生长势和抗逆性强，在花色上比原生种更为艳丽多彩，也能在国际市场上进行交易，现已成为世界火焰兰产业的主流产品，但我国火焰兰的杂交育种工作还刚刚起步，火焰兰产业具有广阔的市场前景。
火焰兰杂交种子由于其种胚发育不完全，自然状态下萌发率极低。火焰兰种苗生产已有的报道，普遍存在培养周期长、操作复杂、生产成本较高的问题。因此，需要开发一种操作简单、成本低且能获得较高的种子萌发率和培育出大量的试管苗的火焰兰快速繁殖方法。
杂交育种是培育兰花新品种的有效手段，将五唇兰与火焰兰进行杂交，有望培育出更具观赏价值的兰花新品种，但是两者为不同属，且五唇兰自然开花期为8～9月，而火焰兰自然开花期为3～5月，其杂交成功需要解决花期不遇及远缘杂交亲和性不高的瓶颈问题，以及新品种的遗传稳定性、一致性和特异性的关键问题。目前，国内已有兰花杂交育种、花粉保存、胚拯救等的论文报道，但未见五唇兰与火焰兰属间杂交培育新品种的方法报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于开发出一种快速高效培育五唇兰与火焰兰杂交的兰花新品种的方法，解决兰花杂交育种中远缘杂交成功率低、育种周期长的问题。
本发明选择具明显特性观赏价值高的五唇兰作为杂交母本，在母本花朵展开后2～4天内进行人工授粉，父本则是采用无菌低温保存的具生活力的具明显特性观赏价值高的火焰兰的花粉。授粉成功得到的果实在发育到一定时间后进行无菌播种，促进杂种胚发育成为单个原球茎，再通过单个原球茎的克隆增殖技术扩大其群体，分化成苗后进行移栽和栽培至开花植株，同时建立新品系的无性繁殖技术体系，最后通过新品种的审定获得新品种证书，从而实现了本发明的目的。
本发明方法采用无菌低温保存兰花花粉、授粉前对花粉进行解冷和回湿处理等技术，解决花粉保存时的霉变问题以及兰花属间杂交花期不遇的瓶颈问题；利用胚拯救培养技术解决属间远缘杂交杂种胚发育不良的关键问题；通过单个杂种胚无菌培养发育为原球茎后进行相对应的原球茎克隆增殖培养，较好地解决新品种的遗传稳定性、一致性关键问题，避免传统杂交育种年限长的缺点，可快速高效培育出五唇兰与火焰兰属间杂交兰花新品种。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种五唇兰与火焰兰属间杂交快速高效培育兰花新品种的方法，包括以下步骤：
(1)花粉收集及保存：在父本火焰兰单花花瓣刚展开时，应用灭菌的挑取工具挑掉兰花的药帽，再用灭菌的挑取工具将兰花花粉块挑至洁净无菌的容器中密封好，置于4～6℃避光保存；
(2)人工授粉及杂交果实培育：当母本五唇兰开花时，将步骤(1)保存的花粉块在室温条件下解冻20～30min，然后再加入无菌水进行回湿处理20～30min，得到具有活力的花粉；将具有活力的花粉授粉于母本五唇兰的花朵柱头上，进行杂交蒴果的培育；
(3)杂种胚培养发育为原球茎：当杂交蒴果发育至100～120天，采摘杂交果实，经消毒后切开杂交果实，将粉末状杂种胚接种至胚拯救培养基中进行无菌培养，得到原球茎，所述的胚拯救培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁25～30mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子水50～80ml、香蕉泥50～100g、苹果泥10～20g、活性碳500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤0.05～0.1mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，ph5.4～5.6；
(4)原球茎增殖：将步骤(3)得到的单个原球茎转移至类原球茎增殖培养基中进行克隆增殖培养，得到类原球茎群体，所述的类原球茎增殖培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，ph5.4～5.6；
(5)原球茎分化培养：将步骤(4)得到的类原球茎群体转移至分化培养基中进行分化培养，直至类原球茎群体分化形成不定芽，所述的分化培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、香蕉泥50～80g、活性碳50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤3.0～5.0mg、萘乙酸0.4～0.5mg、蔗糖20～30g、琼脂6～7g，余量为水，ph5.4～5.6；
(6)不定芽生根成苗培养：将步骤(5)得到的3～5厘米不定芽转移至生根壮苗培养基中进行成苗培养，所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥50～60g、活性碳500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素5～10mg、盐酸吡哆醇0.5～1.0mg、烟酸5～10mg、萘乙酸0.5～1.0mg、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，ph5.4～5.6；
(7)成苗移栽及栽培：待不定芽长至高5～8cm的成苗时，转移到自然光下炼苗10～20天，然后移入到基质中培育，得到五唇兰与火焰兰属间杂交品种。
所述步骤(3)的在胚拯救培养基中进行无菌培养和步骤(4)的在类原球茎增殖培养基中进行增殖培养的培养条件均为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12h/d。
所述步骤(5)的在分化培养基中进行分化培养和步骤(6)的在生根壮苗培养基中进行成苗培养的培养条件均为：培养温度为25～29℃，光照度2000～3000lx，光照12h/d。
本发明还提供了一种五唇兰与火焰兰属间杂交种的无性繁殖方法，具体的，包括以下步骤：
(1)以上述成苗作为材料，切取成苗株系的嫩芽上带节的茎段和顶芽，进行消毒，将茎段和顶芽接种到原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d的条件下进行培养，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转移到新的原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d的条件下进行培养，获得原球茎；所述的原球茎诱导培养基sb1每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子汁50～100ml、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤5.0～8.0mg、萘乙酸0.2～2mg、蔗糖15～30g、琼脂6～7g，余量为水，ph5.4～5.6；
(2)获得原球茎后，重复上述五唇兰与火焰兰属间杂交快速高效培育兰花新品种的方法中的原球茎增殖、原球茎分化、不定芽生根成苗、成苗移栽及栽培过程，完成新品系的无性繁殖。
与现有技术相比，本发明的创新性和有益效果在于：
(1)本发明利用无菌低温保存兰花花粉、授粉前对花粉进行解冷和回湿处理等技术，解决花粉保存时的霉变问题以及兰花属间杂交花期不遇的瓶颈问题。
(2)本发明利用胚拯救培养技术解决属间远缘杂交杂种胚发育不良的关键问题。
(3)本发明通过单个杂种胚无菌培养发育为原球茎后再进行对应的原球茎克隆增殖培养，并由增殖出来的类原球茎培育出一致的杂种后代植株，杂交至培育出兰花新品种只需4～6年，传统兰花杂交培育出新品种往往需要8～10年，避免传统杂交育种年限长的缺点，可快速培育出兰花新品种。
(4)本发明每个杂种胚都可以培育成一个新品种，育种效率高。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。实施例中使用的花宝1号(hyponex1)、花宝2号(hyponex2)为美国生产中国台湾台和园艺企业股份有限股份有限公司分装产品。
实施例1
(1)火焰兰花粉收集及保存：
a、挑取工具及存放器皿的准备：用300ml的玻璃瓶分别装进用于挑取花粉块的牙签及存放花粉块的1ml塑料管，盖上盖子，于121℃条件下进行灭菌30分钟后备用。
b、火焰兰(父本)于3月初开花，在其单花花瓣刚展开时，于上午8～9时应用已灭菌的牙签轻轻挑掉花的药帽，再用牙签将花粉块粘连在牙签尖上并迅速将花粉块放至洁净无菌的1ml塑料管内，每管放入1朵花的花粉块，将放置了花粉块的塑料管再用一个无菌的玻璃瓶集中装起来并密封好，将装满花粉的玻璃瓶放置于冰箱低温保鲜层(4～6℃)避光保存。
(2)人工授粉及杂交果实培育：当五唇兰(母本)于8月初开花时，将步骤(1)保存的火焰兰花粉进行解冷和回湿处理，以恢复和提高花粉的生活力。先将低温保存的火焰兰花粉在室温条件下解冻20min，然后再往放置花粉块的塑料管(ep管)内加几滴无菌水进行回湿处理20min，最后采用氯化三苯四氮唑染色法测定花粉生活力，染色率达83％，确定花粉有活力，将其授粉于母本五唇兰的花朵的柱头上。授粉后套袋，约1星期后去袋，要挂上标签，标签上具有父、母本名称、杂交日期和授粉人等信息。注意观察其发育情况，统计授粉的成功率，结实率达85％以上。成功进行杂交授粉后，加强母本五唇兰植株的肥水管理，保证杂交蒴果的正常发育。注意观察杂交蒴果的发育情况，等果实发育至100天后即可采集进行无菌播种。
(3)杂种胚培养发育为原球茎：当杂交蒴果发育至100天后，采摘杂交果实，经消毒(将兰花蒴果在体积分数70％乙醇溶液中浸泡15～30s，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒15～20min，无菌水冲洗4～5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分)后切开杂交果实，将粉末状杂种胚接种至胚拯救培养基中，在培养温度24℃，光照度1500lx，光照12h/d的条件下进行无菌培养20～30天后可见杂种胚膨大转绿，培养40～50天时单个杂种胚可萌发形成单个原球茎，所述的胚拯救培养基每升含花宝1号1g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)25mg、乙二胺四乙酸二钠20mg、蛋白胨0.5g、椰子水50ml、香蕉泥50g、苹果泥10g、活性碳500mg、肌醇80mg、甘氨酸1.5mg、盐酸硫胺素0.05mg、盐酸吡哆醇0.4mg、烟酸0.4mg、6-苄基嘌呤0.05mg、萘乙酸0.2mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为水，ph5.4，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(4)原球茎增殖：将步骤(3)得到的单个原球茎转移至类原球茎增殖培养基中，在培养温度24℃，光照度1500lx，光照12h/d的条件下进行克隆增殖培养，继代周期为45～50天，每个原球茎一个编号分开培养，进行原球茎增殖，经过4～8次继代增殖培养，每一个编号的原球茎可增殖出1000～400000个类原球茎群体，所述的类原球茎增殖培养基为每升含花宝1号1g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)20mg、乙二胺四乙酸二钠20mg、蛋白胨0.5g、土豆泥40g、肌醇80mg、甘氨酸1.5mg、盐酸硫胺素0.05mg、盐酸吡哆醇0.4mg、烟酸0.4mg、6-苄基嘌呤2.0mg、萘乙酸0.2mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为水，ph5.4，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(5)原球茎分化培养：将步骤(4)得到的类原球茎群体转移至分化培养基中，在培养温度为25℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行分化培养45天后，类原球茎群体茎在培养基上分化形成高3～5cm的不定芽，此不定芽材料编号对应其原球茎编号。所述的分化培养基每升含花宝1号1g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)20mg、乙二胺四乙酸二钠20mg、蛋白胨0.5g、香蕉泥50g、活性碳50mg、肌醇80mg、甘氨酸1.5mg、盐酸硫胺素0.05mg、盐酸吡哆醇0.4mg、烟酸0.4mg、6-苄基嘌呤3.0mg、萘乙酸0.4mg、蔗糖20g、琼脂6g，余量为水，ph5.4，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(6)不定芽生根成苗培养：将步骤(5)得到的高3～5cm的不定芽转移至生根壮苗培养基中，在培养温度为25℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行成苗培养60天，苗高可达到5～8cm，根数3～5条，生根率为100％以上。成苗编号对应其不定芽编号。所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号1g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)20mg、乙二胺四乙酸二钠20mg、蛋白胨0.5g、土豆泥50g、活性碳500mg、肌醇80mg、甘氨酸1.5mg、盐酸硫胺素5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、烟酸5mg、萘乙酸0.5mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为水，ph5.4，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(7)成苗移栽及栽培：待不定芽长至高5～8cm的成苗时，将培养瓶转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石：木屑：树皮按体积比为1:1:1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90％以上，得到五唇兰与火焰兰属间杂交品种。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
实施例2
(1)火焰兰花粉收集及保存：
a、挑取工具及存放器皿的准备：用300ml的玻璃瓶分别装进用于挑取花粉块的牙签及存放花粉块的1ml塑料管，盖上盖子，于121℃条件下进行灭菌30分钟后备用。
b、火焰兰(父本)于3月初开花，在其单花花瓣刚展开时，于上午8～9时应用已灭菌的牙签轻轻挑掉花的药帽，再用牙签将花粉块粘连在牙签尖上并迅速将花粉块放至洁净无菌的1ml塑料管内，每管放入1朵花的花粉块，将放置了花粉块的塑料管再用一个无菌的玻璃瓶集中装起来并密封好，将装满花粉的玻璃瓶放置于冰箱低温保鲜层(4～6℃)避光保存。
(2)人工授粉及杂交果实培育：当五唇兰(母本)于8月初开花时，将步骤(1)保存的火焰兰花粉进行解冷和回湿处理，以恢复和提高花粉的生活力。先将低温保存的火焰兰花粉在室温条件下解冻30min，然后再往放置花粉块的塑料管内加几滴无菌水进行回湿处理30min，最后采用氯化三苯四氮唑染色法测定花粉生活力，染色率达83％，确定花粉有活力，将其授粉于母本五唇兰已开放的花朵的柱头上。授粉后套袋，约1星期后去袋，要挂上标签，标签上具有父、母本名称、杂交日期和授粉人等信息。注意观察其发育情况，统计授粉的成功率，结实率达85％以上。成功进行杂交授粉后，加强母本五唇兰植株的肥水管理，保证杂交蒴果的正常发育。注意观察杂交蒴果的发育情况，等果实发育至120天后即可采集进行无菌播种。
(3)杂种胚培养发育为原球茎：当杂交蒴果发育至120天后，采摘杂交果实，经消毒(将兰花蒴果在体积分数70％乙醇溶液中浸泡15～30s，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒15～20min，无菌水冲洗4～5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分)后切开杂交果实，将粉末状杂种胚接种至胚拯救培养基中，在培养温度28℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行无菌培养20～30天后可见杂种胚膨大转绿，培养40～50天时单个杂种胚可萌发形成单个原球茎，所述的胚拯救培养基每升含花宝1号2g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)30mg、乙二胺四乙酸二钠40mg、蛋白胨2g、椰子水80ml、香蕉泥100g、苹果泥20g、活性碳1000mg、肌醇120mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素0.2mg、盐酸吡哆醇0.8mg、烟酸0.8mg、6-苄基嘌呤0.1mg、萘乙酸0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(4)原球茎增殖：将步骤(3)得到的单个原球茎转移至类原球茎增殖培养基中，在培养温度28℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行克隆增殖培养，继代周期为40～50天，每个原球茎一个编号分开培养，进行原球茎增殖，经过4～8次继代增殖培养，每一个编号的原球茎可增殖出1000～400000个类原球茎群体，所述的类原球茎增殖培养基每升含花宝1号2g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)40mg、乙二胺四乙酸二钠40mg、蛋白胨2g、土豆泥80g、肌醇120mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素0.2mg、盐酸吡哆醇0.8mg、烟酸0.8mg、6-苄基嘌呤5.0mg、萘乙酸0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(5)原球茎分化培养：将步骤(4)得到的类原球茎群体转移至分化培养基中，在培养温度为29℃，光照度3000lx，光照12h/d的条件下进行分化培养45天后，类原球茎群体在培养基上分化形成高3～5cm的不定芽，此不定芽材料编号对应其原球茎编号。所述的分化培养基每升含花宝1号2g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)40mg、乙二胺四乙酸二钠40mg、蛋白胨2g、香蕉泥80g、活性碳100mg、肌醇120mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素0.2mg、盐酸吡哆醇0.8mg、烟酸0.8mg、6-苄基嘌呤5.0mg、萘乙酸0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(6)不定芽生根成苗培养：将步骤(5)得到的高3～5cm的不定芽转移至生根壮苗培养基中，在培养温度为29℃，光照度3000lx，光照12h/d的条件下进行成苗培养60天，苗高可达到5～8cm，根数3～5条，生根率为100％以上。成苗编号对应其不定芽编号。所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号2g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)40mg、乙二胺四乙酸二钠40mg、蛋白胨2g、土豆泥60g、活性碳1000mg、肌醇120mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素10mg、盐酸吡哆醇1.0mg、烟酸10mg、萘乙酸1.0mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(7)成苗移栽及栽培：待不定芽长至高5～8cm的成苗时，将培养瓶转移到自然光下炼苗20天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石：木屑：树皮按体积比为1:1:1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90％以上，得到五唇兰与火焰兰属间杂交品种。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
实施例3
(1)原球茎诱导：以实施例1的不定芽长至苗高5～8cm的成苗作为材料，切取成苗株系的嫩芽上带节的茎段和顶芽，进行消毒(茎段和顶芽→干燥棉花擦拭1次→75％乙醇浸泡的棉花擦拭1次→去除多余叶片并将其切成小段，每段包含一个芽点→75％乙醇充分浸泡30s→无菌水清洗3次→0.1％hgcl2充分浸泡4～6min→无菌水冲洗3次→吹干多余水分后剥去苞叶→0.1％hgcl2充分1～2min→吹干多余水分)，将茎段和顶芽接种到原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度1500lx，光照时间12h/d的条件下进行培养，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转移到新的原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度1500lx，光照时间12h/d的条件下进行培养90天后，获得原球茎；所述的原球茎诱导培养基sb1每升含花宝1号1g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)20mg、乙二胺四乙酸二钠20mg、蛋白胨0.5g、椰子汁50ml、肌醇80mg、甘氨酸1.5mg、盐酸硫胺素0.05mg、盐酸吡哆醇0.4mg、烟酸0.4mg、6-苄基嘌呤5.0mg、萘乙酸0.2mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为水，ph5.4，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(2)原球茎增殖：将步骤(1)得到的单个原球茎转移至类原球茎增殖培养基中，在培养温度26℃，光照度1800lx，光照12h/d的条件下进行克隆增殖培养，继代周期为45～50天，每个原球茎一个编号分开培养，进行原球茎增殖，经过4～8次继代增殖培养，每一个编号的原球茎可增殖出1000～400000个类原球茎群体，所述的类原球茎增殖培养基每升含花宝1号1.5g、花宝2号1.5g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)30mg、乙二胺四乙酸二钠30mg、蛋白胨1g、土豆泥60g、肌醇100mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素0.1mg、盐酸吡哆醇0.6mg、烟酸0.6mg、6-苄基嘌呤3.0mg、萘乙酸0.3mg、蔗糖20g、琼脂6g，余量为水，ph5.5，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(3)原球茎分化培养：将步骤(2)得到的类原球茎群体转移至分化培养基中，在培养温度为28℃，光照度2500lx，光照12h/d的条件下进行分化培养45天后，类原球茎群体在培养基上分化形成高3～5cm的不定芽，此不定芽材料编号对应其原球茎编号。所述的分化培养基每升含花宝1号1.5g、花宝2号1.5g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)30mg、乙二胺四乙酸二钠30mg、蛋白胨1g、香蕉泥60g、活性碳80mg、肌醇100mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素0.1mg、盐酸吡哆醇0.6mg、烟酸0.5mg、6-苄基嘌呤4mg、萘乙酸0.4mg、蔗糖25g、琼脂7g，余量为水，ph5.5，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(4)不定芽生根成苗培养：将步骤(3)得到的高3～5cm的不定芽转移至生根壮苗培养基中，在培养温度为28℃，光照度2500lx，光照12h/d的条件下进行成苗培养60天，苗高可达到5～8cm，根数3～5条，生根率为100％以上。成苗编号对应其不定芽编号。所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号1.5g、花宝2号1.5g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)30mg、乙二胺四乙酸二钠30mg、蛋白胨1g、土豆泥55g、活性碳800mg、肌醇100mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素8mg、盐酸吡哆醇0.8mg、烟酸7mg、萘乙酸0.8mg、蔗糖25g、琼脂6g，余量为水，ph5.5，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(5)成苗移栽及栽培：待不定芽长至苗高5～8cm时，将培养瓶转移到自然光下炼苗20天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石：木屑：树皮按体积比为1:1:1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90％以上，得到五唇兰与火焰兰属间杂交品种。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
实施例4
(1)原球茎诱导：以实施例1的不定芽长至苗高5～8cm的成苗作为材料，切取成苗株系的嫩芽上带节的茎段和顶芽，进行消毒(茎段和顶芽→干燥棉花擦拭1次→75％乙醇浸泡的棉花擦拭1次→去除多余叶片并将其切成小段，每段包含一个芽点→75％乙醇充分浸泡30s→无菌水清洗3次→0.1％hgcl2充分浸泡4～6min→无菌水冲洗3次→吹干多余水分后剥去苞叶→0.1％hgcl2充分1～2min→吹干多余水分)，将茎段和顶芽接种到原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度2000lx，光照时间12h/d的条件下进行培养，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转移到新的原球茎诱导培养基sb1中，在培养温度25±2℃，光照度2000lx，光照时间12h/d的条件下进行培养90天后，获得原球茎，所述的原球茎诱导培养基sb1：每升含花宝1号2g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)40mg、乙二胺四乙酸二钠40mg、蛋白胨2g、椰子汁100ml、肌醇120mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素0.2mg、盐酸吡哆醇0.8mg、烟酸0.8mg、6-苄基嘌呤8.0mg、萘乙酸2mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(2)原球茎增殖：将步骤(1)得到的单个原球茎转移至类原球茎增殖培养基中，在培养温度27℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行克隆增殖培养，继代周期为45～50天，每个原球茎一个编号分开培养，进行原球茎增殖，经过4～8次继代增殖培养，每一个编号的原球茎可增殖出1000～400000个类原球茎群体，所述的类原球茎增殖培养基每升含花宝1号1g、花宝2号2g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)35mg、乙二胺四乙酸二钠25mg、蛋白胨2g、土豆泥70g、肌醇110mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素0.1mg、盐酸吡哆醇0.5mg、烟酸0.5mg、6-苄基嘌呤4.0mg、萘乙酸0.4mg、蔗糖25g、琼脂7g，余量为水，ph5.6，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(3)原球茎分化培养：将步骤(2)得到的类原球茎群体转移至分化培养基中，在培养温度为27℃，光照度2000lx，光照12h/d的条件下进行分化培养45天后，类原球茎群体在培养基上分化形成高3～5cm的不定芽，此不定芽材料编号对应其原球茎编号。所述的分化培养基每升含花宝1号2g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)30mg、乙二胺四乙酸二钠30mg、蛋白胨2g、香蕉泥70g、活性碳100mg、肌醇90mg、甘氨酸2mg、盐酸硫胺素0.1mg、盐酸吡哆醇0.4mg、烟酸0.6mg、6-苄基嘌呤5mg、萘乙酸0.4mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为水，ph5.5，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(4)不定芽生根成苗培养：将步骤(3)得到的高3～5cm的不定芽转移至生根壮苗培养基中，在培养温度为28℃，光照度3000lx，光照12h/d的条件下进行成苗培养60天，苗高可达到5～8cm，根数3～5条，生根率为100％以上。成苗编号对应其不定芽编号。所述的生根壮苗培养基每升含花宝1号2g、花宝2号1g、硫酸亚铁(feso4·7h2o)20mg、乙二胺四乙酸二钠30mg、蛋白胨1.5g、土豆泥60g、活性碳800mg、肌醇100mg、甘氨酸2.5mg、盐酸硫胺素7mg、盐酸吡哆醇0.6mg、烟酸6mg、萘乙酸0.7mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为水，ph5.5，其制备方法是将所有成分按其含量混合均匀，调ph值，灭菌消毒即可。
(5)成苗移栽及栽培：待不定芽长至苗高5～8cm时，将培养瓶转移到自然光下炼苗20天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石：木屑：树皮按体积比为1:1:1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90％以上，得到五唇兰与火焰兰属间杂交品种。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。