三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备抗TSWV活性产品中的应用的制作方法

本发明属于生物农药领域，具体涉及三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备抗tswv活性产品中的应用。

背景技术：

生产上从天然产物及其类似物中筛选出抗病毒先导化合物，研发抗病毒新型生物源农药将是防治病毒病的重要途径之一。目前市售的从南板蓝根中提取的安托芬以及从植物中提取的毒氟磷均是能有效抑制tmv活性的生物源农药。有关tswv生物活性药剂筛选方面，赵永发等进行了菠菜等作物粗提物抗tswv的活性试验，其中商陆和菠菜的粗提物对tswv的抑制效果分别达到94.81％和92.63％；陈永对等也通过田间施用aho(3-acetony1-3-hydroxyoxindole)发现对tswv有一定的防控效果。目前研究发现三裂叶蟛蜞菊(wedeliatrilobata(l.)hitchc.)[syn.sphagneticolatrilobata(l.)pruski]的提取物具有抗tmv、防虫、杀菌等活性，但是抗tswv活性未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备抗tswv活性产品中的应用。提供三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备tswv抑制剂中的应用，在制备tswv防控剂中的应用，在制备tswv预防剂中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

如下结构式所示的三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备抗tswv活性产品中的应用，

化合物1化合物2化合物3

化合物4化合物5化合物6。

三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备tswv抑制剂中的应用。

三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备tswv防控剂中的应用。

三裂蟛蜞菊化合物1-6在制备tswv预防剂中的应用。

如所述的应用，其中所述的化合物4ahk浓度为200μg/ml。

与现有技术相比，本发明化合物对tswv表现出不同程度的防控效果，其中化合物1、化合物2、化合物4、化合物6的抑制率超过对照药剂宁南霉素(抑制率为58.8％)，以化合物4(3α-(angeloyloxy)-9β-hydroxy-ent-kaur-16-en-19-oilacid,缩写ahk)抑制率最高，为62.40％。有4个化合物对tswv表现出不同程度的预防效果。其中化合物2、化合物4、化合物6的抑制率超过对照药剂宁南霉素(抑制率为61.25％)。

附图说明

图1为本发明化合物ahk抑制效果图，a-c：ahk防控效果；d-f：ahk预防效果；a，d:阳性对照；b，e：宁南霉素对照；c，f：ahk；g：ahk防控试验的浓度梯度效应；h：ahk预防试验的浓度梯度效应。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1

三列蟛蜞菊中部分化合物抗tswv活性分析：

化合物1为

化合物2为

化合物3为

化合物4为

化合物5为

化合物6为

方法

1毒源的制备

番茄斑萎病毒(tomatospottedwiltvirus,tswv)采自于云南省红河州开远市柿子椒上面，之后纯化保存于-80℃冰箱，接种于5-6真叶期烟叶上，5～7d后采集接种叶的上位叶(系统叶)样品，加入接种缓冲液进行研磨，研磨成汁液后待用。用感病植物汁液接种，接种浓度为100mg/ml。

2化合物制剂的制备

化合物用二甲基亚砜(dmso)溶解，浓度为10mg/ml，再用无菌水稀释成80、100、150和200μg/ml，用100μg/ml作初始活性筛选，每种化合物制剂作为一种处理，宁南霉素按照说明书用无菌水稀释成浓度80μg/ml。

3防控试验

选择生长旺盛的5-6真叶期烟叶摩擦接种tswv，接种于第4片和第5片真叶上，10min后用清水冲洗，24h后再涂抹化合物制剂，涂抹均匀，直至化合物制剂用完。10min后用清水冲洗，对照分别设先摩擦接种tswv，24h后涂抹dmso(用无菌水稀释成100μg/ml)；先摩擦接种tswv，24h后涂抹宁南霉素作为阳性对照；只摩擦不接种tswv,24h后涂抹dmso作为空白对照。植物生长于无虫温室中。重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。

抑制率(％)＝(阳性对照枯斑数-处理枯斑数)/阳性对照枯斑数×100％

4预防试验

选择生长旺盛的5-6真叶期烟叶涂抹化合物制剂，涂抹于第4片和第5片真叶上，涂抹均匀，直至化合物制剂用完。10min后用清水冲洗，6h后摩擦接种tswv，10min后用清水冲洗。对照分别设先涂抹dmso(100μg/ml)，6h后接种tswv；先施宁南霉素6h后接种tswv阳性对照；只涂抹dmso作为空白对照。植物生长于无虫温室中。重复3次，3d后统计枯斑数，计算抑制率。

结果与分析

1活性化合物的防控效果

涂化合物3d后调查结果发现，6个化合物中有2个化合物处理未起作用，有4个化合物对tswv表现出不同程度的防控效果，见(表1，图1a-c)，其中化合物1、化合物2、化合物4、化合物6的抑制率超过对照药剂宁南霉素(抑制率为58.8％)，以化合物4(3α-(angeloyloxy)-9β-hydroxy-ent-kaur-16-en-19-oilacid,缩写ahk)抑制率最高，为62.40％。

表1不同化合物对tswv的抑制效果

2活性化合物的预防效果

接种病毒3d后调查结果发现，6种化合物中有2个化合物处理未起作用，有4个化合物对tswv表现出不同程度的预防效果。其中化合物2、化合物4、化合物6的抑制率超过对照药剂宁南霉素(抑制率为61.25％)，以化合物4(3α-(angeloyloxy)-9β-hydroxy-ent-kaur-16-en-19-oilacid,缩写ahk)抑制率最高，为76.50％(表1，图1中的d-f)。

3活性化合物的浓度梯度效果

对防控效果和预防效果最好的化合物ahk进行浓度梯度实验，活性化合物设四个浓度梯度：80μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml进行抑制活性测定，其抑制率随化合物浓度增加而提高，具有明显的浓度效应，ahk浓度为200μg/ml时抑制率最高，防控作用和预防作用分别为84.00％和87.0％。(见图1中的g，h)。