以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液的制作方法

本发明涉及一种精子稀释液，特别是以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液。
背景技术：
：随着我国养猪业不断集约化、专业化、生态化和科技化发展，猪的人工授精技术在现代养猪业中受到越来越多的关注。但是猪精子体外保存目前通常是在16.5～17℃保存，一旦低于此温度会严重影响猪精子的活力与存活率。猪精子对温度的改变特别是降温非常敏感，但温度较高会导致精子的能量消耗过高，因此有必要研究猪精子的低温保存的稀释液。技术实现要素：本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供一种以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，从而延长猪精子的保存时间。为了实现上述目的，本发明所设计的一种以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，所述低温稀释液包括中华鳖冬眠血清、中华鳖卵黄液、缓冲盐类、营养成分、抗生素。所述低温稀释液为每1l稀释液中含有中华鳖冬眠血清30-50ml、离心后备用的卵黄液15-25ml、果糖25-35g、蔗糖30-50g、柠檬酸钠3-5g、青霉素0.5-0.8g，链霉素0.5-0.8g；其配置方法是将上述原材料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。作为优选，所述低温稀释液为每1l稀释液中含有中华鳖冬眠血清40ml、离心后备用的卵黄液20ml、果糖30.0g、蔗糖40.0g、柠檬酸钠4.0g、青霉素钠0.6g、链霉素0.6g。所述中华鳖冬眠血清的制备方法是待中华鳖冬眠后，抽血获得中华鳖冬眠血清，超低温冷冻，待用；当需要使用时，将中华鳖冬眠血清在4℃解冻，解冻后4℃离心，去沉淀后留上清，用0.22μm膜无菌过滤即可。所述离心后备用的中华鳖卵黄液的制备方法是在低温条件下冷冻中华鳖卵，外壳在进行全面消毒后切开取卵黄；卵黄与蒸馏水在室温下按比例配制成10％的卵黄溶液，过滤离心后取上清液备用。中华鳖冬眠时潜入水下，能耐受的低温在4℃左右。在5-6个月漫长的冬眠期内，雄性体内的精子能够安然越冬。因此，冬眠中华鳖的中华鳖冬眠血清内可能会含有某种物质，可以延长精子体外的保存时间。因此本专利使用中华鳖的中华鳖冬眠血清为基础，开发出能诱导精子进入冬眠的稀释液配方，从而达到长期储存的目的。同样的，中华鳖卵黄液相较于普通的鸡蛋卵黄液，也可以延长精子体外保存时间。稀释液的使用方法是将稀释液配制好后经过0.22微米的滤器进行除菌，冷冻保存。稀释液和精子进行混合时，温度保持一致。保证试验用精子保存的最终密度范围在每毫升1.0×108～1.5×108之间。本发明得到的以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，其通过加入中华鳖冬眠血清，从而将猪精子体外保存温度降低到4℃，最适合温度为6-8℃。低温保存的精子经过组织学分析，精子顶体的完整性明显好于常温保存。附图说明图1是没有中华鳖冬眠血清稀释液保存5天的猪精子的显微镜图像；图2是含有中华鳖冬眠血清稀释液保存5天的猪精子的显微镜图像。具体实施方式下面结合实施例对本发明进一步说明。实施例1：本实施例提供的一种以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，所述低温稀释液为每1l稀释液中含有中华鳖冬眠血清40ml、离心后备用的卵黄液20ml、果糖30.0g、蔗糖40.0g、柠檬酸钠4.0g、青霉素钠0.6g、链霉素0.6g。其配置方法是将上述原材料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。所述中华鳖冬眠血清的制备方法是待中华鳖冬眠后，抽血获得中华鳖冬眠血清，超低温冷冻，待用；当需要使用时，将中华鳖冬眠血清在4℃解冻，解冻后4℃离心，去沉淀后留上清，用0.22μm膜无菌过滤即可。所述离心后备用的中华鳖卵黄液的制备方法是在低温条件下冷冻中华鳖卵，外壳在进行全面消毒后切开取卵黄；卵黄与蒸馏水在室温下按比例配制成10％的卵黄溶液，过滤离心后取上清液备用。稀释液的使用方法是将稀释液配制好后经过0.22微米的滤器进行除菌，冷冻保存。稀释液和精子进行混合时，温度保持一致。实施例2：本实施例提供的一种以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，其与实施例1的区别在于所述低温稀释液为每1l稀释液中含有中华鳖冬眠血清30ml、离心后备用的卵黄液15ml、果糖25g、蔗糖30g、柠檬酸钠3g、青霉素0.5g，链霉素0.5g。实施例3：本实施例提供的一种以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液，其与实施例1的区别在于所述低温稀释液为每1l稀释液中含有中华鳖冬眠血清50ml、离心后备用的卵黄液25ml、果糖35g、蔗糖50g、柠檬酸钠5g、青霉素0.8g，链霉素0.8g。经过测试，无中华鳖冬眠血清稀释液保存5天的猪精子，顶体完整性差；含有中华鳖冬眠血清稀释液保存5天的猪精子，顶体完整性好。试验结果如图1-2所示，试验数据如表1所示。表1本发明所得的以中华鳖冬眠血清为基础的猪精子低温稀释液对精子活力的影响温度6h后1d后2d后3d后4d后5d后17℃91.1％85.7％72.1％60.5％43.4％30.3％6℃91.4％87.1％79.1％66.6％51.6％43.8％当前第1页12