以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液的制作方法

本发明涉及一种精子稀释液，特别是以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液。
背景技术：
：随着我国养猪业不断集约化、专业化、生态化和科技化发展，猪的人工授精技术在现代养猪业中受到越来越多的关注。但是猪精子体外保存目前通常是在16.5～17℃保存，一旦低于此温度会严重影响猪精子的活力与存活率。猪精子对温度的改变特别是降温非常敏感，但温度较高会导致精子的能量消耗过高，因此有必要研究猪精子的低温保存的稀释液。技术实现要素：本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供一种以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液，从而延长猪精子的保存时间。为了实现上述目的，本发明所设计的一种以氯丙嗪为基础的猪精子常温稀释液，所述常温稀释液包括氯丙嗪为基础的细胞休眠体系、缓冲盐类、营养成分和抗生素。所述常温稀释液为每1l稀释液中含有氯丙嗪为基础的细胞休眠系统、葡萄糖11g、果糖17.5g、柠檬酸钠1.0g、edta-2na2.35g、碳酸氢钠1.0g、tris缓冲液5.65g、柠檬酸2.9g、青霉素0.1-0.3g、链霉素0.1-0.3g；其配置方法是将上述原料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。本发明还公开了一种以氯丙嗪为基础的猪精子低温稀释液，所述低温稀释液包括氯丙嗪为基础的细胞休眠体系、中华鳖卵黄液、缓冲盐类、营养成分和抗生素。所述低温稀释液为每1l稀释液中含有氯丙嗪为基础的细胞休眠系统、离心后备用的中华鳖卵黄液20ml、葡萄糖30.0g、蔗糖40.0g、柠檬酸钠4.0g、青霉素0.1-0.3g、链霉素0.1-0.3g、dmso(二甲基亚枫)10-40g；其配置方法是将上述原材料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。所述离心后备用的中华鳖卵黄液的制备方法是在低温条件下冷冻中华鳖卵，外壳在进行全面消毒后切开取卵黄；卵黄与蒸馏水在室温下按比例配制成10％的卵黄溶液，过滤离心后取上清液备用。上述以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液，其采用的氯丙嗪为基础的细胞休眠体系为如下配比的一种或者两种的混合液：(1)氯丙嗪1-4mg/ml，哌替啶1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，苯巴比妥10-100μg/ml，氢化麦角碱10-50μg/ml；(2)氯丙嗪1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，乙酰丙嗪0.2-1.2mg/ml，司巴丁100-200μg/ml，普鲁卡因10-40mg/ml。以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液的应用在于以氯丙嗪为基础来配制猪精子的常温及低温稀释液，从而以诱导细胞休眠的方式来延长猪精子的保存时间。在物理降温配合下，氯丙嗪对体温中枢的抑制作用，可使体温降到34℃或更低。此时基础代谢下降，组织耗氧量降低，器官活动减少。氯丙嗪对自主神经受体的阻断作用，可使肌体对刺激反应减弱。通过这些作用，在其他药物的配合下，可能使机体进入一种类似变温动物"冬眠"的深睡状态，此即称为人工冬眠。人工冬眠可降低机体对各种病理刺激的反应，提高各组织对缺氧的耐受力。在病理情况下处于异常收缩的小动脉得以舒张，微循环得到改善。机体在严重创伤和感染中毒引起衰竭时得以度过危险的缺氧和缺能阶段，为争取其他措施赢得时间。稀释液的使用方法是将稀释液配制好后经过0.22微米的滤器进行除菌，冷冻保存。稀释液和精子进行混合时，温度保持一致。保证试验用精子保存的最终密度范围在每毫升1.0×108～1.5×108之间。本发明得到的以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液，其通过加入氯丙嗪为基础的细胞休眠体系，从而将猪精子体外保存温度降低到10℃，最适合温度为12℃。低温保存的精子可以降低到4℃保存。经过组织学分析，降低温度保存后，精子顶体的完整性明显好于常温保存。附图说明图1是在17℃保存5天的猪精子的显微镜图像；图2是在12℃保存5天的猪精子的显微镜图像；图3是在6℃保存5天的猪精子的显微镜图像。具体实施方式下面结合实施例对本发明进一步说明。实施例1：本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子常温稀释液，所述常温稀释液为每1l稀释液中含有氯丙嗪为基础的细胞休眠系统、葡萄糖11g、果糖17.5g、柠檬酸钠1.0g、edta-2na2.35g、碳酸氢钠1.0g、tris缓冲液5.65g、柠檬酸2.9g、青霉素0.1-0.3g、链霉素0.1-0.3g；其配置方法是将上述原料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。所述氯丙嗪为基础的细胞休眠体系为氯丙嗪1-4mg/ml，哌替啶1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，苯巴比妥10-100μg/ml，氢化麦角碱10-50μg/ml。稀释液的使用方法是将稀释液配制好后经过0.22微米的滤器进行除菌，冷冻保存。稀释液和精子进行混合时，温度保持一致。本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子常温温稀释液的应用在于以氯丙嗪为基础来配制猪精子的常温稀释液，从而以诱导细胞休眠的方式来延长猪精子的保存时间。实施例2：本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子常温稀释液，其与实施例1的区别在于所述氯丙嗪为基础的细胞休眠体系为氯丙嗪1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，乙酰丙嗪0.2-1.2mg/ml，司巴丁100-200μg/ml，普鲁卡因10-40mg/ml。实施例3：本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子低温稀释液，所述低温稀释液为每1l稀释液中含有氯丙嗪为基础的细胞休眠系统、离心后备用的中华鳖卵黄液20ml、葡萄糖30.0g、蔗糖40.0g、柠檬酸钠4.0g、青霉素0.1-0.3g、链霉素0.1-0.3g、dmso(二甲基亚枫)10-40g；其配置方法是将上述原材料经搅拌后溶解在水溶液中，过滤除菌后冷冻保存备用；使用时和精子按照一定体积比例等温稀释即可。所述离心后备用的中华鳖卵黄液的制备方法是在低温条件下冷冻中华鳖卵，外壳在进行全面消毒后切开取卵黄；卵黄与蒸馏水在室温下按比例配制成10％的卵黄溶液，过滤离心后取上清液备用。所述氯丙嗪为基础的细胞休眠体系为氯丙嗪1-4mg/ml，哌替啶1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，苯巴比妥10-100μg/ml，氢化麦角碱10-50μg/ml。本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子低温稀释液的应用在于以氯丙嗪为基础来配制猪精子的低温稀释液，从而以诱导细胞休眠的方式来延长猪精子的保存时间。实施例4：本实施例提供的一种以氯丙嗪为基础的猪精子低温稀释液，其与实施例3的区别在于所述氯丙嗪为基础的细胞休眠体系为如下两种配比的混合液：(1)氯丙嗪1-4mg/ml，哌替啶1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，苯巴比妥10-100μg/ml，氢化麦角碱10-50μg/ml；(2)氯丙嗪1-4mg/ml，异丙嗪1-4mg/ml，乙酰丙嗪0.2-1.2mg/ml，司巴丁100-200μg/ml，普鲁卡因10-40mg/ml。经过测试，17℃保存5天的猪精子，顶体完整性较差；12℃保存5天的猪精子，顶体完整性优于17℃保存；6℃保存5天的猪精子，顶体完整性优于17℃保存。试验结果如图1-3所示，试验数据如表1所示。表1本发明所得的以氯丙嗪为基础的猪精子常温及低温稀释液对精子活力的影响温度6h后1d后2d后3d后4d后5d后常温17℃91.1％85.7％72.1％60.5％43.4％30.3％常温12℃94.3％81.6％75.7％65.2％61.2％47.1％低温6℃91.6％88.9％76.1％55.7％57.1％41.6％当前第1页12