本发明涉及中药材种植技术领域，具体涉及本一种促进重楼种子提早萌发的方法。
背景技术：
重楼为百合科重楼属云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎，属多年生草本植物，是国家药典收录的重要重楼原植物种之一。清热解毒、消肿散瘀、凉肝定惊之功效，主要用以治疗毒蛇咬伤、疔疮痈肿、咽喉肿痛、跌扑伤痛、惊风抽搐等。现代药理研究证明，重楼药材含有甾体皂苷、黄酮等多种有效成分，还具抗癌、抗微生物、抗生育、镇静、止血等作用。现用于多种重要制剂，如云南白药、红药、宫血宁、热毒清等。
目前，市场上的重楼以野生资源为主，重楼作为中成药产品的主要原料，全国野生品年采收量在1000t左右，而每年的消耗量远远超出了其年长量。由于长期过度的掠夺式的采挖，野生重楼遭到了毁灭性的破坏，现已濒临枯竭，人工种植成为解决重楼资源匮乏的必然选择。
近年来，许多地方已开始重楼的人工栽培。人工栽培常用的重楼繁殖方式主要有无性繁殖和种子有性繁殖。其中，无性繁殖主要是采用野生根茎直接种植或根茎切段种植，这需要用大量的原料药，会加剧用种与原料药的矛盾；组培快繁技术能虽一定程度上缩短生根发芽时间，但未能大规模运用于生产种植中。相对于无性繁殖，种子有性繁殖是重楼人工育苗工作中最可靠、繁殖效率最高的繁殖方式。然而，重楼种子因有“二次休眠”特性，种子萌发需经历2个阶段，即形态后熟和生理后熟阶段，在自然条件下，15个月后种子才能萌发，且萌发率低。
因此，缩短种子萌发时间，是重楼种子繁殖的关键环节打破重楼种子休眠期。目前，关于打破种子休眠，缩短萌发时间的文件也有。比如201110408521.7公开了一种有效解除重楼种子休眠的方法，通过去除外种皮后，采用双氧水加赤霉素的处理方式，有效打破重楼种子的休眠，使重楼种子从自然条件下需要15个月左右才能萌发缩短到只需3个月左右的时间。专利201410090014.7公开了滇重楼及毛重楼植物的种子萌发方法，通过恒温震荡浸泡、同基质拌匀播种，恒温室内培养的步骤，使重楼种子50-60天后发芽率可达70％以上。专利201610120077.1公开了一种重楼种子快速繁育方法，通过种子脱皮后，进行多次调温催芽，使重楼种子3个月有80％的种子露出胚根。专利201810210740.6公开了一种滇重楼种子的催芽及育苗方法，通过去除外种皮后，无需晾干，放于1800-2000米云贵高原地区高海拔冷藏，就能得到露白种子，使重楼种子2个月即可萌发。虽然这些方法都在一定程度上缩短了种子萌发时间，但是，种子萌发时间仍然较长。
技术实现要素：
鉴于上述内容，本发明提供一种促进重楼种子提早萌发的方法，通过低温冷藏、消毒、超声波处理和浸种剂浸泡处理，有效打破种子休眠，促进种子萌发，缩短萌发时间，为重楼生产栽培提供实际应用价值。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案，包括以下步骤：
(1)种子低温冷藏：挑取成熟、饱满、无病虫害的重楼种子，用水淘洗，用沙搓去表面红色假种皮，与含水量60％～70％的湿沙以1～3:9的重量配比混合后，置于冰箱中冷藏，冷藏过程保持沙土湿润透气；
(2)种子消毒：将上述冷藏后的种子放入体积浓度为5％～10％的次氯酸钠溶液中浸泡10h～14h，捞出种子，用无菌水冲洗2～3次，沥干水分，用针刺破种皮，再用稀硝酸溶液浸泡种子，捞出种子，用无菌水冲洗2～3次；
(3)超声波处理：高温黑暗中采用超声波处理步骤(2)的种子，捞出种子，沥干水分，将种子放在带双层脱脂棉纱布的芽床上；
(4)浸种剂浸泡种子：将步骤(3)超声波处理后的种子放入浸种剂中浸泡，捞出种子，用无菌水清洗2～3次，沥干水分。
进一步地，所述步骤(1)的冰箱冷藏温度为-4～4℃，处理时间为28～35d。
进一步地，所述步骤(2)的硝酸溶液浓度为0.2～0.5mol/l，浸泡时间为10h～15h。
进一步地，所述步骤(3)的超声波频率为40～50khz，温度为40～55℃，处理时间为40～60min。
进一步地，所述步骤(4)的浸种剂主要主要由以下组分混制而成：25～35g猪肝粉、1～5g聚乙二醇、100～600mg山梨酸钾和1000ml蒸馏水。
进一步地，所述步骤(4)的浸泡时间为16h～22h。
本发明所用的猪肝粉均为市售的合生元高铁猪肝粉。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
1、本发明通过低温冷藏、消毒、超声波处理和浸种剂浸泡处理，有效打破了重楼种子休眠，缩短了萌发时间，提高了萌发率，为重楼生产栽培提供实际应用价值。实践证明，采用本发明方法处理后，80％的种子萌发所需时间缩短至45～52d，萌发率高达80.0％～83.3％。
2、本发明采用的浸种剂为猪肝粉、聚乙二醇和山梨酸钾配制成的溶液，它能有效解除重楼种子休眠，促进种子萌发，缩短萌发时间。其中，猪肝粉不但能抑制重楼种子产生脱落酸(脱落酸可促进种子休眠)，减少了脱落酸的含量，进而打破了休眠，还能促使种子产生赤霉素，短期内增加了赤霉素含量，提高了种子内atp含量，增强了酶活性，促进了糖、蛋白、脂肪酸等物质的代谢，进而刺激种子提早萌发；聚乙二醇在一定浓度下，能提高种子萌发初期的atp含量，使种子生理活动提前启动，增强各种代谢活动，从而打破种子休眠，促进种子提早萌发；山梨酸钾具有抑菌活性，可加强猪肝粉与聚乙二醇两者功效，有利于解除种子休眠，促进种子萌发。因此，猪肝粉、聚乙二醇和山梨酸钾相互作用，协同增效，促进了种子的萌发。
3、本发明采用种子冷藏方法，低温促进重楼种子生理后熟，后期采用次氯酸钠溶液浸泡，起到消毒作用，再用稀硝酸溶液浸泡处理，能使种皮变软，增强种皮渗透性。此外，本发明采用高温超声波处理重楼种子，与二次低温积层处理种子相比，高温超声波的机械作用具有软化组织，提高生物膜通透性，增强渗透，促进种子内部与外界的物质交换，提高代谢作用，有利于种子的萌发。
【具体实施方式】
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1：
一种促进重楼种子提早萌发的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)种子低温冷藏：挑取成熟、饱满、无病虫害的重楼种子，用水淘洗，用沙搓去表面红色假种皮，与含水量60％的湿沙以1:9的重量配比混合后，置于于-4℃冰箱中冷藏28d，冷藏过程保持沙土湿润透气；
(2)种子消毒：将上述冷藏后的种子放入体积浓度为5％的次氯酸钠溶液中浸泡10h，捞出种子，用无菌水冲洗2次，沥干水分，用针刺破种皮，再用0.2mol/l稀硝酸溶液浸泡种子10h，捞出种子，用无菌水冲洗2次；
(3)超声波处理：40℃黑暗下，利用频率为40khz的超声波处理步骤(2)的种子40min，捞出种子沥干水分，将种子放在带双层脱脂棉纱布的芽床上；
(4)浸种剂浸泡种子：将步骤(3)超声波处理后的种子放入浸种剂中浸泡16h，捞出种子，用无菌水清洗2次，沥干水分；
上述浸种剂配制方法为：25g猪肝粉与100mg山梨酸钾加入蒸馏水中搅拌溶解，再加入1g聚乙二醇，搅拌溶解，用蒸馏水定容至1000ml。
用水浇湿放在芽床上的双层脱脂棉纱布，将上述种子放于湿润纱布上，保持纱布湿润，1800lx光照强度下，28℃培养种子。
实施例2：
一种促进重楼种子提早萌发的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)种子低温冷藏：挑取成熟、饱满、无病虫害的重楼种子，用水淘洗，用沙搓去表面红色假种皮，与含水量65％的湿沙以2:9的重量配比混合后，置于0℃冰箱中冷藏31.5d，冷藏过程保持沙土湿润透气；
(2)种子消毒：将上述冷藏后的种子放入体积浓度为7.5％的次氯酸钠溶液中浸泡12h，捞出种子，用无菌水冲洗3次，沥干水分，用针刺破种皮，再用0.35mol/l稀硝酸溶液浸泡种子12.5h，捞出种子，用无菌水冲洗3次；
(3)超声波处理：47.5℃黑暗下，利用频率为45khz的超声波处理步骤(2)的种子50min，捞出种子沥干水分，将种子放在带双层脱脂棉纱布的芽床上；
(4)浸种剂浸泡种子：将步骤(3)超声波处理后的种子放入浸种剂中浸泡19h，捞出种子，用无菌水清洗3次，沥干水分；
上述浸种剂配制方法为：30g猪肝粉与350mg山梨酸钾加入蒸馏水中搅拌溶解，再加入3g聚乙二醇，搅拌溶解，用蒸馏水定容至1000ml。
用水浇湿放在芽床上的双层脱脂棉纱布，将上述种子放于湿润纱布上，保持纱布湿润，1800lx光照强度下，28℃培养种子。
实施例3：
一种促进重楼种子提早萌发的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)种子低温冷藏：挑取成熟、饱满、无病虫害的重楼种子，用水淘洗，用沙搓去表面红色假种皮，与含水量70％的湿沙以1:3的重量配比混合后，置于4℃冰箱中冷藏35d，冷藏
(2)种子消毒：将上述冷藏后的种子放入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡14h，捞出种子，用无菌水冲洗3次，沥干水分，用针刺破种皮，再用0.5mol/l稀硝酸溶液浸泡种子15h，捞出种子，用无菌水冲洗3次；
(3)超声波处理：55℃黑暗下，利用频率为50khz的超声波处理步骤(2)的种子60min，捞出种子沥干水分，将种子放在带双层脱脂棉纱布的芽床上；
(4)浸种剂浸泡种子：将步骤(3)超声波处理后的种子放入浸种剂中浸泡22h，捞出种子，用无菌水清洗3次，沥干水分；
上述浸种剂配制方法为：35g猪肝粉与600mg山梨酸钾加入蒸馏水中搅拌溶解，再加入5g聚乙二醇，搅拌溶解，用蒸馏水定容至1000ml。
用水浇湿放在芽床上的双层脱脂棉纱布，将上述种子放于湿润纱布上，保持纱布湿润，1800lx光照强度下，28℃培养种子。
对照组1：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(1)用25℃沙藏种子25d代替4℃冰箱冷藏28d。
对照组2：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(2)用蒸馏水代替稀硝酸溶液。
对照组3：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(3)用空白代替超声波处理种子。
对照组4：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(4)浸种剂的配方为：25g猪肝粉，1g聚乙二醇，1000ml蒸馏水。
对照组5：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(4)浸种剂的配方为：25g猪肝粉，100mg山梨酸钾，1000ml蒸馏水。
对照组6：
其他步骤与实例1完全相同，但是步骤(4)浸种剂的配方为：1g聚乙二醇，100mg山梨酸钾，1000ml蒸馏水。
对照组7：
重楼种子催芽方法参照专利201810210740.6《一种滇重楼种子的催芽及育苗方法》。
上述实施例与对照组分别处理100粒重楼种子，3次重复，观察重楼种子萌发情况。
测试试验：
试验调查并统计实施例和对照组7重楼种子萌发率到80％所需时间，具体见表1。
表1
由表1可知，使用本发明方法，能有效打破重楼种子休眠，缩短种子萌发时间，80％的种子萌发所需时间缩短至45～52d。
测试试验：
试验调查实施例和对照组的种子萌发情况，15天后统计重楼萌发数量，计算萌发率，具体见表2。
表2
由上表可知，本发明方法，无论是在方法步骤上，还是在组分及浓度上，都相互联系，相互促进，不可分割，不可替代；使用本发明的方法，提高重楼种子萌发率，使萌发率高达80.0％～83.3％。
综上所述，使用本发明方法，能有效解除重楼种子休眠，促进其提早萌发，使萌发时间缩短为45～52d，同时种子萌发率高达80.0％～83.3％。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。