本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞保存液及其制备方法及应用。
背景技术：
：成体干细胞来源于成人组织，避免涉及伦理问题，同时也是一种能够进行自我更新和多向分化的细胞因而具有更广阔的研究和应用前景。脂肪间充质干细胞是存在于脂肪组织中的干细胞，具有多向分化的潜能。2001年，脂肪间充质干细胞首次从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中分离获得，只需要抽取少量脂肪间充质干细胞就能够在短时间内培植出大量的干细胞用来进行移植手术。临床上，细胞移植的供体与受体通常存在不同时、不同地性，很难保证即离即用，而充足的间充质干细胞数量是决定是否能达到临床疗效的重要因素之一。目前，培植的干细胞需要细胞冻存，细胞冻存是指即使细胞暂时脱离生长状态而将细胞长时间保存起来，并维持细胞原有生物学特性，以供需要之时复苏进行试验或治疗。可见，一种能够保证间充质干细胞稳定良好生物学特性的冻存方法尤为重要。目前实验室常规的脂肪间充质干细胞冻存方法是用含5％或10％dmso和人血清白蛋白的冻存液，以一定的冻存速率从室温降到-80℃后放入液氮中或液氮气相中。然而，这个方法是根据冻存造血干细胞和淋巴细胞的方法改进的，并不是冻存脂肪间充质干细胞的最佳方法。技术实现要素：有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种脂肪间充质干细胞保存液及其制备方法及应用，本发明的提供的保存液冻存的脂肪间充质干细胞复苏后细胞的活率及相应生物学特性均能得到较好的保护。本发明提供了一种脂肪间充质干细胞保存液，包括胎牛血清和dmso。优选的，所述dmso为5～30重量份，所述胎牛血清为50～90重量份。优选的，所述dmso为10～20重量份，所述胎牛血清为70～80重量份。优选的，所述脂肪间充质干细胞保存液还包括lonzadmem培养基。优选的，所述胎牛血清为50～80重量份，所述dmso为5～10重量份，所述lonzadmem培养基为20～40重量份。优选的，所述胎牛血清为60～70重量份。本发明还提供了一种脂肪间充质干细胞保存液的制备方法，包括：将dmso缓慢加入到胎牛血清中，得到脂肪间充质干细胞保存液。本发明还提供了一种脂肪间充质干细胞保存液的制备方法，包括：将dmso缓慢加入到胎牛血清和lonzadmem培养基的混合液中，得到脂肪间充质干细胞保存液。本发明还提供了一种本发明所述的脂肪间充质干细胞保存液作为制备保存脂肪间充质干细胞的保存液的应用。与现有技术相比，本发明提供了一种脂肪间充质干细胞保存液及其制备方法和应用，本发明提供的脂肪间充质干细胞保存液，包括胎牛血清和dmso，实验结果表明，本发明提供的保存液作为脂肪间充质干细胞保存液与现有的保存液相比，其脂肪间充质干细胞冻存复苏培养后，细胞活率以及相应的生物学特性均得到了较好的保护。具体实施方式本发明提供了一种脂肪间充质干细胞保存液，包括胎牛血清和dmso。其中，所述dmso优选为5～30重量份，更优选为10～20重量份；所述胎牛血清优选为50～90重量份，更优选为70～80重量份。本发明中，本发明所述的脂肪间充质干细胞保存液优选还包括lonzadmem培养基，当本发明所述的脂肪间充质干细胞保存液包括胎牛血清、dmso和lonzadmem培养基时，所述各组分含量优选为：所述胎牛血清为50～80重量份，所述dmso为5～10重量份，所述lonzadmem培养基为20～40重量份；更优选为所述胎牛血清为60～70重量份；最优选为胎牛血清为70重量份、dmso为10重量份和lonzadmem培养基为20重量份。本发明还提供了一种脂肪间充质干细胞保存液的制备方法，包括：将dmso缓慢加入到胎牛血清中，得到脂肪间充质干细胞保存液。本发明对混合的方式没有特殊要求，本领域技术人员可以根据公知常识选择合适的混合方法。优选的，本发明还将dmso缓慢加入到胎牛血清和lonzadmem培养基的混合液中，得到脂肪间充质干细胞保存液。本发明还提供了一种本发明所述的脂肪间充质干细胞保存液作为制备保存脂肪间充质干细胞的保存液的应用。本发明提供了一种脂肪间充质干细胞保存液及其制备方法和应用，本发明提供的脂肪间充质干细胞保存液，包括胎牛血清和dmso，本发明提供的保存液作为脂肪间充质脂肪间充质干细胞保存液与现有的保存液相比，其脂肪间充质干细胞冻存复苏培养后，细胞活率以及相应的生物学特性均得到了较好的保护。下面将结合本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1各类冻存液均为无菌级产品，现配现用，大组分成分先加，dmso缓慢加入，避免局部过热，4℃保存备用。具体配方如表1～表3：表1、配方一dmso人血清白蛋白dmem/f1210wt％10wt％80wt％表2、配方二dmsofbs(胎牛血清)20wt％80wt％表3、配方三dmsolonzadmem培养基fbs10wt％20wt％70wt％将脂肪间充质干细胞添加到配置好的冻存液后，按1℃/min，降温至-80℃，再移至液氮-196℃保存。然后将冻存的脂肪间充质干细胞复苏培养，具体复苏培养步骤如下：1)用移液管吸取10倍于冻存液体积的完全培养基溶液加入到50ml离心管中，迅速将细胞悬液转移到50ml离心管中，轻轻吹打混匀，500g离心5min。2)用完全培养基重悬细胞沉淀，调整细胞接种密度为(5-8)x104cell/ml，添加1μg/mlegf至终浓度为10ng/ml，充分混匀后接种。3)用移液管接种10ml的细胞悬液至10cm培养皿中，转移至5％co2、37℃、饱和湿度为95％的二氧化碳培养箱中培养。培养结果见表4表4从表中可以看出，相对于传统的配方一，配方二和配方三的冻存液冻存的脂肪间充质干细胞在冻存复苏培养后，细胞活率及相应生物学特性均得到较好的保护。实施例2按照表5的配方配置冻存液，并将脂肪间充质干细胞添加到配置好的冻存液后，按1℃/min，降温至-80℃，再移至液氮-196℃保存。然后将冻存的脂肪间充质干细胞复苏培养，复苏培养的具体步骤如下：1)用移液管吸取10倍于冻存液体积的完全培养基溶液加入到50ml离心管中，迅速将细胞悬液转移到50ml离心管中，轻轻吹打混匀，500g离心5min。2)用完全培养基重悬细胞沉淀，调整细胞接种密度为(5-8)x104cell/ml，添加1μg/mlegf至终浓度为10ng/ml，充分混匀后接种。3)用移液管接种10ml的细胞悬液至10cm培养皿中，转移至5％co2、37℃、饱和湿度为95％的二氧化碳培养箱中培养。培养结果见表5，表5为组分相同、组分含量不同的冻存液冻存脂肪间充质干细胞后复苏培养的结果。表5从表5可以看出，胎牛血清含量的不同对冻存液冻存效果有很大的影响，当fbs的含量大于50％时，得到的冻存液冻存的脂肪间充质干细胞在冻存复苏培养后，细胞活率及相应生物学特性均得到较好的保护。以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。当前第1页12