一种赤芝的标准化栽培方法与流程

本发明涉及食用菌栽培领域，具体涉及一种赤芝的标准化栽培方法。

背景技术：

灵芝在中国已有2000多年的药用历史，是中华医药学宝库中的珍品。国内外诸多研究表明，灵芝的药理活性归因于其含有的多糖、三萜类、腺苷类、生物碱、甾醇和氨基酸等。现代科学研究表明，灵芝具有显著的抗癌、增强免疫力和保肝护肝等药理作用。

随着全球一体化的快速发展，对灵芝生产的要求日趋严格，灵芝产业不仅要规模化，同时必须做到生产的标准化。但是，我国灵芝生产以农户栽培为主体，规模化、标准化种植较少，并且，由于科研开发资金短缺，有关灵芝产业技术和基础研究几乎处于空白。由于缺乏标准的指导和约束，灵芝的产量和质量非常不稳定，严重影响了灵芝栽培的经济效益。

我国灵芝产业急需加强灵芝高产栽培技术研究，积极构建灵芝优质高产管理技术体系，提升灵芝产业标准化、国际化水平，满足国内和国际市场的需求，促进灵芝产业的可持续发展。

技术实现要素：

本发明的目的是建立一种赤芝优质高产栽培精准管理技术体系，选择优良菌种，明确赤芝三级菌种培育过程中各级菌种科学的培养时间，确定出芝期间适宜的光照强度、水分、温度、co2等技术参数，使灵芝栽培科学规范，有效提高灵芝栽培的产量和质量，提高其经济效益和社会效益。

第一方面，本发明要求保护一种赤芝的栽培方法。

本发明所提供的赤芝的栽培方法，可包括如下步骤：

(a)菌种制备，可按照如下进行：

(a1)母种制备：将待栽培赤芝的菌种接种于培养基，在22～25℃(如25℃)条件下培养至菌丝长满斜面，得到母种。

(a2)原种制备：将所述母种接种于装有培养料的菌袋，避光培养，前5～7天控制培养温度为25～26℃(促进菌丝快速封面)，之后控制培养温度为22～24℃，培养至菌丝长满菌袋，得到原种。

(a3)栽培种制备：将所述原种接种于装有栽培料的菌包，避光培养，前5～7天控制培养温度为25～26℃(促进菌丝快速封面)，之后控制培养温度为22～24℃，培养至菌丝长满菌包，得到栽培种。

(b)出芝管理，可按照如下进行：

(b1)菌包开口：将步骤(a3)所得装有栽培种的菌包移至大棚，5～7天(适应外界环境)后在菌包侧面或顶部开口。

进一步地，可以在菌包侧面开一个直径为1cm左右的圆口，或者去掉扎口密封盖，以促进菌蕾形成和发育。

(b2)控制栽培条件：

b1)湿度：菌包开口后放置5～7天，期间禁止喷水(等待菌丝愈合)；菌蕾期控制空气湿度80％～85％，开片期控制空气湿度85％～95％，采收前3～5d停止供水。

进一步地，本发明中是通过微喷系统控制所述空气湿度的。

b2)光照：散射光，光强500～1800lux。

进一步地，夏天光照强烈，通过覆盖遮阳网避免强光照。

b3)温度：20～29℃。

b4)co2：保持空气中co2浓度低于0.1％。

进一步地，在上午8～10时以前，下午4时以后可开门通风换气，气温低时中午11时至下午2时可通风换气。

(b3)采收孢子粉和/或子实体。

进一步地，当菌盖边缘白色消失，边缘变红，菌盖开始木质化时采收孢子粉和/或子实体。孢子粉通过7天套袋的方式进行收集。孢子粉和子实体一定要晒干或烘干，孢子粉用60目的筛子过筛后包装好，干燥、阴凉的地方保存。

在所述(a1)中，所述培养基可为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法如下：马铃薯200g(制成浸出液：洗净去皮切成小块，加水煮沸20～30min(能被戳破即可)，用纱布过滤，取滤液)，再加入葡萄糖20g，琼脂15～20g，磷酸二氢钾3g，稍冷后补足水分至1000ml。

在所述(a2)中，所述培养料可按照包括如下步骤的方法制备得到：将木屑、麦麸、糖、生石灰和石膏按照75～80：18～23：1：0.3～0.7：0.3～0.7的干物料质量比例混合后加水，至含水量为58～60％，得到所述培养料。其中，加水后还包括闷堆2h的步骤。

在本发明的一个实施例中，所述培养料中，木屑、麦麸、糖、生石灰和石膏的干物料质量比具体为78：20：1：0.7：0.3。在本发明的另一个实施例中，所述木屑、麦麸、糖、生石灰和石膏的干物料质量比具体为78：20：1：0.5：0.5。

进一步地，所述木屑可为柳树木屑、油松木屑、果树木屑和/或落叶松木屑；所述糖可为蔗糖。

将所述栽培料装入聚丙烯塑料袋中，经压力0.1～0.11mpa、温度126℃，灭菌时间1.5～2h，待温度降至30℃以下时，在无菌条件下接入所述母种。

在所述(a3)中，所述栽培料可按照包括如下步骤的方法制备得到：将木屑、麦麸、豆粕、玉米粉、生石灰和石膏按照78～82：12～16：2～3：1：0.5～1：0.5～1的比例混合后加水，至含水量为60～65％，得到所述培养料。其中，加水后还包括闷堆2h的步骤。

在本发明的具体实施例中，所述栽培料中，木屑、麦麸、豆粕、玉米粉、生石灰和石膏的干物料质量比具体为78：16：3：1：1：1。

进一步地，所述木屑可为柳树木屑、油松木屑、果树木屑和/或落叶松木屑。

将所述栽培料装入聚丙烯塑料袋中，经压力0.1～0.11mpa、温度126℃灭菌时间2h，待冷却后接入所述原种。

在所述(a1)中，进行所述培养的时间可为15～25天(如15天)。

在所述(a2)中，将所述培养温度控制在22℃～24℃条件下时可共培养35～45天。

在所述(a3)中，将所述培养温度控制在22℃～24℃条件下时可共培养55～65天。

在所述b2)中，所述光强最好为450～950lux。

在所述b3)中，所述温度最好为25～28℃。

步骤(b)中，在所述(b3)后还包括去除芝口硬质化菌柄，再停止供水5-7d的步骤。待菌丝愈合后恢复供水，经40d左右又可采收第2潮，一般可采收3～4潮。

步骤(a)中，所述待栽培赤芝应该为菌丝生长迅速、抗逆性强、生物学效率高的优良菌株。

在本发明中，所述待栽培赤芝具体为赤芝(ganodermalucidum)8907菌种。赤芝(ganodermalucidum)8907菌种为中国林业科学研究院中国林业微生物保藏管理中心产品，保藏编号为cfcc8907。

第二方面，本发明要求保护一种赤芝的菌种制备方法。

本发明所要求保护的赤芝的菌种制备方法包括前文中的步骤(a)。

第三方面，本发明要求保护一种赤芝的出芝管理方法。

本发明所要求保护的赤芝的出芝管理方法包括前文中的步骤(b)。

第四方面，本发明要求保护一种成套产品。

本发明所要求保护的成套产品由前文中所述培养基、所述培养料和所述栽培料组成。

第五方面，本发明还要求保护如下任一应用：

(i)前文第二方面和第三方面中所述方法在赤芝栽培中的应用；

(ii)前文第四方面所述成套产品在赤芝栽培中的应用；

(iii)前文第四方面所述成套产品在赤芝菌种制备中的应用。

本发明所提供的赤芝高产栽培精准管理方法，年内每批栽培种可以连续收获3～4潮芝，生物转化率达到9.5％，赤芝子实体多糖含量1.8％～2.0％，总三萜含量1.6％，具有潜在的药用价值。另外，本发明充分利用木屑等林业废弃物，可以获得高产优质的赤芝孢子粉。

本发明所提供的赤芝栽培方法为赤芝的栽培方法，本发明选择优良菌种，明确赤芝三级菌种培育过程中各级菌种合理的培养时间，有效预防菌丝退化、活性低等难题，确保了栽培种菌丝洁白、活力强，年内可以连续收获3～4潮芝。本发明通过科学实验验证，明确了赤芝出芝期间科学的光照、温度、湿度、co2等技术参数，使灵芝栽培科学规范，为赤芝工厂化生产提供科学的技术参数，提高其经济效益和社会效益。

附图说明

图1为赤芝侧面开口生长状况。(a)为赤芝栽培空间布置图；(b)为侧面开口时菌蕾生长状况；(c)为侧面开口时子实体成熟期生长状况。

图2为赤芝顶部开口生长状况。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

赤芝(ganodermalucidum)8907菌种：为中国林业科学研究院中国林业微生物保藏管理中心产品，保藏编号为cfcc8907。

实施例1、赤芝标准化栽培

一、菌种制备

1、母种制备

母种活化采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，配方为马铃薯200g(制成浸出液：洗净去皮切成小块，加水煮沸20～30min，过滤，取滤液)，再加入葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾3g，再加蒸馏水至1000ml。按常规方法制试管斜面，灭菌后在无菌条件下将纯化的菌种转接至试管斜面培养基中央，置于25℃条件下培养15d，待白色菌丝长满斜面后备用。

2、原种制备

(1)配方：柳树木屑、油松木屑、麦麸、蔗糖、生石灰、石膏按62︰16︰20︰1︰0.7︰0.3干物料质量比例称取。

(2)制作方法：首先将生石灰和石膏用15倍水稀释，木屑和麦麸干拌均匀，然后将生石灰水和石膏水均匀撒施到料堆里，再按照培养料︰水＝1︰1.3～1.4的比例加水拌匀，含水量58％，闷堆约2h。

(3)装袋：搅拌好的培养料送至装袋机料斗，由装袋机装料，装入聚丙烯塑料袋中(规格为24cm×17cm)，再自动套上套环和透气盖。

(4)灭菌和接种：采用高压灭菌，压力0.1～0.11mpa、温度126℃、灭菌时间2h。灭菌后的菌包立即运到冷却缓冲室，待温度降至30℃以下时，运至接种间，在无菌条件下接入母种，移置培养室避光培养。

(5)发菌管理：菌袋上架前冲洗培养室，每立方米空间用福尔马林10ml和高锰酸钾5g进行熏蒸消毒，24h后将菌袋移入培养室，菌袋与菌袋间距2～3cm。发菌期间采用分段变温控制法，前期5～7d温度为25℃～26℃，后期控制温度在22℃～24℃，每周定期检查菌丝生长状况，若发现长霉菌，及时清除，35d菌丝满袋后备用。

3、栽培种制备

(1)原料准备

柳树木屑、油松木屑、麦麸、豆粕、玉米粉、生石灰、石膏按62︰16︰16︰3︰1︰1︰1干物料质量比例称取。首先麦麸、豆粕和玉米粉干拌均匀，再与柳树木屑、油松木屑干拌均匀，然后将生石灰和石膏加20倍水稀释，再均匀撒施到上述料堆里，再按照培养料︰水＝1︰1.3～1.4的比例加水拌匀，含水量60％，以手握不滴水为准，闷堆约2h。

(2)装袋、灭菌和接种

采用自动装袋机装料，装入丙烯塑料袋(规格为34cm×17cm)，再自动套上套环和透气盖。接着高压灭菌，压力0.1～0.11mpa、温度126℃、灭菌时间2h。灭菌后的菌包立即运到冷却缓冲室，待温度降至30℃以下时，运至接种间，在无菌条件下接入原种，移置培养室避光培养。

(3)发菌管理

菌袋上架前冲洗培养室，每立方米空间用福尔马林10ml和高锰酸钾5g进行熏蒸消毒，24h后将菌袋移入培养室，菌袋与菌袋间距2～3cm。发菌期间采用分段变温控制法，前期5～7d温度为25℃～26℃，后期控制温度在22℃～24℃，每周定期检查菌丝生长状况，若发现长霉菌，及时清除，60d菌丝满袋备用。

二、出芝管理及采收

1、菌包开口

菌丝长满袋并经低温催蕾后，就可移至大棚内，放置5d，待菌包适应外界环境后，在菌包侧面开一个直径为1cm左右的圆口，菌包开口后放置5d，这期间禁止喷水，待菌丝愈合，再进行出芝管理。赤芝侧面开口生长状况见图1。

2、温湿度和光照控制

通过微喷系统自动供水，菌蕾期空气湿度80％～85％，开片期空气湿度85％～95％。出芝时保持温度25～29℃，并提供散射光和充足的氧气，子实体分化发育适宜光照强度500～1800lux，最适光照强度为450～950lux，夏天光照强烈，通过覆盖遮阳网避免强光照。在上午8～10时以前，下午4时以后开门通风换气，气温低时中午11时至下午2时通风换气，控制co2浓度低于0.1％。

3、上架弹粉及采收

当菌盖边缘白色消失，边缘变红，菌盖开始木质化时，用湿布将菌袋抹干净，上架或放入纸箱内，可叠多层，菌盖不能相互接触或碰到别的物体，用白纸将菌袋封严，7d后揭开白纸，收集孢子粉，采子实体。孢子粉和子实体一定要晒干或烘干，孢子粉用60目的筛子过筛后包装好，干燥、阴凉的地方保存。

4、采后管理

每潮灵芝收获后，用锋利刀具挖去出芝口硬质化的菌柄，再停止供水5～7d，待菌丝愈合后恢复供水，经40d左右又可采收第2潮、3、4潮。

三、出芝情况

经测定，第1潮、第2潮、第3潮、第4潮赤芝单个子实体的平均重量为8.75g、7.01g、5.42g和3.41g，子实体多糖含量(测定方法按照ny/t1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》)分别为1.75％、1.61％、1.52％和1.35％。具体见表1。

表1赤芝子实体重量和多糖含量

实施例2、赤芝标准化栽培

一、菌种制备

1、母种制备

母种活化采用常规方法，即取1cm²左右大小的菌丝块接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(配方见实施例1)，置于人工气候箱(温度25℃，湿度80％)培养15d，待菌丝长满斜面试管后备用。

2、原种制备

果树木屑、落叶松木屑、麦麸、蔗糖、生石灰、石膏按63︰15︰20︰1︰0.5︰0.5干物料质量比例称取，先干拌，再湿拌，原辅料均匀，含水量60％，以用力握时指缝间有水但不滴出为宜。选用规格17×24×0.05cm聚丙烯专用袋，人工装袋，装料要求松散适度，用塑料颈圈加透气盖封口。采用高压灭菌，压力0.1～0.11mpa、温度126℃、灭菌时间2h，冷却后备用。

取活化好的菌丝块1cm²～1.5cm²，接种于灭菌后的原种培养基，移入已灭菌的培养室，前期5～7d温度为25℃～26℃，后期控制温度在22℃～24℃，每天通风1次，经40d左右，菌丝可长满菌包。

3、栽培种制备

果树木屑、落叶松木屑、麦麸、豆粕、玉米粉、生石灰、石膏按62︰16︰16︰3︰1︰1︰1干物料质量比例称取，混拌均匀，含水量65％。选用规格为17×35厘米的聚丙烯专用袋，每袋装干料约450克。采用高压灭菌2小时。然后接入原种，每袋原种可接栽培种15～18袋。将已接种的菌袋移入消毒好的培养室内，分层排放，菌袋与菌袋间距2～3cm。发菌期间采用分段变温控制法，前期5～7d温度为25℃～26℃，后期控制温度在22℃～24℃，每周定期检查菌丝生长状况，若发现长霉菌，及时清除，62d菌丝满袋后备用。

二、出芝管理及采收

在温室大棚内设架层，将栽培种菌包排于架层上，放置5d后，打开顶部密封盖(赤芝顶部开口生长状况见图2)，然后再放置5d，待菌丝愈合。赤芝场所最适温度25～28℃，菌蕾期空气湿度80％～85％，开片期空气湿度85％～95％并提供散射光和充足的氧气。每天在上午8～10时以前，下午4时以后开门通风换气，气温低时中午11时至下午2时通风换气，空气co2浓度不允许超过0.1％，否则会抑制菌盖的生长。

当菌盖边缘白色消失，边缘变红，菌盖开始木质化时，用湿布将菌袋抹干净，上架或放入纸箱内，可叠多层，菌盖不能相互接触或碰到别的东西，用白纸将菌袋封严，经7d套袋搜集孢子粉。

每潮灵芝孢子粉和子实体收获后，用锋利刀具挖去出芝口硬质化的菌柄，再停止供水5-7d，待菌丝愈合后恢复供水，经40d左右又可采收第2潮，可采收3～4潮。采收后的孢子粉和子实体及时低温烘干，放置干燥处保存。

三、出芝情况

生物转化率(每袋生产子实体干重与培养料干重之比)达到9.5％，第一潮子实体多糖含量为1.82％，第一潮子实体总三萜含量1.6％(多糖测定方法按照ny/t1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》；总三萜测定按照《中华人民共和国药典》2015版灵芝三萜及甾醇的测定方法)。