一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法与流程

本发明涉及一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法，属于家禽育种技术领域。

背景技术：

随着我国社会和经济的快速发展，人们对于生活品质要求越来越高，近十年来，我国在禽肉方面的消费量快速增长，而黄羽肉鸡是禽肉消费里面增长量最大的部分。黄羽黄胫鸡由于外观符合消费者对颜色的喜好和需求(长期以来人们把黄色作为吉祥的象征，就像皇帝穿着龙袍的黄色一样，特别是节日和办喜事都用黄色，而白色被认为不吉利)；同时黄羽鸡的肉质鲜美，风味浓郁，更是受到消费者的青睐，长期以来，两广及港澳地区做白切鸡都是选用黄羽黄胫的鸡。

广西地方鸡遗传资源丰富，目前主要以肉用为主，由于产蛋量偏低，生产成本高，遇到种苗市场低迷的时候种蛋作菜蛋出售亏损更大。目前国内也培育了较多高产的蛋鸡品种，但蛋和肉的品质风味远不如地方土鸡。同时近年来养禽业的市场波动幅度很大，种苗、肉鸡生产的淡旺季节区分十分明显。单一用途的品种难以应对市场的变化。矮小型鸡由于带有隐性伴性遗传矮小基因，体型矮小，可以节省饲料，提高单位面积饲养量。而现有的矮小型品种在群体均匀度、肉质风味和蛋品质等方面仍有不足。如果能将矮小基因导入肉质风味和蛋品质优良的某个地方品种中，培育出的矮小型品种，既保持了地方品种的肉质和蛋品质，还可以节约饲料成本，提高产蛋量，增加养殖效益。

鉴于此，有必要研发一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法，以解决现有技术的不足。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法。本发明利用现代遗传育种方法，以广西的地方品种——霞烟鸡为基础素材，导入dw基因，培育出既保持地方鸡体型外貌和肉质风味，又兼顾产蛋量和蛋品口感的蛋肉兼用型地方鸡品系——矮小型黄羽黄胫鸡，可以应对种苗、肉鸡生产市场波动带来的风险，为企业育种提供优质素材。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法，包括如下步骤：

步骤1：建立纯系育种基础群

以霞烟鸡为育种素材，建立纯系育种基础群；

步骤2：将dw基因导入霞烟鸡中

用黄羽矮小型公鸡配步骤1的霞烟母鸡，得到子一代矮小型母鸡，然后用子一代矮小型母鸡配黄羽矮小型公鸡，得到子二代矮小型鸡；

步骤3：黄羽黄胫矮小品系的建立

将步骤2得到的子二代矮小型鸡扩繁，从后代中选留矮小型、体重和胫长基本一致的母鸡；通过分子检测，剔除杂合子后，选留纯合dw基因的公鸡个体，建立黄羽黄胫矮小品系，并建立家系；

步骤4：产蛋性状的选育

步骤4.1：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋性能好的家系，再从中选留出产蛋数在平均产蛋数±10％范围内且蛋品质好的母鸡，选入核心群；

步骤4.2：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋数低于平均产蛋数10％的家系，为产蛋性能中等的家系，再从中选留产蛋数最多且蛋品质最好的母鸡，选入核心群；

步骤4.3：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋数低于平均产蛋数30％的家系，为产蛋较少的家系，再从中选留蛋品质比较好的个体，选入核心群；

步骤4.4：公鸡选择按照同胞成绩进行评定，只考虑家系性能，不计算个体成绩，从步骤4.1的产蛋性能好的家系中的产蛋数最多的母鸡的同胞中留公鸡，以及从步骤4.2的产蛋性能中等的家系中的产蛋数最多的母鸡同胞中留公鸡；

步骤5：将步骤4.4选留的公鸡和母鸡随机组建新家系，对新组建的家系进行系谱检查，避免全同胞和半同胞交配，然后通过系谱孵化继代，繁殖下一个世代，再按照步骤4的方法继续开展产蛋性状的选育，经过3-4个世代的选育，得到矮小型黄羽黄胫鸡。

本发明的原理解释：

本发明的步骤1中，选用的霞烟鸡，原名下烟鸡，又名肥种鸡。霞烟鸡是广西名优特产，原产于广西容县石寨镇下烟村，相传已有200多年历史。霞烟鸡是“三黄鸡”中的一个品种，除了具有黄脚、黄嘴、黄毛的特点之外，每个鸡脚底下有一个肉蹄。霞烟鸡属肉用型鸡种，体躯短圆，腹部丰满，胸宽、胸深与骨盆宽三者相近，外形呈方形。霞烟公鸡羽毛黄红色，颈羽颜色较胸背羽为深，主、副翼羽带黑斑或白斑，有些公霞烟鸡鞍羽和镰羽有极浅的横斑纹，尾羽不发达。性成熟的霞烟公鸡腹部皮肤多呈红色。性成熟的霞烟母鸡羽毛黄色，单冠，肉垂、耳叶均鲜红色，虹彩橘红色，喙基部深褐色，喙尖浅黄色，胫黄色或白色，皮肤黄色或白色。本发明以霞烟鸡为基础素材，利用霞烟鸡胸腿肌丰满、肉质风味好的特点，结合矮小型鸡生产的蛋重量小、蛋重量均匀及耗料低的优点，通过杂种优势达到蛋肉兼用的目的。

dw基因(dwarfgene，鸡性连锁矮小基因，简称矮小基因)是鸡已知的8种矮小型基因中的一种，是唯一对鸡本身健康无害，而对人类有利的隐性突变基因。此外，这种基因为一基因多效应或多功能，即既具有质量性状基因特性，又具有数量性状基因特性，有很高的经济适用性。因此dw基因被广泛用于肉鸡、蛋鸡育种中。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，步骤3中，所述分子检测是指提取鸡dna，进行dw基因的pcr扩增。

采用上述进一步的有益效果是：通过分子检测，筛选出杂合子鸡并淘汰，避免下一代因出现基因型的分离而产生性状分离的现象，可以加快淘汰矮小杂合子和不含有矮小基因的个体鸡。该方法不仅可以提高矮小鸡体重、胫长等方面的均匀度，节约饲料成本，同时可以提高商品苗和成年鸡群的整体质量，加快育种进展，省时省力，更有利于矮小鸡的生产推广。

pcr扩增产物用1％琼脂糖凝胶检测，每对引物随机抽取几个样品送生物公司测序鉴定。通过检测发现，能检测出片段大小约为250bp的dw基因的条带，称之为矮脚纯合子；将检测到预期的460bp的条带，称之为正常型鸡纯合子；将能同时扩增到250bp和460bp的个体，称之为杂合型。正常型纯合子和杂合型的鸡都淘汰，只留下矮脚纯合子。

更进一步，所述提取鸡dna的具体方法为：从鸡翅静脉采集100μl血样置于等体积的抗凝剂中，4℃保存，用dna提取试剂盒提取dna，分光光度计和电泳检测dna的浓度及纯度。

上述dna提取试剂盒可通过市售购得，如购自天根生化科技(北京)有限公司。

更进一步，所述dw基因的pcr扩增的程反应体系为：

反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min。

更进一步，所述特异引物p1的上游引物的核苷酸序列如seqidno.1所示，所述特异引物p1的下游引物的核苷酸序列如seqidno.2所示，所述特异引物p2的上游引物的核苷酸序列如seqidno.3所示，所述特异引物p2的下游引物的核苷酸序列如seqidno.4所示。

特异引物p1的上游引物：5’-tcccagactacacttctattca-3’(seqidno.1)。

特异引物p1的下游引物：5’-cggggacagatcaaagacaatac-3’(seqidno.2)。

特异引物p2的上游引物：5’-acctccaaagaaatctgtcgag-3’(seqidno.3)。

特异引物p2的下游引物：5’-tggccaaatcctgaagtcct-3’(seqidno.4)。

上述引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

进一步，步骤4中，所述产蛋数均为第21-40周龄的累计产蛋数。

进一步，步骤4中，所述蛋品质包括蛋重、蛋比重、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色中的一种或两种以上。

采用上述进一步的有益效果是：蛋品质直接影响蛋的营养成分、食用价值、进而影响蛋的市场售价，同时对鸡蛋的保存时间、种蛋孵化率、破损率等有一定的影响。蛋品质在很大程度上受遗传因素的影响，遗传力通常在0.5～0.7之间，其中蛋重、蛋壳强度等遗传力较高。通过测定蛋品质，可以反映出遗传特性。

蛋重不仅是评定蛋的等级、新鲜度等的重要指标，也是品种选育中的一项重要性状。蛋重的遗力一般在0.4-0.7。用粗天平或电子称测量。

蛋比重是区别蛋的新鲜程度的重要标准。若禽蛋存放时间越长，气孔越大，则蛋内水分蒸发越多，其比重越小。用盐水漂浮法进行测定。

蛋壳厚度受品种、气候、饲料等影响。蛋壳厚度与蛋壳强度呈正相关，良好的蛋壳厚度一般在0.33mm-0.35mm。蛋壳厚度与蛋的比重密切相关，蛋壳越厚，蛋的比重越大。蛋壳厚度的测量方法：分别取蛋的大头、小头、中间部分的蛋壳，用镊子剔除内壳膜，用蛋壳厚度测定仪分别测其厚度，再将三点的值平均。也可使用超声波蛋壳厚度测定仪直接读取厚度值。

蛋壳强度是指蛋壳耐压程度的大小。蛋壳强度可用蛋壳强度测定仪进行测定。蛋壳强度与蛋壳厚度及厚度的均匀性呈正相关。遗传力一般在0.3-0.4。

蛋白高度，采用蛋白高度测定仪进行测定。

蛋黄颜色是衡量蛋黄颜色深浅的指标。蛋黄色泽对蛋的商品价值和价格有很大影响。国际上通常用罗氏(roche)比色扇的15种不同黄色色调等级比色。

进一步，步骤5中，所述矮小型黄羽黄胫鸡的成年公鸡体重1.6±0.25kg，胫长6.0±0.4cm，胫围4.0±0.3cm；所述矮小型黄羽黄胫鸡的成年母鸡体重1.35±0.18kg，胫长5.5±0.4cm，胫围3.6±0.3cm。

采用上述更进一步的有益效果是：上述参数，保持了矮小型鸡的体型外貌。

本发明的有益效果：

(1)本发明利用现代遗传育种方法，以广西的地方品种——霞烟鸡为基础素材，导入dw基因，培育出既保持地方鸡体型外貌和肉质风味，又兼顾产蛋量和蛋品口感的蛋肉兼用型地方鸡品系——矮小型黄羽黄胫鸡，可以应对种苗、肉鸡生产市场波动带来的风险，为企业育种提供优质素材。

(2)本发明选育得到的矮小型黄羽黄胫鸡，比正常型同类品种省饲料30％，产蛋率提高5％-10％，降低成本，提高利润，具有广阔的市场前景。

附图说明

图1为本发明的矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法的流程图。

图2为采用特异性引物p1对12个样品进行pcr扩增的电泳图。图中，m代表marker，1～2为阴性对照，3为以水为模板的阴性对照，4～16为待检测样品。

图3为采用特异性引物p2对12个样品进行pcr扩增的电泳图。图中，m代表marker，1～13为待检测样品，14为以水为模板的阴性对照，15～16为阳性对照。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本实施例的矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法，包括如下步骤：

步骤1：建立霞烟鸡纯系基础群

从霞烟鸡产区——广西玉林市引进700只150日龄霞烟鸡母鸡，建立纯系基础群。

步骤2：将dw基因导入霞烟鸡中

从广西鸿光农牧有限公司引进40只300日龄黄羽黄胫矮脚公鸡，用此公鸡配步骤1的霞烟母鸡，得到子一代矮小型母鸡，繁殖3批共出雏4500只，18周龄选留1075只矮小母鸡上产蛋笼，然后用子一代矮小型母鸡再配黄羽矮小型公鸡，得到子二代矮小型鸡。

步骤3：黄羽黄胫矮小品系的建立

将步骤2得到的子二代矮小型鸡扩繁，从后代中选留矮小型、体重和胫长基本一致的母鸡1667只；通过分子检测，剔除杂合子后，选留纯合dw基因的公鸡个体，建立黄羽黄胫矮小品系，并建立家系。

所述分子检测是指提取鸡dna，进行dw基因的pcr扩增。所述提取鸡dna的具体方法为：从鸡翅静脉采集100μl血样置于等体积的抗凝剂中，4℃保存，用dna提取试剂盒提取dna，分光光度计和电泳检测dna的浓度及纯度。上述dna提取试剂盒可通过市售购得，如购自天根生化科技(北京)有限公司。

根据genbank和参考文献公布的鸡dw基因设计序列，利用oligo等生物软件设计2对特异引物，所述特异引物p1的上游引物的核苷酸序列如seqidno.1所示，所述特异引物p1的下游引物的核苷酸序列如seqidno.2所示，所述特异引物p2的上游引物的核苷酸序列如seqidno.3所示，所述特异引物p2的下游引物的核苷酸序列如seqidno.4所示。

特异引物p1的上游引物：5’-tcccagactacacttctattca-3’(seqidno.1)。

特异引物p1的下游引物：5’-cggggacagatcaaagacaatac-3’(seqidno.2)。

特异引物p2的上游引物：5’-acctccaaagaaatctgtcgag-3’(seqidno.3)。

特异引物p2的下游引物：5’-tggccaaatcctgaagtcct-3’(seqidno.4)。

上述引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

所述dw基因的pcr扩增的程反应体系为：

反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min。

pcr扩增产物用1％琼脂糖凝胶检测，每对引物随机抽取几个样品送生物公司测序鉴定。通过检测发现，能检测出片段大小约为250bp的dw基因的条带，称之为矮脚纯合子；将检测到预期的460bp的条带，称之为正常型鸡纯合子；将能同时扩增到250bp和460bp的个体，称之为杂合型。正常型纯合子和杂合型的鸡都淘汰，只留下矮脚纯合子。

采用p1特异性引物和p2特异性引物对12个样品进行pcr扩增，结果如图2、图3所示。

由图2可见，1～3号样品未检测到条带，而4～16号样品均能检测到dw基因的条带，片段大小约为250bp。

由图3可见，15号和16号样品是正常脚胫的鸡，可以检测到预期的460bp的条带，而以水为模板作为阴性对照的14号样品未检测到条带，其他被测样品除了12号能扩增到与正常脚胫大小的条带外均未扩增到条带。

步骤4：产蛋性状的选育

步骤4.1：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋性能好的家系，再从中选留出产蛋数在平均产蛋数±10％范围内且蛋品质好的母鸡，选入核心群；

步骤4.2：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋数低于平均产蛋数10％的家系，为产蛋性能中等的家系，再从中选留产蛋数最多且蛋品质最好的母鸡，选入核心群；

步骤4.3：在步骤3建立的家系中，选留出产蛋数低于平均产蛋数30％的家系，为产蛋较少的家系，再从中选留蛋品质比较好的个体，选入核心群；

步骤4.4：公鸡选择按照同胞成绩进行评定，只考虑家系性能，不计算个体成绩，从步骤4.1的产蛋性能好的家系中的产蛋数最多的母鸡的同胞中留公鸡，以及从步骤4.2的产蛋性能中等的家系中的产蛋数最多的母鸡同胞中留公鸡。

步骤5

将步骤4.4选留的公鸡和母鸡随机组建新家系，对新组建的家系进行系谱检查，避免全同胞和半同胞交配，然后通过系谱孵化继代，繁殖下一个世代，再按照步骤4的方法继续开展产蛋性状的选育，经过3-4个世代的选育，得到矮小型黄羽黄胫鸡。

结果：

d1系：2017年共繁殖3批后备鸡，出壳1637只。选留一世代核心群种鸡951只；2018年存栏一世代核心群458只，建立家系42个，共繁殖二世代后备鸡2297只。2017年6月采胸肌鲜样送广西分析测试专项测试，结果表明，氨基酸总量为20.74％，比对照组的广西麻鸡20.19％、霞烟鸡20.58％分别提高0.55％和0.16％；蛋品质测定结果:蛋重36.65g,比对照组的广西麻鸡38.1g、霞烟鸡45.75g分别低1.45g和9.1g；蛋黄比例分别为0.34、0.34、0.33、蛋白比例分别为0.66、0.66、0.59，浓蛋白高度分别为4,33、3,04、4,06。均差异不显著。

d2系：2018年已经进行到2世代的选育，总共上笼测定鸡数为1887只，共80个家系。

选种程序为：出雏时，按家系配戴翅号，选留体型外貌符合要求的个体，淘汰残次个体。公鸡在42日龄左右，选留鸡冠发育明显的个体。母鸡在56日龄左右，淘汰鸡冠未发育及面部黄色的个体。70日龄全群个体称重，主要选择生长发育的均匀度。选种前抽称群体10％个体体重，统计平均值；公鸡以平均值-5～10％作为留种范围。母鸡以平均值±8％作为留种范围。上笼前淘汰倒冠、不起冠，残次个体；通过手感来选择腿肌、胸肌的发育。同时进行鸡白痢检测，淘汰阳性及可疑个体。开产前全群称重并淘汰体重偏离平均值过大的个体。300日龄左右主要进行繁殖性能的选择。采用家系选择与个体选择相结合的方法，选择家系产蛋数在平均数以上，淘汰中选家系中产蛋数较低的个体。另外，在淘汰家系中选留产蛋数成绩特别优秀的个体。公鸡主要从产蛋数排名前35的家系中优秀产蛋个体的同胞中选留。将选留的公鸡和母鸡随机组建新家系。对新组建的家系进行系谱检查，避免全同胞和半同胞交配。各品系组建家系后继代，繁殖下一个世代。每个世代收集4批种蛋，每批留蛋时间为7天左右，通过系谱孵化，按母鸡号落盘，出苗戴翅号和各项系谱记录。

2世代共出雏留种母鸡2736只，出雏留种公鸡735只,10周龄抽称公鸡平均体重为998±78g，变异系数为7.2％；母鸡体重为882±65g，变异系数为7.4％。开产日龄为155天龄，开产体重为1391g，开产蛋重为32.8g，43周龄蛋重为42.9g，43周龄平均产蛋数120.3枚，公鸡43周龄体重2280g，母鸡43周龄体重1690g，66周龄平均产蛋数184，66周龄公鸡体重2673g，母鸡66周龄为1985g，种蛋平均受精率95.1％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110>广西壮族自治区畜牧研究所

<120>一种矮小型黄羽黄胫鸡的选育方法

<160>4

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>22

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

tcccagactacacttctattca22

<210>2

<211>23

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

cggggacagatcaaagacaatac23

<210>3

<211>22

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>3

acctccaaagaaatctgtcgag22

<210>4

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>4

tggccaaatcctgaagtcct20