昆虫病原线虫在防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹中的应用的制作方法

本发明属于鳞翅目夜蛾科害虫防治领域，具体涉及昆虫病原线虫在防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹中的应用。

背景技术：

斜纹夜蛾(spodopteralitura)是鳞翅目夜蛾科害虫，是一种多食性的世界性害虫，会对多种经济作物的生产造成危害(郝强等，2016)。斜纹夜蛾幼虫取食叶片，甚至取食花和果实，破坏性极强。斜纹夜蛾3龄及以上幼虫白天躲在地表下，晚上出来取食；老熟幼虫在地表下1-3cm处靠近植株基部化蛹(杜娟，2016)。由于农药的大量使用，斜纹夜蛾对有机磷、甲氨酸盐、除虫菊酯等多类化学农药产生了抗性(谢圣华等，2010)，因此有必要寻找替代化学农药的方法来防治斜纹夜蛾。昆虫病原斯氏属steinernema和异小杆属heterorhabditis线虫是多种害虫的生防制剂，对土栖性和钻蛀性害虫有特效，能主动搜寻及感染寄主昆虫并在72h内杀死害虫。

技术实现要素：

本发明的目的是为了克服现有技术中的缺陷，提供昆虫病原线虫在防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹中的应用。

本发明的第一个目的是提供昆虫病原线虫在防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹中的应用。

所述的昆虫病原线虫优选为小卷蛾斯氏线虫steinernemacarpocapsaemex、steinernemaakhursti64-2、小卷蛾斯氏线虫steinernemacarpocapsaeall、长尾斯氏线虫steinernemalongicaudumx-7或印度异小杆线虫heterorhabditisindicaln2。

所述的鳞翅目夜蛾科害虫蛹优选为斜纹夜蛾蛹，进一步优选为1-3日龄的斜纹夜蛾蛹。

所述的昆虫病原线虫的使用量为100ij/蛹。

本发明的第二个目的是提供昆虫病原线虫在制备防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹制剂中的应用。

所述的昆虫病原线虫为小卷蛾斯氏线虫steinernemacarpocapsaemex、steinernemaakhursti64-2、小卷蛾斯氏线虫steinernemacarpocapsaeall、长尾斯氏线虫steinernemalongicaudumx-7或印度异小杆线虫heterorhabditisindicaln2。

所述的鳞翅目夜蛾科害虫蛹优选为斜纹夜蛾蛹，进一步优选为1-3日龄的斜纹夜蛾蛹。

本发明筛选到对斜纹夜蛾幼虫高毒力的昆虫病原线虫品种和品系，并测定了对斜纹夜蛾蛹的毒力，通过实验发现，当线虫浓度增加到100ij/蛹时，小卷蛾斯氏线虫steinernemacarpocapsaemex处理的蛹校正死亡率最高达45.38％，因此可以将昆虫病原线虫应用于防治斜纹夜蛾蛹，为应用昆虫病原线虫田间防治斜纹夜蛾不同发育龄期提供依据。

附图说明：

图1为昆虫病原线虫处理后斜纹夜蛾蛹的校正死亡率(平均值+标准误％)。

图2为steinernemacarpocapsaemex线虫处理蛹后解剖可观察到线虫在蛹内繁殖。

图3为steinernemalongicaudumx-7线虫在蛹内繁殖后爬出蛹。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

(一)实验材料

1.昆虫病原线虫品系：不同品种和品系的昆虫病原线虫感染大蜡螟后，whitetrap收集线虫后，调整线虫浓度为1000ij/ml，15℃，100rpm储存备用。所用昆虫病原线虫品种及品系如下：

1)steinernemaakhursti64-2

2)steinernemacarpocapsaeall

3)steinernemacarpocapsaemex

4)steinernemalongicaudumx-7

5)heterorhabditisindicaln2

2.斜纹夜蛾幼虫

购买斜纹夜蛾幼虫及饲料(河南省济源白云实业有限公司)，27℃，80％rh，d：l＝12：12，培养至化蛹后，取1-3日龄的蛹用于实验。

3.实验方法

1)24孔板的每个孔内放入2张滤纸片，每孔加入150μl线虫悬液，使线虫终浓度分别为50ij/蛹和100ij/蛹。对照仅加入150μl灭菌水。每孔放入一头蛹，每个处理6个孔，4个重复(每个处理6孔×4个重复＝24蛹)。盖上盖子，封口膜封口，置于27℃，80％rh，黑暗培养箱孵育。

2)3d后取蛹，解剖镜下检查体表及体内是否有线虫；7d后取蛹，解剖镜下检查体表及体内是否有线虫；10d后检查蛹的死亡率，13d后检查羽化率。

4.数据处理与分析

不同批次测定的线虫处理蛹的死亡率以同批次对照蛹的死亡率进行校正，校正死亡率(％)＝(处理组死亡率-对照组死亡率)/(100-对照组死亡率)×100。计算校正死亡率的平均值和标准误。校正死亡率数据经反正弦开平方处理后以spss16.0软件进行t检验和one-wayanova分析，p<0.05时死亡率之间差异显著。

(二)实验结果

不同品种和品系昆虫病原线虫处理后斜纹夜蛾蛹的校正死亡率见图1。当线虫浓度为50ij/蛹，不同昆虫病原线虫处理后斜纹夜蛾蛹的校正死亡率之间没有显著性差异(f＝2.041,df＝4,35,p＝0.110)，蛹的校正死亡率均低于18％。当线虫浓度增加到100ij/蛹，蛹的校正死亡率提高，但是仅s.carpocapsaemex在100ij/蛹浓度下处理的蛹校正死亡率显著高于在50ij/蛹浓度下处理的蛹校正死亡率(t＝4.596,df＝7,p＝0.002)。100ij/蛹浓度下，不同昆虫病原线虫处理的蛹校正死亡率之间存在显著性差异(f＝2.941,df＝4,35,p＝0.034)，s.carpocapsaemex处理的蛹校正死亡率最高(45.38％)，s.longicaudumx-7处理的蛹校正死亡率最低(9.21％)。昆虫病原线虫处理斜纹夜蛾蛹7d后可以在蛹内观察到侵染的线虫(图2)，10d后可以观察到线虫在蛹内繁殖后爬出蛹(图3)。存活的蛹均能在化蛹的10-13d后羽化成成虫。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种昆虫病原线虫在防治鳞翅目夜蛾科害虫蛹中的应用。本发明筛选到对斜纹夜蛾幼虫高毒力的昆虫病原线虫品种和品系，并测定了对斜纹夜蛾蛹的毒力，通过实验发现，当线虫浓度增加到100IJ/蛹时，小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae Mex处理的蛹校正死亡率最高达45.38％，因此可以将昆虫病原线虫应用于防治斜纹夜蛾蛹，为应用昆虫病原线虫田间防治斜纹夜蛾不同发育龄期提供依据。

技术研发人员：颜珣;韩日畴
受保护的技术使用者：广东省生物资源应用研究所
技术研发日：2019.04.24
技术公布日：2019.07.19