一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂及其制备方法与流程

本发明涉及农药制剂技术领域，特别涉及一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂及其制备方法。

背景技术：

刺吸式口器害虫，例如蚜虫、叶螨、飞虱等。它们亲缘中的分类地位差别很大，但危害方式十分相似。它们以细长针管状口器刺吸植物体表(包括叶、花、果、皮)中的营养汁液，使细胞受到破坏，生长失去平衡，严重时植株停止生长，甚至全株萎蔫枯死。刺吸式口器害虫大多体型较小，但繁殖速度快，数量极多，群体危害期长，全年发生世代多。同时还是是病毒的携带者和中间传媒，可以导致作物感染病毒病，严重影响农业生产。

实践中，多使用化学药剂防治蚜虫、蓟马、螨类等害虫，比如吡虫啉、啶虫脒、烯啶虫胺、噻虫嗪等，有的易于产生抗性，有的农药残留时间长。农业生产中急需一种环境友好的防治刺吸式口器害虫的生物类药剂。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂及其制备方法，通过对多个土壤中分离得到的菌种进行生测试验，得到一株有生物活性的菌种。选择不同的能量等级的氮原子、硼原子冲击优选菌种的菌悬液，筛选得到一株高产放线菌菌种，发现其次生代谢产物对刺吸式口器害虫有较好的防治效果，对该菌种进行基因鉴定，确认菌种为劳意德链霉菌。微生物源生物农药通常含有多种组分，可能包含多种作用机理，不易产生抗性，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

收集土样，分离多个放线菌菌种，用高氏培养基发酵，所得发酵液进行生测试验，筛选得到一株放线菌菌种对刺吸式口器害虫防治效果。对该菌种进行物理诱变，选择不同的能量等级的氮原子、硼原子冲击优选菌种的菌悬液，筛选得到一株高产放线菌菌种，对刺吸式口器害虫的防效显著提高。经鉴定，确认菌种为劳意德链霉菌。

一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂，该劳意德链霉菌菌种由物理诱变方法得到。

本发明要解决的另一种技术方案为：一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂的制备方法，包括如下步骤：

s101：将劳意德链霉菌接种于种子罐，培养约24小时，得到种子液；

s102：将获得的种子液接种于发酵罐中，有氧发酵，获得含有生物活性物质的发酵液；

s103：将获得的发酵液进行后处理，获得原粉。

进一步地，原粉可以加入润湿剂、分散剂、填料制成可湿性粉剂：

原粉30-60％，yp5％，白炭黑5％，柠檬酸10％，高岭土20-50％。

进一步地，原粉可加入润湿剂、分散剂、粘合剂、填料制成水分散粒剂：

原粉30-60％，蓖麻油聚氧乙烯醚5％，十二烷基硫酸钠3％，玉米淀粉20％，硫酸铵12-42％。

进一步地，农药制剂可用于防治蚜虫、蓟马、白粉虱等刺吸式口器害虫。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提出的一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂及其制备方法，通过物理诱变得到一株高产菌种，其次生代谢产物对刺吸式口器害虫有较好的防治效果。微生物源生物农药通常含有多种组分，可能包含多种作用机理，不易产生抗性。

附图说明

图1为本发明的种子罐中的接种工艺流程图；

图2为本发明的发酵罐的取样工艺流程图；

图3为本发明的发酵罐中培养基孢子映像图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂，包括克氏瓶斜面培养基和摇瓶培养基，其中：

克氏瓶斜面培养基包括如下质量份数的配方：

玉米提取物1.04％，硫酸铵0.3％，可溶性淀粉1％，碳酸钙0.3％，氯化钠0.3％，琼脂1.8％；

发酵培养基包括如下质量份数的配方：

花生饼粉4.0％，葡萄糖2.0％，玉米淀粉1.5％，酵母粉0.3％，碳酸钙0.36％，氯化钠0.2％，磷酸氢二钾0.02％。

所述克氏瓶斜面培养基的ph为6.8-7.2，发酵培养基的ph为6.7-7.0。

所述摇瓶培养基使用的摇瓶装量为30ml，培养温度：28℃，周期：24h。

摇甁镜检：24h菌丝生长旺盛，交织成网，无杂菌即可。

传代方法：用棉签沾取摇甁中发酵液涂克氏瓶斜面。

为了更好的展现劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂的制备流程，本实施例现提出一种劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂的制备方法，包括中试工艺，中试工艺包括种子罐中的接种工艺和和发酵罐的取样工艺，其中：

如图1，种子罐中的接种工艺包括如下步骤：

s101：种子罐为1吨罐，培养基定容0.5吨，培养基配方如上摇瓶培养基配方，121℃灭菌30min；

s102：在无菌环境下，将约30ml无菌水倒入克氏瓶中，用无菌的棉签将菌体刮下来，充分震荡；

s103：接菌量1：50～100，一个克氏瓶制成菌悬液接50l～100l液体培养基；建议种子罐接种量为5个克氏瓶。

该工艺的工艺参数如下表1：

种子罐转发酵罐标准：菌丝生长旺盛，交织成网，无杂菌即可。

如图2，发酵罐的取样工艺包括如下步骤：

s201：发酵罐为5吨罐，培养基定容3吨，培养基配方如上摇瓶培养基配方，121℃灭菌30min；

s202：放罐标准，ph：6.0，菌丝断裂，产生大量的孢子，如图3；

s203：取样时间：每8h取样，检测项目ph、氨基氮、总糖、还原糖、菌浓，同时每小时记录ph、溶氧、搅拌、罐温、罐压。

该工艺的工艺参数如下表2：

喷粉：按发酵液的固含量，加0.3％碳酸钙，采用车间喷塔，不经浓缩直接喷粉。

原粉可按以下配方做成可湿性粉剂：

原粉40％，yp5％，白炭黑5％，柠檬酸10％，高岭土40％。

在实验室，结果表明农药制剂针对有害刺吸式昆虫有较高的生物活性。比如：蚜虫，红蜘蛛，红色果螨，烟蓟马，加利福尼亚甲虫，棉铃虫和亚布洛涅为的水果叶蜂。在实验室的条件下用农药制剂0.125-1％悬浮液处理野豌豆蚜，棉蚜，桃蚜，豌豆蚜，24小时后死亡率50-100％。对于农药制剂最敏感的是棉蚜，桃蚜。可以确定植食性昆虫的杀虫效果的实验室样品的剂量。

表3农药制剂的致死浓度(％)及概率分析计算

诱变得到的劳意德链霉菌，菌种的次生代谢产物有a和b两种组分，a组分是一种吸湿性棕色粉末，分子量为1207。该组分对蚜虫、蓟马等害虫有生物活性。与现有的文献已知的化合物比较，认为a组分是新的杀虫杀螨剂。b组分在uv光谱在221nm有明显的最大吸收波长，并在240-280nm中有的宽峰的。b组分在质谱上有667离子峰。该组分对刺吸式口器害虫有生物活性。根据红外光谱等结果和已知的数据比较，把b组分归为苏氨酸型肽聚糖，并认为它是新的化合物。

可湿性粉剂处理小麦蚜虫田间防效试验：

试验方法：采用喷雾法对小麦进行喷雾，试验药剂按每公顷用量750克，900克加水稀释，每个处理4个小区重复，小区植物均匀喷雾，小区随机排列，采用背负式电动压缩喷雾器，喷至叶面滴水为止。以清水处理为空白对照，施药后3天、7天调查。每小区五点取样，每点固定5株-10株有蚜株，调查定株上蚜虫头数。

虫口减退率和防治效果计算方法：

该农药制剂对小麦蚜虫的防治效果见表4：

表4劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂对小麦蚜虫的防治效果

通过本发明的劳意德链霉菌发酵得到的农药制剂，对环境中的蜂、鸟、鱼、蚕毒性低，残留低，但对蚜虫、蓟马等害虫防治效果很好。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。