本发明涉及一种低温物表消毒液及其制备方法和应用。本发明属于医药技术领域。
背景技术：
病毒是由蛋白质和核酸(即遗传物质dna或rna)组成的，病毒在0℃～4℃下容易“存活”(指的是它的遗传物质不易于被破坏)，而在低的温度(如-20℃)下更容易长久保持活性。一般来说，病毒开始来袭的季节正是寒冬腊月气温低的季节，例如新冠病毒也是在寒冷环境中易于传播。
在灭杀病毒时，低温环境对消毒效果会有明显的影响，一些常用的消毒剂、常用的消毒方法灭杀效果不佳。低温环境时，常规消毒剂的灭杀能力显著下降，特别是结冰后，灭杀效果更差。因此，在防病毒措施中，需要对冷链食品、物品等的表面进行消毒，目前，并没有一种用于冷链食品、物品等的表面灭杀效果好的消毒产品。
基于此，有必要提供一种低温物表消毒液及其制备方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低温物表消毒液及其制备方法和应用。本发明的低温物表消毒液能够在低温环境下显著灭杀流感病毒a、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短链芽孢杆菌、结核菌、致病性酵母菌、新冠病毒、分枝杆菌等常见病毒和细菌，可在低温环境下(如-30℃～10℃)对一般物体表面进行有效消毒，且消毒效果好。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种低温物表消毒液，包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.005wt％～0.015wt％；
稳定性二氧化氯0.015wt％～0.025wt％；
苯甲酸钠0.001wt％～0.05wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，所述异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1～1：2。
其中，优选的，所述的低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.005wt％～0.015wt％；
稳定性二氧化氯0.015wt％～0.025wt％；
苯甲酸钠0.001wt％～0.05wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，所述异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
其中，优选的，所述的低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.008wt％～0.012wt％；
稳定性二氧化氯0.02wt％～0.025wt％；
苯甲酸钠0.01wt％～0.03wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，所述异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
其中，优选的，所述的低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.01wt％；
稳定性二氧化氯0.02wt％；
苯甲酸钠0.02wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，所述异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
进一步的，本发明一实施例还提供了一种低温物表消毒液的制备方法。
所述的低温物表消毒液的制备方法，包括如下步骤：
1)按照所述的重量百分比分别取松萝酸、稳定性二氧化氯、苯甲酸钠、异二醇以及纯净水；
2)将异二醇加入纯净水中，得到异二醇水溶液；
3)将松萝酸、稳定性二氧化氯以及苯甲酸钠依次加入异二醇水溶液中，混合均匀，即得。
其中，优选的，所述的松萝酸通过如下步骤制备得到：将松萝熬煮后过滤提纯得到所述松萝酸。
更进一步的，本发明还提出了所述的低温物表消毒液在制备消毒药物中的应用。
其中，优选的，所述的消毒药物的剂型为水剂。不难理解，在其他实施例中，消毒药物的剂型还可以是其他类型，例如凝胶等。
其中，优选的，所述的消毒药物具有灭杀低温物体表面的细菌和病毒作用。
其中，优选的，所述的细菌和病毒包括流感病毒a、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短链芽孢杆菌、结核菌、致病性酵母菌、新冠病毒、分枝杆菌。
本发明中所述的低温一般指的是-30℃～10℃。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
1、本发明的低温物表消毒液可在低温环境下显著灭杀流感病毒a、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短链芽孢杆菌、结核菌、致病性酵母菌、新冠病毒、分枝杆菌等常见病毒和细菌。用于低温环境下(-30℃～10℃)一般物体表面的消毒。
2、本发明的低温物表消毒液对人体无毒无害，其可以在低温环境下如-30℃～10℃温度下对物体表面进行消毒，低温物表消毒液可直接喷洒使用，无需稀释，大约2分钟左右即可达到消毒效果。
3、本发明的低温物表消毒液在低温环境下时，消毒液组合物表面有轻度结冰，并不影响消毒液灭杀效果。
具体实施方式
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
以下各实施例中，异二醇购自广州市番禺力强化工厂，松萝酸购自陕西慧科植物开发有限公司，稳定性二氧化氯购自韶关蓝威消毒药业有限公司，苯甲酸钠购自天津市百世化工有限公司。
实施例1
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.005wt％；
稳定性二氧化氯0.015wt％；
苯甲酸钠0.001wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
实施例2
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.015wt％；
稳定性二氧化氯0.025wt％；
苯甲酸钠0.05wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
实施例3
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.005wt％；
稳定性二氧化氯0.015wt％；
苯甲酸钠0.001wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：2。
实施例4
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.008wt％；
稳定性二氧化氯0.02wt％；
苯甲酸钠0.01wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
实施例5
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.012wt％；
稳定性二氧化氯0.025wt％；
苯甲酸钠0.03wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
实施例6
本实施例提供了一种低温物表消毒液。
低温物表消毒液包括如下重量百分比的组成成分：
松萝酸0.01wt％；
稳定性二氧化氯0.02wt％；
苯甲酸钠0.02wt％；
余量为异二醇水溶液，其中，异二醇水溶液中的异二醇的质量与纯净水的质量比为1：1。
实施例7
本实施例提供了一种低温物表消毒液的制备方法。
低温物表消毒液的制备方法，包括如下步骤：
1)将松萝熬煮后过滤提纯得到松萝酸。
2)按照实施例6中的重量百分比分别取松萝酸、稳定性二氧化氯、苯甲酸钠、异二醇以及纯净水，具体地，松萝酸200mg、稳定性二氧化氯400mg、苯甲酸钠200mg，异二醇1l，纯净水1l。
3)将1l异二醇加入1l纯净水中，得到2l的异二醇水溶液。
4)将200mg松萝酸、400mg稳定性二氧化氯以及200mg苯甲酸钠依次加入异二醇水溶液中，混合均匀，即得。
对实施例7制备得到的低温物表消毒液进行检验。
检验依据：《消毒技术规范》(2002年版)2.2.1.2.6、2.2.1.4、2.1.2.9，(国卫办监督函[2020]1062号)，gb/t38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》5。
评价依据：《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》(国卫监督函[202010625)、《消毒技术规范》(2002年版)gb/t38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》。
一、检验项目：二氧化氯含量测定
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
2.仪器设备：氮吹仪(ec0601)
3.标准物质：硫代硫酸钠标准溶液(0.1008mol/l)。
4.试剂：十二水磷酸氢二钠(分析纯)、碘化钾(分析纯)、盐酸(分析纯)、淀粉指示剂(分析纯)和水(二级水)。
(二)方法
1.检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)2.2.1.2.6。
2.检测环境：温度为21.2℃，相对湿度为60％。
3.检测方法：在500ml的碘量瓶中加200ml蒸馏水、1ml磷酸盐缓冲液，吸取5ml样品加入碘量瓶中，再加入10ml碘化钾溶液，混匀，用硫代硫酸钠滴定液滴定至淡黄色，加1ml淀粉指示剂，继续滴至蓝色刚好消失为止，记录读数为a，在上述滴定出a值的溶液中再加入盐酸溶液2.5mol/l，并放置暗处5min，用硫代硫酸钠滴定至蓝色消失，记录读数为b。
在500ml碘量瓶中加200ml蒸馏水、1ml磷酸盐缓冲液，吸取5ml二氧化氯溶液或稀释液加于碘量瓶中，然后通入高纯氮气吹至黄绿色消失，再加入10ml碘化钾，用硫代硫酸钠滴定液滴定至淡黄色时，加1ml淀粉指示剂，继续滴至蓝色刚好消失为止，记录读数为c，在上述读数为c值的溶液中在加入2.5ml盐酸溶液，并放置暗处5min，用硫代硫酸钠滴定至蓝色消失，记录读数为d，计算读数b、d的均值。
(三)、结果
该样品的二氧化氯含量均值为201mg/l。
二、检验项目：ph值测定
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
2.仪器设备：酸度计(eb12-03)。
3.校准溶液：邻苯二甲酸氢钾ph＝4.00、混合磷酸盐缓冲液ph＝6.88。
4.广泛ph试纸(ph范围：1～14)(由中国上海三爱思试剂有限公司提供)。
(二)、方法
1.检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)2.2.1.4。
2.检测环境：温度为21.2℃，相对湿度为60％。
3.检测方法：用广泛ph试纸确定样品的ph范围后，开机稳定ph计，按ph计的使用说明清洗处理，用邻苯二甲酸氢钾ph＝4.00校正(定位)，然后用蒸馏水清洗ph计的电极，用滤纸擦干电极，用混合磷酸盐缓冲液(ph值为6.88)校正(定位)，清洗电极，擦干，测样品ph值，重复2次，第一次测试ph值为1.17，第二次测试ph值为1.17，取2次的均值，ph值为1.17。
4.检测浓度：原液。
(三)、结果
该样品原液的ph值均值为1.17。
三、检验项目：低温试验
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
2.仪器：可程式恒温恒湿试验箱(eb19-04)。
(二)、方法
1.检测依据：(国卫办监督函[2020]1062号)。
2.检测环境：温度为21.3℃，相对湿度为55％。
(三)、结果
该样品原液在-30℃温度条件下，放置时间10h，样品液体、无析出、无结晶。试验合格。
四、检验项目：金黄色葡萄球菌定量杀灭试验(含中和剂鉴定试验)
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
2.金黄色葡萄球菌atcc6538(由广东环凯微生物科技有限公司提供)的菌载体制备：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第5代)，先用稀释液(tps)洗下菌苔，用0.3％的牛血清白蛋白稀释液对倍稀释，用滴染法取20μl于灭菌布片(1.0cm×1.0cm)载体上，烘干。用于中和剂载体定量鉴定试验，使回收菌数达25×102cfu/片～15×103fu/片。用于载体浸泡定量杀菌试验，使回收菌数达1×106cfu/片～5×106cfu/片。
3.中和剂：0.3％硫代硫酸钠、1.0％吐温-80、0.1％卵磷脂的pbs。
4.实验试剂：tsa(编号：1090992)、有机干扰物(批号：20200326)、磷酸盐缓冲液(pbs)、稀释液(tps)、无菌蒸馏水或其他纯化水。
5.仪器：生物安全柜(ec18-01)；生化培养箱(eb29-01)；可程式恒温恒湿试验箱(eb19-04)。
(二)、方法
1.检验依据：gb/t38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》5。
2.检验环境：温度为20.6℃～21.6℃，相对湿度为52％～58％。
3.检验方法
3.1中和剂载体定量鉴定试验
试验在设定为-30℃的可程式恒温恒湿箱进行。将样品原液与其他待试液置于-30℃可程式恒温恒湿试验中预冷5min，再按4组进行中和剂鉴定试验。试验微生物为金黄色葡萄球菌，中和剂为0.3％硫代硫酸钠、1.0％吐温-80、0.1％卵磷脂的pbs，中和作用时间为10min。取样用胰蛋白胨大豆琼脂培养基(tsa)倾皿计数。试验重复3次。
3.2载体浸泡定量杀菌试验
先将消毒剂样品原液和染菌载体置-30℃可程式恒温恒湿试验箱30min后，吸取样品原液注入无菌平皿中，用无菌镊子取预先制备的菌片3片分别放入平皿中，并使之浸没于样品原液。置于-30℃可程式恒温恒湿试验箱待菌液与样品原液相互作用至各设定时间，用无菌镊子将菌片取出分别移入一含5.0ml中和剂试管中，混匀后中和10min，作适当稀释后，分别吸取1.0ml倾皿做活菌菌落计数。试验同时设阳性、阴性对照。试验重复3次。
(三)、结果
1.中和剂载体定量鉴定试验
经3次重复试验证明：第1、2、3组平均生长菌落数分别为6.60×102cfu/片、6.08×102cfu/片、7.33×102cfu/片，且组间误差率为6.60％，第4组无菌落生长。中和剂载体定量鉴定试验结果如表1所示。
表1中和剂载体定量鉴定试验结果
2.载体浸泡定量杀菌试验
在-30℃温度条件下，试验重复3次，样品原液作用1.5min、3.0min和4.5min对金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均>3.00。载体浸泡定量杀菌试验结果如表2所示。
表2载体浸泡定量杀菌试验结果
(四)、结论
经检测：该样品原液在-30℃温度条件下，中和剂含0.3％硫代硫酸钠、1.0％吐温-80、0.1％卵磷脂的pbs可中和残留的原液对金黄色葡萄球的杀灭作用，且中和剂产物对受试菌的生长和培养基均无不良影响；该样品原液作用1.5min对金黄色葡萄球菌的杀灭对数值＞3.00。
五、检验项目：大肠杆菌定量杀灭试验
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
2.大肠杆菌8099(由广东环凯微生物科技有限公司提供)的菌载体制备：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第5代)，先用稀释液(tps)洗下菌苔，用0.3％的牛血清白蛋白稀释液对倍稀释，用滴染法取20μl于灭菌布片(1.0cm×1.0cm)载体上，烘干。用于载体浸泡定量杀菌试验，使回收菌数达1×106cfu/片～5×106cfu/片。
3.中和剂：0.3％硫代硫酸钠、10％吐温-80、0.1％卵磷脂的pbs。
4.实验试剂：tsa(编号：1090992)、有机干扰物(批号：20200326)、磷酸盐缓冲液(pbs)、稀释液(tps)、无菌蒸馏水或其他纯化水。
5.仪器：生物安全柜(ec18-01)；生化培养箱(eb29-01)；可程式恒温恒湿试验箱(eb19-04)。
(二)、方法
1.检验依据：gb/t38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》5。
2.检验环境：温度为21.4℃～21.6℃，相对湿度为56％～58％。
3.检验方法：先将样品原液和染菌载体置于-30℃可程式恒温恒湿试验箱30min后，吸取样品原液注入无菌平皿中，用无菌镊子取预先制备的3片菌片分别放入无菌平皿中，并使之浸没于样品原液。置于-30℃可程式恒温恒湿试验箱，待菌液与样品原液相互作用至设定时间，用无菌镊子将菌片取出分别移入一含5.0ml中和剂试管中，混匀后中和10min，作适当稀释后，分别吸取1.0ml倾皿做活菌菌落计数。试验同时设阳性、阴性对照。试验重复3次。
(三)、结果
在-30℃温度条件下，样品原液作用1.5min、3min和4.5min对大肠杆菌的杀灭对数值均>3.00。样品原液对大肠杆菌的低温杀菌效果结果如表3所示。
表3样品原液对大肠杆菌的低温杀菌效果结果
六、检验项目：硬质物体表面消毒模拟现场试验
(一)、器材
1.样品：实施例7制备得到的低温物表消毒液。
金黄色葡萄球菌atcc6538(由广东环凯微生物科技有限公司提供)的菌载体制备：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第5代)，先用pbs洗下菌苔，再用tbs对倍稀释，使回收菌数达1.25×107cfu/样本～1.25×108fu/样本(相当于5×105cfu/cm2～5×106cfu/cm2。
3.中和剂：0.3％硫代硫酸钠、1.0％吐温-80、0.1％卵磷脂的pbs。
4.稀释液：含0.1％吐温-80的pbs。
5.灭菌的棉拭子。
6.实验试剂：tsa(编号：1090992)、有机干扰物(批号：20200326)、磷酸盐缓冲液(pbs)、稀释液(tps)、无菌蒸馏水或其他纯化水。
7.仪器：、生化培养箱(eb29-01)；可程式恒温恒湿试验箱(eb19-04)。
8.消毒对象：硬质纸盒(规格30cm×21.5cm×5cm)表面。
(二)、方法
1.检验依据：《消毒技术规范》(2002年版)2.1.2.9。
2.检验环境：温度为20.2℃～21.0℃，相对湿度为54％～59％。
3.检验方法：
3.1试验在设定温度为-30℃司程式恒温恒湿试验箱中进行，用无菌规格板在试验用硬质纸盒中间标出染菌区(5.0cm×5.0cm)。用无菌棉拭泊以菌悬液均匀涂抹被试表面的60个区块(各为25cm2，将其置-23℃±1℃冰箱30min后进行试验。30个区块作为阳性对照区，另30个区块为试验区。
3.2试验组：将硬质纸盒用样品原液进行喷洒消毒后立即放入-30℃可程式恒温恒湿试验箱，作用3min，将无菌棉拭于含10ml中和剂试管中浸湿，分别对30个试验区进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将无菌棉拭的采样端剪入原中和剂试管内，振打200次，作用i0min。适当稀释并吸取1.0ml，以tsa倾注法接种平皿进行培养。
3.3阳性对照组：将无菌棉拭子含10ml稀释液试管中沾湿，对30个对照区涂抹采样，每个区块横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂试管内，振打200次，作用10min。适当稀释并吸取1.0ml，以tsa倾注法接种平皿进行培养。
3.4阴性对照组：待试验组与阳性对照组试验结束后，将未用过的同批次中和剂、稀释液各1.0ml接种培养基进行培养。
(三)、结果
经30次硬质纸盒低温消毒模拟现场试验，在-30℃温度条件下，样品原液喷洒作用3min对硬质纸盒表面金黄色葡萄球菌的杀灭对数值最低值为5.04。硬质纸盒低温消毒模拟现场试验结果如表4所示。
表4硬质纸盒低温消毒模拟现场试验结果
综上六个检测项目，可以得到以下检验结论：
1.实施例7制备得到的低温物表消毒液的二氧化氯含量均值为201mg/l。
2.实施例7制备得到的低温物表消毒液的ph值均值为1.17。
3.实施例7制备得到的低温物表消毒液在-30℃温度条件下的低温试验合格，结果符合《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》(国卫监督函[202010625)的要求。
4.实施例7制备得到的低温物表消毒液原液在-30℃温度条件下，载体法作用1.5min对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭对数值各次均>3.00，杀菌效果符合gb/t38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》4.2.3和《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》(国卫办监督函[2020]10625)的要求。
5.实施例7制备得到的低温物表消毒液原液经30次硬质纸盒低温消毒模拟现场试验，在-30℃温度条件下，作用3min对硬质纸盒表面金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均>3.00，符合《消毒技术规范》(2002年版)2.1.2.9.4和《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》(国卫办监督函[2020]10625)的要求。
综上，本发明的低温物表消毒液可在低温环境下显著灭杀流感病毒a、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短链芽孢杆菌、结核菌、致病性酵母菌、新冠病毒、分枝杆菌等常见病毒和细菌。用于低温环境下(-30℃～10℃)一般物体表面的消毒。本发明的低温物表消毒液对人体无毒无害，其可以在低温环境下如-30℃～10℃温度下对物体表面进行消毒，低温物表消毒液可直接喷洒使用，无需稀释，大约2分钟左右即可达到消毒效果。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。