骆驼宁碱A衍生物在治疗植物病毒病菌病中的应用

骆驼宁碱a衍生物在治疗植物病毒病菌病中的应用
技术领域
1.本发明涉及骆驼宁碱a衍生物在治疗植物病毒和病菌病中的应用，属于农业防护技术领域。


背景技术：

2.骆驼宁碱a是从骆驼蒿中分离得到得一种生物碱。2003年，弗吉尼亚大学hecht课题组(j.am.chem.soc.2003，125，13628-13629.)发现骆驼宁碱a在体外对小鼠的肿瘤细胞p388细胞系表现出抑制作用，其ic
50
为1.8μg/ml。在2003年底，该课题组(bioorg.med.chem 2004，12，6287-6299.)证明了骆驼宁碱a能够稳定dna磷酸二酯骨架和拓扑异构酶i之间的“dna-topo i”共价二元复合物。由此证明了它和喜树碱的作用机制相似，能够抑制拓扑异构酶i的活性。而在2004年日本东河大学zhongze ma课题组(bioorg.med.chem.lett.2004，14，1193-1196.)等报道了骆驼宁碱a对人类拓扑异构酶ii也表现出明显的抑制活性。骆驼宁碱对特定的人类癌细胞具有生物学活性，目前为止还没有关于骆驼宁碱a防治植物病毒病菌病方面的报道，而骆驼宁碱a足以成为开发新药物的良好先导化合物。


技术实现要素：

3.本发明提供骆驼宁碱a衍生物i在防治植物病毒病菌病中的应用。本专利的骆驼宁碱a衍生物i具有很好的抗植物病毒和病菌活性。
4.本发明的骆驼宁碱a衍生物如通式i所示，具体为i-1～i-17。
[0005][0006]
相比于现有技术，本发明首次发现骆驼宁碱a衍生物i-1～i-17表现出很好的抗植物病毒和病菌病活性，能很好地抑制烟草花叶病毒(tmv)和黄瓜枯萎，花生褐斑，苹果轮纹，小麦纹枯，玉米小斑，西瓜炭疽，水稻恶苗，番茄早疫，小麦赤霉，水稻稻瘟，辣椒疫霉，油菜菌核，黄瓜灰霉，水稻纹枯14种植物病菌。
具体实施方式
[0007]
本发明的实施例中，骆驼宁碱a衍生物的i-1～i-4结构式按照下述参考文献制备：molecules 2012，17，11363-11378。i-5～i-6结构式按照下述参考文献制备：res.chem.inter.med.2016，42，1045-1055。i-7结构式按照下述参考文献制备：tetrahedron lett.2012，53，2643-2646。i-8～i-17结构式按照下述参考文献制备：org.lett.2016，18，824-827.
[0008]
实施例1：骆驼宁碱a衍生物i-1～i-17结构式的实验数据
[0009]
i-1：白色固体，熔点208-210℃。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.78(s，1h)，8.32-8.27(m，2h)，8.18(d，j＝8.1hz，1h)，7.98-7.89(m，3h)，7.78(t，j＝7.5hz，1h)，7.68-7.62(m，
1h)，5.33(s，2h).
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)δ160.2，153.6，152.0，149.5，148.8，135.0，132.3，131.5，133.0，130.2，129.0，128.8，128.5，127.7，126.4，48.0.
[0010]
i-2：浅红色固体，熔点272-274℃。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.66(s，1h)，8.30(d，j＝7.8hz，1h)，8.18(d，j＝8.7hz，1h)，7.96-7.93(m，3h)，7.78-7.74(m，1h)，7.67-7.61(m，1h)，5.31(s，2h)，2.58(s，3h).
[0011]
i-3：黄绿色固体，熔点280-282℃。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.55(s，1h)，8.29(d，j＝7.6hz，1h)，7.97-7.88(m，2h)，7.68-7.60(m，2h)，7.54(s，1h)，5.28(s，2h)，4.00(d，j＝10.1hz，6h).
[0012]
i-4：白色固体，熔点＞300℃。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.74(s，1h)，8.35(d，j＝2.2hz，1h)，8.31-8.28(m，2h)，7.97-7.90(m，3h)，7.68-7.62(m，1h)，5.33(s，2h).
[0013]
i-5：红棕色固体，熔点188-190℃，1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.23-8.18(m，1h)，8.15-8.10(m，1h)，8.02(d，j＝3.3hz，1h)，7.91-7.85(m，1h)，7.75(d，j＝8.0hz，1h)，7.53(t，j＝7.1hz，1h)，7.37-7.30(m，1h)，7.30-7.21(m，4h)，7.18(d，j＝6.8hz，2h)，6.93(d，j＝8.0hz，1h)，6.82(t，j＝7.5hz，1h).
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)δ159.7，147.7，147.3，145.1，139.4，135.0，133.7，128.6，128.2，127.2，126.9，126.7，126.2，125.7，119.9，118.8，115.9，115.5，62.5.
[0014]
i-6：黄色固体，熔点237-239℃，1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.25(d，j＝7.0hz，1h)，8.09(dd，j＝7.9，1.0hz，1h)，7.91-7.85(m，1h)，7.79(d，j＝8.0hz，1h)，7.77-7.70(m，2h)，7.54-7.47(m，1h)，7.38(d，j＝3.8hz，1h)，7.36-7.29(m，1h)，7.22(dd，j＝8.4，2.1hz，1h)，6.93-6.83(m，3h).
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)δ159.2，147.7，147.3，143.5，135.8，135.1，133.9，133.8，132.4，129.6，127.7，127.3，127.1，126.9，126.4，119.8，119.2，116.2，115.1，60.7.
[0015]
i-7：黄色固体，熔点200-202℃，1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.29(s，1h)，8.72(d，j＝7.9hz，1h)，8.32(d，j＝7.9hz，1h)，7.97(t，j＝7.6hz，1h)，7.90(t，j＝7.5hz，1h)，7.84(d，j＝7.9hz，2h)，7.73(t，j＝7.5hz，1h)，7.60(t，j＝7.5hz，1h).
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)δ158.7，147.1，144.5，142.9，138.1，135.9，133.8，128.9，127.7，127.3，127.0，126.5，125.4，121.2，118.7.
[0016]
i-8：黑色固体，熔点208-210℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.85(d，j＝7.2hz，1h)，8.42(d，j＝8.0hz，1h)，7.87-7.72(m，2h)，7.54-7.40(m，3h)，6.91-6.80(m，1h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ159.0，148.6，147.8，135.1，134.1，127.4，126.9，126.7，126.4，125.3，116.3，112.5.
[0017]
i-9：黄色固体，熔点164-166℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.89(d，j＝7.5hz，1h)，8.10(d，j＝8.6hz，1h)，7.90-7.80(m，1h)，7.69-7.61(m，1h)，7.54(s，2h)，6.97-6.86(m，1h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ160.9，158.4，158.4(d，j＝3.8hz)，147.1(d，j＝1.9hz)，145.4，133.9，129.5(d，j＝8.1hz)，126.4(d，j＝6.3hz)，124.5(d，j＝25.1hz)，117.0(d，j＝8.6hz)，112.9，111.2(d，j＝23.5hz).
[0018]
i-10：黄色固体，熔点122-124℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.81(d，j＝7.3hz，1h)，8.35(d，j＝2.1hz，1h)，7.76-7.65(m，2h)，7.54-7.41(m，2h)，6.90-6.79(m，1h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ157.1，146.8，146.1，134.6，133.4，127.7，125.7，125.4，125.3，116.0，
112.0.
[0019]
i-11：黄色固体，熔点135-137℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.88(d，j＝7.4hz，1h)，8.25(s，1h)，7.75-7.65(m，2h)，7.55-7.45(m，2h)，6.85(s，1h)，2.54(s，3h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ158.9，147.1，146.7，136.9，135.4，133.6，126.7，126.7，126.3，126.2，116.1，112.3.21.4.
[0020]
i-12：黄色固体，熔点158-160℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.85(d，j＝7.4hz，1h)，7.77-7.69(m，2h)，7.51-7.40(m，3h)，6.87-6.80(m，1h)，3.94(s，3h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ158.7，157.4，146.1，143.7，132.8，128.7，126.8，126.4，116.9，112.6，105.1，55.9.
[0021]
i-13：黄色固体，熔点155-157℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ9.20(s，1h)，8.45(d，j＝8.1hz，1h)，7.89(t，j＝7.7hz，1h)，7.80(d，j＝8.3hz，1h)，7.58-7.46(m，3h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ157.5，147.1，145.6，134.7，127.9，126.7，126.5，126.3，125.6(q，j＝5.8hz)，125.3，121.7(q，j＝342.5hz)，115.6，115.5.
[0022]
i-14：黄色固体，熔点162-164℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.99(d，j＝1.8hz，1h)，8.44(dd，j＝8.2，1.1hz，1h)，7.88-7.82(m，1h)，7.77(d，j＝8.3hz，1h)，7.54-7.46(m，2h)，7.38(d，j＝9.6hz，1h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ158.0，148.2，145.9，137.5，135.3，127.5，127.4，127.2，126.6，126.0，116.3，107.7.
[0023]
i-15：黄色固体，熔点148-150℃，1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.63(s，1h)，8.31(d，j＝8.1hz，1h)，7.89(t，j＝7.7hz，1h)，7.74(d，j＝8.3hz，1h)，7.62(d，j＝9.3hz，1h)，7.54-7.46(m，2h)，2.34(s，3h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ163.1，153.3，151.7，143.3，139.9，131.8，130.5，130.0，128.2，127.8，125.7，120.8，22.9.
[0024]
i-16：黄色固体，熔点142-144℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.39(d，j＝8.2hz，1h)，7.95(d，j＝5.0hz，1h)，7.81(t，j＝7.1hz，1h)，7.69(d，j＝8.3hz，1h)，7.47(t，j＝7.6hz，1h)，6.85(d，j＝5.1hz，1h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ158.7，158.1，148.4，135.0，127.1，126.2，125.4，121.2，116.5，109.5.
[0025]
i-17：白色固体，熔点188-190℃，1h nmr(400mhz，cdcl3)δ9.05(d，j＝8.5hz，1h)，8.45(d，j＝7.5hz，1h)，7.82(t，j＝7.1hz，1h)，7.75-7.60(m，2h)，7.55-7.41(m，3h).
13
c nmr(100mhz，cdcl3)δ159.7，155.9，146.2，135.1，133.9，126.1，125.8，125.7，124.9，124.8，122.7，120.7，118.2，117.6.
[0026]
实施例2：抗烟草花叶病毒活性的测定，测定程序如下：
[0027]
1、病毒提纯及浓度测定：
[0028]
病毒提纯及浓度测定参照南开大学元素所生测室编制烟草花叶病毒sop规范执行。病毒粗提液经2次聚乙二醇离心处理后，测定浓度，4℃冷藏备用。
[0029]
2、化合物溶液配制：
[0030]
称量后，原药加入dmf溶解，制得1
×
105μg/ml母液，后用含1
‰
吐温80水溶液稀释至所需浓度；宁南霉素制剂直接兑水稀释。
[0031]
3、活体保护作用：
[0032]
选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1
‰
吐温80水溶液对照。24h后，叶面撒布金刚砂(500目)，用毛笔蘸取病毒液，在全叶面沿支脉方向
轻擦2次，叶片下方用手掌支撑，病毒浓度10μg/ml，接种后用流水冲洗。3d后记录病斑数，计算防效。
[0033]
4、活体治疗作用：
[0034]
选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，用毛笔全叶接种病毒，病毒浓度为10μg/ml，接种后用流水冲洗。叶面收干后，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1
‰
吐温80水溶液对照。3d后记录病斑数，计算防效。
[0035]
5、活体钝化作用：
[0036]
选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30min后，摩擦接种，病毒浓度20μg/ml，接种后即用流水冲洗，重复3次，设1
‰
吐温80水溶液对照。3d后数病斑数，计算结果。
[0037]
抑制率(％)＝[(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数]
×
100％
[0038]
首先进行了在处理剂量500μg/ml条件下所有化合物的抗烟草花叶病毒活体钝化活性测试，将相对抑制率大于40％的化合物再进行处理剂量500μg/ml条件下的活体治疗和活性保护活性测试以及处理剂量100μg/ml条件下的抗烟草花叶病毒活体钝化、活体治疗、活体保护活性测试。阳性对照为商品化抗植物病毒药剂病毒唑和宁南霉素。
[0039]
表1骆驼宁碱a衍生物i-1～i-17的抗烟草花叶病毒(tmv)活性测试结果
[0040][0041]
从表一数据可见，骆驼宁碱a衍生物i-1～i-17均表现出不错的抗tmv活性，在500μg/ml情况下，大多数化合物的活性与病毒唑相当，i-9和i-11的抗病毒活性与宁南霉素相当，具有极大的开发价值。
[0042]
实施例3：抗菌活性测试，测定程序如下：
[0043]
离体杀菌测试，菌体生长速率测定法(平皿法)：
[0044]
将一定量药剂溶解在适量丙酮内，然后用含有200μg/ml乳化剂水溶液稀释至所需浓度，然后各吸取1ml药液注入培养皿内，再分别加入9ml培养基，摇匀后制成50μg/ml的含药平板，以添加1ml灭菌水的平板做空白对照。用直径4mm的打孔器沿菌丝外缘切取菌盘，移至含药平板上。每处理重复三次。将培养皿放在24
±
1℃恒温培养箱内培养。48小时后调查各处理菌盘扩展直径，求平均值，与空白对照比较计算相对抑菌率。
[0045][0046]
表2骆驼宁碱a衍生物i-1～i-17的离体杀菌活性测试结果：
[0047][0048]
骆驼宁碱a衍生物在测试浓度为50μg/ml的条件下对14种被测试菌都表现出广谱的抑制活性。化合物i-12和i-15对苹果轮纹的抑菌活性分别为89％、91％，化合物i-9和i-16对水稻纹枯的抑制率分别为88％、100％。
[0049]
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0050]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。