一种促进华重楼种子快速萌发的方法

本发明涉及中药材种苗快速繁育技术领域，具体涉及一种促进华重楼种子快速萌发的方法。

背景技术：

华重楼(parispolyphylla)，多年生的单子叶草本植物，是一种珍贵的中药材植物。其根茎可用药，俗名为重楼，是云南白药、宫血宁片、三七血伤宁片等药的主要原材料，对消炎杀菌、抗毒，以及对于缓解咳嗽、调节心血管等均能起到有效作用。因其珍贵的药用价值，重楼的市场需求量与日俱增。华重楼因其独特的自然生长环境，自然状态下需要经过两个冬天一个夏天(2-3年)种子才能萌发，萌发率仅为30-40％，且发芽不整齐、出苗率低等问题大大制约了重楼优质种苗的供应。目前野生重楼资源接近枯竭无法满足市场的需求，间接导致重楼价格持续上升。目前主要途径是人工栽培来满足市场上的需求。而目前面临的主要问题集中在如何快速解除种子休眠，及发芽整齐方面。近几年，大量学者对华重楼种子快速萌发方法进行研究，公开的报道中种子萌发最快也需要5-6个月，萌发时间并不是很理想，在人工育种方面还存在一定困难，为大规模生产种植的种苗需求造成严重困扰。

由此可见，研究并设计一种促进华重楼种子快速萌发的方法以及大幅提高种子发芽率方法是必要的。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明提供一种促进华重楼种子快速萌发的方法。

本发明提供所采用的技术方案是：

一种促进华重楼种子快速萌发的方法，包括以下步骤：

1)去外种皮处理：将新鲜的成熟华重楼种子红色外种皮剥掉，冲洗干净后，阴干表面水分备用；

2)外源激素处理：将步骤1)获得的华重楼种子使用外源激素浸种处理；

3)湿沙层积处理：将步骤2)所获得的华重楼种子置于不同温度下湿沙层积处理，所述温度范围为4-30℃，处理时间≤80天；

4)催芽处理：将步骤3)萌发的华重楼种子置于恒温条件下催芽处理；

优选地，所述步骤1)为采摘成熟的华重楼种子后立即处理，清水浸泡20-28h。

优选地，所述步骤2)浸种处理使用的外源激素ga3(赤霉素)，所用浓度为1-200mg/l，处理时间为8-24小时。

进一步优选地，所述步骤2)浸种处理使用的外源激素ga3，所用浓度为50mg/l，处理24小时。

优选地，所述步骤3)是灭菌河沙与无菌水混匀配成湿沙，华重楼种子与湿沙的混合比例为种子：湿沙＝1:(2-5)。基质干净河沙，高压灭菌后冷却备用；将准备好的河沙与无菌水混匀配成湿沙，以用手握成形而不散、无水渗流即可。层积处理时将ga3浸种处理完成的种子以种子：湿沙＝1:3的配比混匀；装于20cm口径的塑料花盆中并置于恒温培养箱或冷藏柜中培养。

优选地，所述步骤3)湿沙层积处理时变温条件为5℃与21℃组合、层积时间分别为15-45天。

进一步优选地，所述步骤3)湿沙层积处理条件为5℃下层积30天，然后再21℃下层积45天以上。

优选地，所述步骤4)具体操作为：种子保存在湿沙、恒温条件下，温度设置15-30℃，处理时间30-60天。

进一步优选地，所述步骤4)具体操作为：24℃下催芽30天，待种子胚根萌发至4-5cm。经催芽处理，将萌发的种子移栽至土壤中，胚根向下播种，覆土0.5cm左右，保持一定的水分及温度，播种25天后出苗率达90％。

本发明的有益效果是：

1)本发明技术方案与未经ga3处理的或其他外源激素处理的普通种子相比，在打破种子休眠具有明显的效果；

2)本发明方法通过变温层积处理，能够明显缩短萌发时间(45-75天)，且75天时种子萌发率达到95％以上；当胚根伸长到4-5cm时，播种出苗率能达到90％以上。

附图说明

图1、华重楼种子不同萌发时期图；其中：图1as1时期，种子层积0d；图1bs2时期，种子层积15d；图1cs3时期，种子层积30d；图1ds4时期种子层积45d；图1es5时期，种子层积60d；图1fs6时期，种子层积75d.em，种胚；en，胚乳；p，胚芽；标尺＝1mm；

图2、华重楼种子出苗过程图：图2a成熟新鲜种子；图2b剥去红色外种皮的种子；图2c沙藏75天后萌发的种子；图2d胚根长至4-5cm的种子；图2e华重楼种苗；图2f不同萌发阶段的种子；标尺＝0.5cm。

具体实施方法

下面结合实施例来进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

一种促进华重楼种子快速萌发的方法，包括以下步骤：

1)去外种皮处理：将新鲜的成熟华重楼种子红色外种皮剥掉，冲洗干净后，阴干表面水分备用；

2)外源激素处理：将步骤1)获得的华重楼种子使用外源激素浸种处理；

3)湿沙层积处理：将步骤2)所获得的华重楼种子置于不同温度下湿沙层积处理，所述温度范围为4-30℃，处理时间≤80天；

4)催芽处理：将步骤3)萌发的华重楼种子置于恒温条件下催芽处理；

所述步骤1)为采摘成熟的华重楼种子后立即处理，清水浸泡24h。

所述步骤2)浸种处理使用的外源激素ga3。

所述步骤3)是灭菌河沙与无菌水混匀配成湿沙，基质干净河沙，高压灭菌后冷却备用；将准备好的河沙与无菌水混匀配成湿沙，以用手握成形而不散、无水渗流即可。层积处理时将ga3浸种处理完成的种子以种子：湿沙＝1:3的配比混匀；装于20cm口径的塑料花盆中并置于恒温培养箱或冷藏柜中培养。

1、不同外源激素浸泡，变温(5℃/21℃)湿沙层积处理对华重楼种子萌发影响现将具体实施方案说明如下：

1)外源激素处理：以10月份采摘的华重楼种子为材料，设11个处理分别命名为a、b、b1、b2、c、c0、d、e、f、g、h，每个处理300粒种子，其中a、b、c、d、e、f、g、h处理的种子均用50mg/l的ga3溶液浸泡24h，b1处理的种子用50mg/l的aba溶液浸泡24h，b2处理的种子用50mg/l的6-ba溶液浸泡24h，其中c0的种子用蒸馏水代替ga3溶液浸泡24h。

2)按如下方法进行变温湿沙层积处理试验：

a：在5℃下层积30d，21℃层积45d，在24℃下萌发；

b：在5℃下层积30d，21℃层积45d，在24℃下萌发；

b1：在5℃下层积30d，21℃层积45d，在24℃下萌发；

b2：在5℃下层积30d，21℃层积45d，在24℃下萌发；

c：在5℃恒温条件下直接沙藏；

c0：在5℃恒温条件下直接沙藏；

d：在5℃层积15d，在24℃下萌发；

e：在5℃层积30d，在24℃下萌发；

f：在5℃层积45d，在24℃下萌发；

g：在5℃层积60d，在24℃下萌发；

h：在5℃层积75d，在24℃下萌发。

其中24℃的环境以恒温培养箱模拟，4℃环境以恒温种子柜模拟。每组实验三次重复。从层积开始，每隔15天观察一次并拍照取图，在层积的第45-75天时，对种子进行萌发率统计。萌发率统计结果分析见表1，萌发过程见图1(b处理下的萌发时期图)。

结果表明：华重楼种子在恒温条件且经50mg/lga3溶液浸泡24h，萌发效果更好，在5℃下层积处理30d，然后在21℃下层积处理45d，种子萌发率高达95％以上；

2、催芽和播种

将经过层积处理种子置于24℃恒温下沙藏30天催芽，待种子胚根萌发至4-5cm(图2)(b处理后催芽30的出苗过程)。将萌发的种子移栽至土壤中，胚根向下播种，覆土0.5cm左右，保持一定的水分及温度，播种25天后出苗率达90％。

表1不同层积处理对种子萌发时间及萌发率的影响

注：同一列中字母不同表示差异显著，邓肯多重范围检验法，α＝0.05

由表1可知，华重楼种子在经50mg/lga3溶液处理24h，然后在5℃下层积处理30d，之后在21℃下层积处理45d，种子萌发率可达95％。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

上述的实施例仅为本发明的优选技术方案，而不应视为对于本发明的限制，本申请中的实施例及实施例中的特征在不冲突的情况下，可以相互任意组合。本发明的保护范围应以权利要求记载的技术方案，包括权利要求记载的技术方案中技术特征的等同替换方案为保护范围。即在此范围内的等同替换改进，也在本发明的保护范围之内。