1.本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种促进沉香树结香的方法。
背景技术：2.沉香树是瑞香科，沉香属乔木，主要有白木香树、鹰木香树、蜜香树、奇楠等树种，其中白木香是我国沉香的主要植物来源。沉香具有很高的药用价值，且在文化、香水制造和宗教领域亦有广泛用途，供不应求。目前野生沉香树被过度砍伐，沉香树资源越来越少，现已被列为国家珍稀濒危二级保护植物。为了保护野生沉香资源，开辟可持续利用沉香的途径，各种人工栽培沉香树以及人工结香的技术应运而生。
3.沉香是沉香树受到外伤雷电击伤、台风折断、鼠吃虫咬、人工砍折等后，出于自身的生机恢复功能，树体会分泌出特殊的树脂结香来进行自我修复，真菌感染树体伤处后与这部分树脂反应，从而产生沉香。利用这一机制，我国南方白木香树种植地区，普遍采用传统的砍伤、火烧、打钉、凿洞技术对白木香树进行致伤，或采用现代生物技术在伤处人工接种某种微生物等方法，激发树的防御机制，以促进其产生树脂沉香。但这些结香技术的产率及产量低，品质不稳定，操作麻烦，容易影响树的健康生长，甚至结香之后需砍伐取香再重新栽种。近年来开发出来的点滴法通体结香技术，即在树干体内反复灌注各种化学制剂和或微生物制剂来致伤，诱导树木启动防御反应，在植株内部结香，可在6个月内结香，产量是传统结香法的数十倍以上，且质量较佳，但对植株的伤害比较大，不利于香树的长期健康生长，也不易结出高品质的沉香。
4.目前采取的各种简便快速的人工结香手段，可以缩短结香周期，增加沉香的产量，但是要想获得真正与野生沉香相媲美的高品质沉香，还有很长的路要走。野生沉香的结香周期很长，数量很少。野生沉香是与树体生长的气候、纬度、地势、土壤以及周围环境中的微生物生态等自然环境密切相关。尤其是植物本身与天然环境的长期相互作用，结出香味典雅、气韵悠长的优质沉香。至今，人类对于白木香结香的奥秘还远远没有探究清楚，而且与香树结香关系密切的复杂的菌类微生态系统尚未研究清楚。因此，如何模拟野生条件，真正诱导出天然品质沉香，需要不断的深入研究。
技术实现要素：5.鉴以此，本发明提出一种促进沉香树结香的方法，遵循沉香树生长自然生长规律，不对树体进行大规模伤害，采用特殊钻针进行科学钻孔，通过人工导入结香剂，辅助其转化内生营养，凝结沉香，具有快速、简易、对树体健康无害、结香品质高的优点。
6.本发明的技术方案是这样实现的：
7.一种促进沉香树结香的方法，包括如下步骤：
8.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的沉香树；
9.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，选定孔位，用钻头钻盲孔，盲孔方向与树体成斜角斜向上方或下方，深度为4～6cm；
10.s3.结香：将结香剂导入盲孔内，然后在孔口处涂抹护理液，每隔1～3个月，导入一次结香剂。
11.优选的，所述沉香树为白木香树。
12.优选的，所述沉香树还可以为鹰木香树、蜜香树、奇楠等瑞香科树种。
13.优选的，所述孔位为呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为2～3cm，垂直距离为3～4cm，相邻排间的垂直距离为4～7cm。
14.优选的，所述盲孔方向，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，偶数排的盲孔方向为斜向下方，偶数排的盲孔与下方奇数排的盲孔连通。
15.优选的，所述斜角的角度为30～45
°
。
16.优选的，所述孔的孔径为10～15mm，斜向上方的深度为4～5cm，斜向下方的深度为与下方奇数排的盲孔连通。
17.优选的，当盲孔方向为斜向上方时，所述结香剂的导入方法为用结香剂涂抹孔壁；所述结香剂的使用量为10～15ml/孔，使用频率为每隔1个月使用一次。
18.优选的，当盲孔方向为斜向下方时，结香剂的导入方法为沿孔壁缓慢倒入孔内；所述结香剂的使用量为15～20ml/孔，使用频率为每隔2个月使用一次。
19.优选的，当盲孔方向为奇数排斜向上方、偶数排斜向下方时，结香剂的导入方法为封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内；所述结香剂的使用量为18～30ml/孔，使用频率为每隔3个月使用一次。
20.优选的，所述结香剂，按重量份计，包括以下成分：0.1～0.3份反式肉桂酸、0.04～0.05份萘乙酸、0.55～0.75份花青素、3～5份芦荟苷、1～2份复合菌粉、0.5～2份氨基酸、0.01～0.06份微量元素和15～30份水。
21.优选的，所述复合菌粉为根瘤菌、胶质芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌和刺盘孢菌的菌粉按(0.4～0.5)：1：(1.2～1.4)：(0.7～0.9)的数量比混合制得；所述菌粉中菌的数量为1
×
10
6～8
cfu/g。
22.优选的，所述微量元素为质量比(0.1～0.5)：(4～8)：(0.1～0.5)：1的硫酸铜、碳酸锰、钼酸钠和硫酸锌。
23.优选的，所述护理液，按重量份计，包括以下成分：0.6～0.8份茉莉酸甲酯、5～6份碳酸钙、0.2～0.3份硫酸铜、0.02～0.03份羟甲基纤维素和25～35份水。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
25.本发明提供了一种促进沉香树结香的方法，遵循沉香树生长自然生长规律，通过采用微创钻孔技术，与树体成斜角的钻孔方式，减少对树体的破坏，在采香时无需破坏整个树体，不会影响沉香树的正常生长，然后通过在结香剂中添加反式肉桂酸和萘乙酸抑制木质素的生成，刺激树体分泌树脂，再结合使用复合菌体系，与分泌的树脂反应结香，添加氨基酸和微量元素等营养成分，促进菌种生长，加快结香速度，使沉香树在结香3个月内生产的沉香就可符合药典的标准，在结香6个月后生产的2-(2-苯乙基)色酮类化合物含量高。
26.本发明的结香方法，可以提高沉香树的结香速度，在结香3～6个月后，便可获得品质高的沉香，可提高沉香中沉香四醇、含油量和2-(2-苯乙基)色酮类化合物含量，质量接近野生沉香。
27.本发明通过采用根瘤菌、胶质芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌和刺盘孢菌的复合菌体系
能够分解结香剂中的其余成分，刺激树体分泌油脂，还可与油脂反应生成质量佳的沉香。
28.本发明将相邻排的盲孔连接，加快结香速度，减少结香剂的使用量，提高沉香的含油量。
29.经实验证明，本发明的促进沉香树结香技术，能够诱发沉香树自然结香，持续养护半年、1年、3年或更长时间后，本领域技术人员依据常规方法，例如，观察香树整体状态、结香部位的大体形态、木质特性、颜色、含油脂程度、采样后加热闻到香气等可以初步判断结香情况，并根据需要决定采集时间,以获得不同品质的天然沉香，是一种简单易行，且成效显著的结香方法。
附图说明
30.图1为本发明沉香树结香3个月后生产沉香；
31.图2为本发明实施例1的沉香树结香3个月后生产的沉香的气相色谱-质谱分析图；
32.图3为本发明钻盲孔后的沉香树正视图；
33.图4为本发明钻盲孔后的沉香树横截面示意图；
34.图5为本发明实施例1每排在同一水平上钻1个盲孔后的沉香树径向横截面示意图；
35.图6为本发明实施例2每排在同一水平上钻1个盲孔后的沉香树径向横截面示意图；
36.图7为本发明实施例3每排在同一水平上钻1个盲孔后的沉香树径向横截面示意图；
具体实施方式
37.为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
38.实施例1
39.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
40.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为5cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为10mm，盲孔方向与树体成45
°
角，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，深度为4cm，偶数排的盲孔方向为斜向下方，偶数排的盲孔与下方奇数排的盲孔连通；
41.s3.结香：封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内，结香剂的使用量为18ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔3个月使用一次结香剂；
42.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.04g萘乙酸、0.70g花青素、4g芦荟苷、0.2g根瘤菌菌粉、0.5g胶质芽孢杆菌菌粉、0.65g淡紫拟青霉菌菌粉、0.4g刺盘孢菌菌粉、0.5～2g氨基酸、0.0023g硫酸铜、0.0385g碳酸锰、0.0015g钼酸钠和0.0077g硫酸锌和20g水；
43.所述菌粉中菌的数量为1
×
107cfu/g；
44.所述护理液，包括以下成分：0.7g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和30g水。
45.实施例2
46.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
47.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为2cm，垂直距离为3cm，相邻排间的垂直距离为4cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为15mm，盲孔方向与树体成30
°
角，斜向上方，深度为5cm；
48.s3.结香：用结香剂涂抹孔壁；所述结香剂的使用量为10ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔1个月使用一次结香剂；
49.所述结香剂，包括以下成分：0.3g反式肉桂酸、0.05g萘乙酸、0.75g花青素、5g芦荟苷、0.29g根瘤菌菌粉、0.59g胶质芽孢杆菌菌粉、0.71淡紫拟青霉菌菌粉、0.41g刺盘孢菌菌粉、2g氨基酸、0.0053g硫酸铜、0.0427g碳酸锰、0.001g钼酸钠和0.011g硫酸锌和30g水；
50.所述菌粉中菌的数量为1
×
106cfu/g；
51.所述护理液，包括以下成分：0.8g茉莉酸甲酯、6g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.03g羟甲基纤维素和35g水。
52.实施例3
53.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
54.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为6cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为15mm，盲孔方向与树体成45
°
角，斜向下方，深度为5cm；
55.s3.结香：沿孔壁缓慢倒入孔内，结香剂的使用量为15ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔2个月使用一次结香剂；
56.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.04g萘乙酸、0.6g花青素、3g芦荟苷、0.11g根瘤菌菌粉、0.29g胶质芽孢杆菌菌粉、0.34g淡紫拟青霉菌菌粉、0.26g刺盘孢菌菌粉、1g氨基酸、0.0001g硫酸铜、0.0083g碳酸锰、0.0005钼酸钠和0.0011g硫酸锌和15g水；
57.所述菌粉中菌的数量为1
×
108cfu/g；
58.所述护理液，包括以下成分：0.6g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.2g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和25g水。
59.实施例4
60.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
61.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为5cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为10mm，盲孔方向与树体成45
°
角，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，深度为4cm，偶数排的盲孔方向为斜向下方，偶数排的盲孔与下方奇数排的盲孔连通；
62.s3.结香：封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内，结香剂的使用量为18ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔3个月使用一次结香剂；
63.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.04g萘乙酸、0.70g花青素、4g芦荟苷、0.5g枯草芽孢杆菌菌粉、0.65g青霉菌菌粉、0.4g刺盘孢菌菌粉、0.5～2g氨基酸、0.0023g硫酸铜、0.0385g碳酸锰、0.0015g钼酸钠和0.0077g硫酸锌和20g水；
64.所述菌粉中菌的数量为1
×
107cfu/g；
65.所述护理液，包括以下成分：0.7g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和30g水。
66.实施例5
67.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
68.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为7cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为10mm，盲孔方向与树体成45
°
角，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，深度为4cm，偶数排的盲孔方向为斜向下方，深度为4cm；
69.s3.结香：封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内，结香剂的使用量为18ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔3个月使用一次结香剂；
70.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.04g萘乙酸、0.70g花青素、4g芦荟苷、0.2g根瘤菌菌粉、0.5g胶质芽孢杆菌菌粉、0.65g淡紫拟青霉菌菌粉、0.4g刺盘孢菌菌粉、0.5～2g氨基酸、0.0023g硫酸铜、0.0385g碳酸锰、0.0015g钼酸钠和0.0077g硫酸锌和20g水；
71.所述菌粉中菌的数量为1
×
107cfu/g；
72.所述护理液，包括以下成分：0.7g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和30g水。
73.实施例6
74.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
75.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为5cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为10mm，盲孔方向与树体成45
°
角，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，深度为4cm，偶数排的盲孔方向为斜向下方，偶数排的盲孔与下方奇数排的盲孔连通；
76.s3.结香：封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内，结香剂的使用量为18ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔3个月使用一次结香剂；
77.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.70g花青素、4g芦荟苷、0.2g根瘤菌菌粉、0.5g胶质芽孢杆菌菌粉、0.65g淡紫拟青霉菌菌粉、0.4g刺盘孢菌菌粉、0.5～2g氨基酸、0.0023g硫酸铜、0.0385g碳酸锰、0.0015g钼酸钠和0.0077g硫酸锌和20g水；
78.所述菌粉中菌的数量为1
×
107cfu/g；
79.所述护理液，包括以下成分：0.7g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和30g水。
80.实施例7
81.s1.沉香树的选择：选择树龄3年以上、胸径在10cm以上的白木香；
82.s2.钻孔：在沉香树胸径部位以上，孔位呈阶梯状排列，每一孔位与后一个孔位的水平距离为3cm，垂直距离为4cm，相邻排间的垂直距离为5cm，选定孔位后用钻头钻盲孔，孔径为10mm，盲孔方向与树体成45
°
角，从下往上数，奇数排的盲孔方向为斜向上方，深度为4cm，偶数排的盲孔方向为斜向下方，偶数排的盲孔与下方奇数排的盲孔连通；
83.s3.结香：封住奇数排盲孔，从偶数排将结香剂导入孔内，结香剂的使用量为18ml/孔，然后在孔口处涂抹护理液，每隔3个月使用一次结香剂；
84.所述结香剂，包括以下成分：0.2g反式肉桂酸、0.04g萘乙酸、0.70g花青素、0.2g根瘤菌菌粉、0.5g胶质芽孢杆菌菌粉、0.65g淡紫拟青霉菌菌粉、0.4g刺盘孢菌菌粉、0.5～2g
氨基酸、0.0023g硫酸铜、0.0385g碳酸锰、0.0015g钼酸钠和0.0077g硫酸锌和20g水；
85.所述菌粉中菌的数量为1
×
107cfu/g；
86.所述护理液，包括以下成分：0.7g茉莉酸甲酯、5g碳酸钙、0.3g硫酸铜、0.02g羟甲基纤维素和30g水。
87.试验例沉香品质测定
88.在注射结香剂后3、6个月采集孔中的沉香，测定其浸出物含量和沉香油含量，结果见表1，并测定沉香中2-(2-苯乙基)色酮类化合物总含量和沉香四醇含量，取位于海南屯昌的沉香基地所产的野生沉香作阳性对照，测定结果见表2；
89.浸出物含量的测定：参照《中国药典一部》(2020版)沉香项下【浸出物】；
90.沉香油含量的测定：参照《中国药典一部》(2020版)沉香项下【鉴别】第三项；
91.表1结香效果测定结果
[0092][0093]
由测定结果可知，本发明实施例1～3的结香方法，在结香3个月后沉香的浸出物含量已超过10％、沉香油含量高，其中实施例1的结香质量最佳，在3个月时浸出物含量便可超过17％。与对比例1对比，实施例4采用的菌种不同，结香3个月和6个月得到的沉香浸出物和沉香油含量均低。实施例5未将相邻排的盲孔连通，结香速度慢，浸出物和沉香油含量较低。实施例6～7未使用萘乙酸或芦荟苷，结香质量较差。
[0094]
2-(2-苯乙基)色酮类化合物总含量测定方法：参照刘洋洋等人撰写的“紫外分光光度法测定沉香药材中2-(2-苯乙基)色酮类化合物总含量”的期刊文献进行；
[0095]
具体包括以下步骤：
[0096]
(1)精密称取6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮，加甲醇溶解并稀释成质量浓度(mg/l)为1.5625、3.125、6.250、9.375、12.500、15.625的标准溶液；
[0097]
(2)取沉香油用甲醇溶解并定容至10ml，即得供试品溶液；
[0098]
(3)在230nm处测定吸光值，绘制标准曲线，根据标准曲线计算2-(2-苯乙基)色酮类化合物总含量。
[0099]
沉香四醇含量的测定：参照《中国药典一部》(2020版)沉香项下【含量测定】；
[0100]
表2沉香成分含量测定结果
[0101][0102]
由表2结果可以看出，本发明的结香方法在结香3个月后，沉香中的沉香四醇含量便高于0.10％，2-(2-苯乙基)色酮类化合物总含量与野生沉香比较接近。
[0103]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。