一种含Xcn1的微生物源杀菌膏剂、制备方法及应用

一种含xcn1的微生物源杀菌膏剂、制备方法及应用
技术领域
1.本发明涉及农药制剂加工及微生物农药领域，具体涉及一种含xcn1的微生物源杀菌膏剂、制备方法及应用。


背景技术：

2.随着人们对环境保护意识逐渐增强，国际农产品的质量安全标准提高，人们对新农药的研究与开发提出了更高的要求，生物农药成为农药发展的趋势。经试验研究表明，x.nematophila yl001发酵液在离体和活体条件下均具有显著的杀菌活性，其主要活性成分为xcn1。xcn1化学结构独特，对猕猴桃溃疡病菌(pseudomonas syringaepv.actinidiae)等多种植物病原菌具有较强的抑制作用，不易产生抗药性，在环境中可自然降解。因此，xcn1可作为农业病害防治的无公害杀菌剂，迫切需要进行商品开发。但是，作为一种微生物产生的次级代谢产物，发酵液中含量较低是限制xcn1直接利用的重要因素，如何以较低的成本直接利用xcn1成为其商品化开发过程中的一个重要问题。
3.猕猴桃溃疡病可通过嫁接和修剪枝条等途径传播，引起枝干溃疡腐烂甚至树体死亡，造成大量减产。我国优质猕猴桃主产区雨水较多，在猕猴桃嫁接和修剪过程中，需要一种耐雨水冲刷、能保护伤口和隔绝病原、具有较长的持效期、低残留易降解的农药。目前防治猕猴桃溃疡病的药剂有农用链霉素、中生菌素和波尔多液等，使用方法包括喷雾和涂抹树干等，现有这几种农药在使用过程中存在易被雨水冲刷、持效期不长等问题，膏剂可解决这些问题。
4.国内主要使用的生物农药如井冈霉素、中生菌素、春雷霉素等，剂型主要有水剂、可湿性粉剂和可溶性粉剂等，为拓宽生物农药的使用范围，需要更多类型的制剂来满足用药过程中的需求，膏剂是拓宽生物农药应用范围的可行制剂。目前国内登记杀菌膏剂(或糊剂)有1％戊唑醇糊剂、3％甲基硫菌灵糊剂、5％甲基硫菌灵膏剂、2％喹啉铜膏剂、3％抑霉唑膏剂、5％克菌丹膏剂、3.3％甲硫
·
萘乙酸膏剂等，主要用于防治苹果腐烂病，还未见用于防治猕猴桃溃疡病的杀菌膏剂，防治猕猴桃溃疡病的杀菌用膏剂具有很大的潜在市场。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种含xcn1的微生物源杀菌膏剂、制备方法及应用。该膏剂是由xcn1高度浓缩的发酵液加以成膜剂、增稠剂、保湿剂、促渗剂和水制成的膏状农用杀菌制剂。其应用方法是直接涂抹于修剪过的枝条伤口或病斑处，每平方厘米用药量为0.1～0.2g。
6.本发明的技术方案是：
7.一种含xcn1的微生物源杀菌膏剂，将能产生xcn1的嗜线虫致病杆菌(xenorhabdusnematophila)的发酵液经除糖及除蛋白浓缩后，加入成膜剂、保湿剂、增稠剂、促渗剂和水制备成膏剂即得；
8.可选的，所述的膏剂中所含各种原料的质量百分比分别为：
9.含0.04％～0.15％xcn1的浓缩发酵液，成膜材料5.32％，增稠剂2.52％，保湿剂1.96％，促渗剂2.46％，水补齐100％。
10.可选的，所述的发酵液为嗜线虫致病杆菌yl001(x.nematophila)的发酵液，具体制备包括：
11.将x.nematophila yl001菌株置于lb培养基中，于180rpm/min、28℃条件下活化24h制备种子液，按10％的比例将种子液加入pp3培养基中，经过150rpm/min、28℃条件下发酵48h，将发酵液于4℃、10000rpm/min离心20min，收集上清液，加入十八水合硫酸铝5.5g/l，迅速搅拌1min，放置6h，离心，取上清液，减压蒸馏浓缩至原体积的1/4倍，加入80％乙醇搅拌10min，4℃冷藏过夜，离心，取上清，减压蒸馏浓缩240倍，即可制得含3.0％xcn1的浓缩发酵液。
12.可选的，所述的成膜剂选自羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、聚乙二醇、有机膨润土、硅藻土、海藻酸钠、液体石蜡、明胶、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮和可溶性淀粉中的一种或两种以上的混合物。
13.可选的，所述的保湿剂选自乙二醇、丙三醇和凡士林中的一种或两种以上的混合物。
14.可选的，所述的增稠剂选自羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮和海藻酸钠中的一种或两种以上的混合物。
15.可选的，所述的促渗剂选自氮酮、聚氧乙烯月桂醚和仲辛醇聚氧乙烯醚中的一种或两种以上的混合物。
16.一种含xcn1的微生物源杀菌膏剂的制备方法，所述的含xcn1的微生物源杀菌膏剂为本发明所述的含xcn1的微生物源杀菌膏剂；
17.制备方法包括：
18.水中加入聚乙烯醇加热溶解，过40目筛弃掉不溶物，待冷却至65℃后，加入羧甲基纤维素钠，充分搅拌溶解，在上述混合物中加入氮酮和丙三醇，均匀混合后冷却至45℃，加入xcn1的浓缩发酵液，水补齐至100％，以搅拌速度600～800转/分钟搅拌20～30分钟，即可制得含0.04％～0.15％xcn1的微生物源杀菌膏剂。
19.可选的，所述的含xcn1的浓缩发酵液的制备包括：
20.将x.nematophila yl001菌株置于lb培养基中，于180rpm/min、28℃条件下活化24h制备种子液，按10％的比例将种子液加入pp3培养基中，经过150rpm/min、28℃条件下发酵48h，将发酵液于4℃、10000rpm/min离心20min，收集上清液，加入十八水合硫酸铝5.5g/l，迅速搅拌1min，放置6h，离心，取上清液，减压蒸馏浓缩至原体积的1/4倍，加入80％乙醇搅拌10min，4℃冷藏过夜，离心，取上清，减压蒸馏浓缩240倍，即可制得含3.0％xcn1的浓缩发酵液。
21.本发明所述的含xcn1的微生物源杀菌膏剂用于防治苹果腐烂病(cytosporamandshurica)、苹果轮纹病(physalosporapiricola)和/或猕猴桃溃疡病(pseudomonas syringaepv.actinidiae)的应用；
22.应用方法为：
23.直接涂抹于修剪过的枝条伤口或病斑处，每平方厘米用药量为0.1～0.2g。
24.本发明的优点及意义：
25.(1)xcn1膏剂是一种新型微生物源杀菌剂，符合农业、农药发展的趋势，是一种新型无公害农药制剂；相对于市场上存在的杀菌膏剂，本发明中的xcn1膏剂具有用量更少、无残留、无污染的特点；
26.(2)xcn1发酵液通过发酵嗜线虫致病杆菌获得，我国嗜线虫致病杆菌资源丰富，含xcn1的发酵液易得，母药成本低；xcn1膏剂配置过程中极大地减少有机溶剂的使用，降低了制剂加工中的污染，也减少了对非靶标生物的影响；xcn1膏剂配置方法简单易行，加工成本低，适合工业化生产。
附图说明
27.附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
28.图1各助剂两因素之间对抑菌圈直径影响的响应曲面图；
29.图2xcn1标准品(上)与膏剂有效成分检测(下)的高效液相色谱图。
具体实施方式
30.为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明作进一步地详细描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
31.本发明的含xcn1的微生物源杀菌膏剂及其制备方法，基于絮凝法和有机溶剂析出法除去嗜线虫致病杆菌发酵液中的蛋白质和糖类，经减压蒸馏浓缩制成xcn1母药，加入适量的成膜剂、增稠剂、保湿剂、促渗剂和水，经搅拌法混匀制成的不同xcn1含量的膏状农用杀菌制剂。直接利用嗜线虫致病杆菌发酵液制成的以xcn1为主要抑菌活性成分的农用杀菌膏剂。该膏剂是由xcn1高度浓缩的发酵液加以成膜剂、增稠剂、保湿剂、促渗剂和水制成的膏状农用杀菌制剂。xcn1高度浓缩的发酵液是基于去除蛋白质和多糖的浓缩技术获得的。本发明的应用目的是提供一种可直接使用的能够防治多种枝干病害的生物源杀菌膏剂。其应用方法是直接涂抹于修剪过的枝条伤口或病斑处，每平方厘米用药量为0.1-0.2克。
32.本发明的方法，其中所述除蛋白质的方法，优选的是采用十八水合硫酸铝进行絮凝，可以采用其他絮凝剂除去发酵液中的蛋白质，也可以采用加热、盐析、吸附的方法去除蛋白质。
33.本发明的方法，其中所述除糖的方法，优选的是乙醇作为糖析出剂，有机溶剂析出法中所采用的有机溶剂不局限于乙醇，也可以采用其他常用有机溶剂进行除糖。
34.本发明的方法，其中所述浓缩制备xcn1母药的方法，优选的是减压蒸馏法，也可以采用蒸发器浓缩法、冷冻浓缩法、凝胶吸水浓缩法、超滤浓缩法、反透析法等获得高浓度的xcn1母药。
35.根据本发明的一种优选的实施方式，xcn1母药的浓度为3.0％，也可以采用含量更高的母药进行相关制剂的配置。
36.本发明的方法，其中所述采用的搅拌法制成xcn1制剂，优选的是磁力加热搅拌器和电动搅拌器分步组合进行搅拌，也可以采用其他可控温和可控转速的搅拌装置进行混
合。
37.本发明的应用范围，其中所述多种枝干病害，主要包括猕猴桃溃疡病、苹果腐烂病、苹果轮纹病，也包括其他果树生产中的病原菌感染引起的枝干病害。
38.本发明的使用方法，其中所述直接涂抹于修剪过的枝条伤口或病斑处，也可以涂抹于各种因生物或非生物因素引起的枝干损伤部位，以防止病原菌侵染。
39.本发明的使用方法，其中所述每平方厘米用药量，优选的是0.1-0.2克，也可以根据实际情况适当调整用药量。
40.根据本发明的一种优选的实施方式，xcn1膏状农用杀菌制剂中，xcn1的含量为0.08％，也可以采用不同含量的xcn1制成不同浓度的xcn1膏剂。经离体枝条试验发现，0.08％xcn1膏剂对苹果腐烂病和苹果轮纹病的防效可达80％以上，对猕猴桃溃疡病的防效为71.38％。
41.本产品提供了一种高效、低毒、无污染，对环境、人、畜安全，不易产生抗药性的水基制剂。本发明操作简单，成本低，易于工业化生产。
42.为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明，以下实验中如无特殊说明，％均为质量百分含量：
43.实施例1：xcn1高浓度母药的制备(具体参见“xenorhabdusnematophila yl001培养基筛选和培养条件优化”，王永宏，张兴，2006年，《西北农林科技大学学报(自然科学版)》)
44.本实施例提供3.0％xcn1母药的制备方法，其是将x.nematophila yl001菌株置于lb培养基(1.0％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1.0％nacl)中，于180rpm/min、28℃条件下活化24h制备种子液，按10％的比例将种子液加入pp3培养基(2.0％眎蛋白胨)中，经过150rpm/min、28℃条件下发酵48h，将发酵液于4℃、10000rpm/min离心20min，收集上清液，加入十八水合硫酸铝5.5g/l，迅速搅拌1min，放置6h，离心，取上清液，减压蒸馏浓缩至原体积的1/4倍，加入80％乙醇搅拌10min，4℃冷藏过夜，离心，取上清，减压蒸馏浓缩240倍，即可制得3.0％xcn1母药。
45.实施例2：xcn1膏剂加工过程中助剂及使用量的筛选
46.本实施例提供了xcn1膏剂加工过程中助剂及使用量的筛选方法，xcn1膏剂加工过程中涉及的成膜剂、增稠剂、保湿剂、促渗剂的种类及用量是经多次筛选得到的。经单因素试验筛选得到的最佳浓度为中心点，设计四因素三水平的中心组合试验，以xcn1膏剂对猕猴桃溃疡病菌的抑菌圈直径作为响应值，使用响应面法进行优化后得到各助剂最佳使用浓度：聚乙烯醇5.32％、羧甲基纤维素钠2.52％、氮酮2.46％、丙三醇1.96％。
47.成膜剂及其用量筛选：成膜材料有，羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、聚乙二醇、有机膨润土、硅藻土、海藻酸钠、液体石蜡，明胶、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮k30、可溶性淀粉、通过单因素试验，分析制剂成膜时间和成膜性，筛选最佳成膜材料。
①
恒重法测定成膜剂速干性：取2g成膜剂，均匀涂抹在玻璃板上，放置于70℃烘箱烘干，测定其恒重时间。
②
玻板成膜法测定成膜剂的成膜性：取各成膜剂于9cm培养皿上，成膜性分三个级别考察。均匀成膜，膜能从玻板上完整刮下为i级；均匀成膜，不能从玻板上完整刮下为ⅱ级；成膜剂在玻板不能成膜为ⅲ级。初筛确定聚乙烯醇为xcn1膏剂的成膜材料，用量为5％。
48.增稠剂用量筛选：配置羧甲基纤维素钠含量为0％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、
3％的膏剂，取15cm长，直径1cm左右的枝条，两端蜡封后在枝条一端标记4cm的长度，涂抹0.5g膏剂垂直放置，膏剂固定成膜后测定滴落长度。采用2.5％的羧甲基纤维素作为xcn1膏剂的增稠剂，经粘度计测量，在室温时粘度为8500mp
·
s。
49.保湿剂及其用量筛选：保湿剂材料有丙三醇、丙二醇、凡士林，通过制剂外观，发现丙三醇为最佳保湿材料。配制丙三醇含量分别为0％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％的膏剂，取1.5g膏剂均匀涂抹玻板上，30d后用image j 1.38x(http：//imagej.nih.gov/ij/)软件统计膜的脱落面积。丙三醇含量过高会延长成膜时间，过低会引起膏剂干裂脱落，综合成膜时间，脱落面积和外观上考虑，选择1.5％的丙三醇作为膏剂的保湿剂。
50.促渗剂及其用量筛选：采4支长度粗细相近的猕猴桃枝条，中间环切3cm树皮备用，取4个50ml烧杯，加入2ml蓝墨水，然后配制50ml 2％的氮酮、聚氧乙烯月桂醚、仲辛醇聚氧乙烯醚溶液，以不加促渗剂作为空白对照，将脱脂棉浸泡墨水溶液后，包裹住枝条剥皮处，1h后显微镜下观察染色情况。取6支长度粗细相近的猕猴桃枝条，配制0％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％的氮酮墨水溶液，采用上述同样的方法，确定促渗剂最佳用量。染色试验发现，氮酮染色面积最大，最适合作为促渗剂，最佳使用量为2.5％。
51.结合图1，响应面法配方优化各助剂使用量：根据单因素筛选结果，以聚乙二醇(a)、羧甲基纤维素钠(b)、氮酮(c)、丙三醇(d)的添加量为试验自变量，xcn1含量为200μg/ml，以指示菌猕猴桃溃疡病原菌的抑菌圈直径作为响应值，单因素试验确定的配方最佳浓度作为中心点，设计四因素三水平的box-behnken中心组合试验，使用design expert8.0对组合试验的结果进行回归拟合，得到描述自变量聚乙烯醇(a)、羧甲基纤维素钠(b)、氮酮(c)、丙三醇(d)和响应值抑菌圈直径关系的回归方程：y＝-16.15753+0.91213a+9.53333b+2.16889c+1.67333d-0.1ab
–
0.013333ac+0.1ad+0.4bc+0.1bd-8.20912cd
–
0.0608a
2-2.02b2–
0.63111c2–
0.505d2，去掉不显著项得到的回归方程为：y＝-16.15753+9.53333b+2.16889c+1.67333d-8.20912cd-2.02b2。
52.使用design-expert8.0软件对结果分析后得出xcn1膏剂中的最佳助剂添加量：聚乙烯醇5.32％、羧甲基纤维素钠2.52％、氮酮2.46％、丙三醇1.96％。
53.实施例3：0.08％xcn1膏剂的制备
54.本实施例提供0.08％xcn1膏剂的制备方法，是在适量水中加入5.32％的聚乙烯醇，在90℃下加热溶解，过40目筛弃掉不溶物，待冷却至65℃后，加入2.52％的羧甲基纤维素钠，充分搅拌溶解，在上述混合物中加入2.46％氮酮和1.96％丙三醇，均匀混合后冷却至45℃，加入2.67ml 3.0％xcn1浓缩发酵液，水补齐至100％，以搅拌速度600～800转/分钟搅拌20～30分钟，即可制得0.08％xcn1膏剂。本方法简单易行，成本低，适合大量生产。
55.0.04％、0.06％、0.15％xcn1膏剂的制备方法与0.08％xcn1膏剂的制备方法相同，仅加入3.0％xcn1浓缩液的体积不同。
56.实施例4：0.08％xcn1膏剂质量控制方法
57.本实施例提供了检测0.08％xcn1膏剂热贮稳定性、低温稳定性、离心稳定性、耐水性、附着性等其他特性的方法。
58.制剂外观合格标准：制剂外观应是均匀细腻具有一定流动性的固态制剂，使用粘度计测定制剂粘度≥1000，无颗粒感和不溶物，无分层。
59.热贮稳定性测定方法及合格标准：按gb/t 19136-2003中“液体制剂”进行取适当
量样品，密封于广口瓶中，至少密封3份于(54
±
2)℃恒温箱中储存14天后，观察是否出现油层和絮状物、凝结，通过外观检测合格后再检测有效成分含量，计算有效成分的分解率；如分解率低于5％，且液体透明均一，没有沉淀和分层的试样符合热贮稳定性要求。
60.低温稳定性测定方法及合格标准：将适量样品装入瓶中，密封后于-15℃冰箱中，至少密封3份，贮存14d后取出恢复至室温，通过外观检测合格后再检测有效成分含量；不分层且分解率低于5％为合格。
61.离心稳定性测定方法及合格标准：取0.5g膏剂于离心管中，6000rpm/min离心30min，离心结束后无分层、无水分析出则为合格。
62.生菌时间测定方法及合格标准：取10g膏剂于100ml烧杯中，不封口放在室温环境下培养，10d未观察到菌落生成为合格。
63.耐水性测定方法及合格标准：取1.5g膏剂，均匀涂抹于长度14cm，直径1cm左右的猕猴桃枝条上，在水中浸泡48h不脱落为合格。
64.成膜时间测定方法及合格标准：取1.5g膏剂，均匀涂抹于长度14cm，直径1cm左右的猕猴桃枝条上，每隔15min观察一次，记录膏剂成膜时间，成膜时间低于3h即为合格。
65.树体附着性测定方法及合格标准：取1.5g膏剂，均匀涂抹于长度14cm，直径1cm左右的猕猴桃枝条上，成膜后将树枝置于自然环境中，每隔5d观察一次药膜是否脱落，30d不脱落为合格。
66.实施例5：0.08％xcn1膏剂有效成分含量检测方法
67.本实施例提供检测0.08％xcn1膏剂中有效成分含量的方法，其是采用高效液相色谱法检测xcn1含量。样品前处理步骤为：取5ml的xcn1膏剂于250ml烧杯中，加入50ml水，40℃加热搅拌20min，加入甲醇100ml,搅拌均匀，超声60min，加入十八水合硫酸铝0.5g，搅拌5min后静置2h，10000rpm/min离心20min，离心沉淀物用甲醇清洗三次，离心后取上清液43℃减压蒸馏，水定容至10ml，取定容后的样品过0.22μm滤膜。
68.高效液相色谱检测法中，流动相为含有0.1％三氟乙酸的体积比为3：7的乙腈和水混合物，检测波长为312nm，进样量为20μl，出峰时间约10min，色谱柱为安捷伦c18柱。用分析天平准确称量xcn1标准品，配置浓度为2000μg/ml母液。用超纯水溶解稀释成1000μg/ml、800μg/ml、600μg/ml、400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml标准品溶液。按照上述检测条件进行液相检测分析，绘制以xcn1浓度为横坐标，吸收峰面积为纵坐标的标准曲线，计算线性回归方程和相关系数。将检测样品的峰面积带入回归方程计算待测膏剂样品中xcn1的浓度。具体图谱见图2所示。
69.实施例6：xcn1膏剂防治苹果腐烂病的离体枝条试验
70.本实施例展示了xcn1膏剂在离体枝条试验中对苹果腐烂病的防效，试验方法为：截取离体苹果枝条为15cm小段，两端消毒后包蜡，并用铁钉冒(d＝5mm)于距枝条两端近4cm处烫伤表皮。取0.5g不同浓度xcn1膏剂均匀涂布于烫伤处上下4cm，以涂抹无菌水为空白对照，以涂抹45％代森胺悬浮剂为药剂对照。1天后接种苹果腐烂病菌菌饼(d＝5mm)于烫伤处，重复3个枝条，暗处25℃恒温保湿培养15天后根据公式(1)和(2)计算防效。
71.病斑面积(mm2)＝π
×
长径
×
短径
÷
4公式(1)；
72.73.表1 xcn1膏剂对苹果腐烂病的防治效果
[0074][0075]
注：采用邓肯氏新复极差法分析5％差异显著水平，不同字母表示存在差异，相同字母表示无显著差异；下表同。
[0076]
结果表明：400mg/lxcn1膏剂(0.04％xcn1膏剂)对苹果腐烂病的防治效果与45％代森胺悬浮剂无显著差异(表1)。说明xcn1膏剂对苹果腐烂病具有较好的保护作用。
[0077]
实施例7：xcn1膏剂防治苹果轮纹病的离体枝条试验
[0078]
本实施例展示了xcn1膏剂在离体枝条试验中对苹果轮纹病的防效，试验方法为：截取离体苹果枝条为15cm小段，两端消毒后包蜡，用打孔器(d＝5mm)于距枝条两端近4cm处打孔去掉表皮。保护作用：取0.5g不同浓度xcn1膏剂均匀涂布于伤口处上下4cm，以涂抹无菌水为空白对照，以涂抹50％多菌灵可湿性粉剂为药剂对照。待膏剂成膜后培养1天接种苹果轮纹病菌菌饼(d＝5mm)于烫伤处，重复3个枝条，暗处25℃恒温保湿培养15天后根据公式(1)和(2)计算防效。治疗作用：先接种苹果轮纹病菌，保湿培养3天后，按照保护作用同样的方法涂抹药剂，暗处25℃恒温保湿培养15天后根据公式(1)和(2)计算防效。
[0079]
表2 xcn1膏剂对苹果轮纹病的防治效果
[0080][0081]
结果表明：浓度为400mg/l的xcn1膏剂(0.04％xcn1膏剂)对苹果轮纹病的治疗效果与50％多菌灵可湿性粉剂治疗作用无显著差异；800mg/l的xcn1膏剂(0.08％xcn1膏剂)对苹果轮纹病保护作用防效与50％多菌灵可湿性粉剂保护作用防效无显著差异(表2)。
[0082]
实施例8：xcn1膏剂防治猕猴桃溃疡病的体枝条试验
[0083]
本实施例展示了xcn1膏剂在离体枝条试验中对猕猴桃溃疡病的防效，试验方法为：选取无病的粗老枝，剪切成15cm小段，将猕猴桃枝条小段用自来水冲洗干净晾干后，用次氯酸钠溶液浸泡消毒，然后立即用无菌水冲洗干净，晾干后在剪切处封蜡。在上述枝条的中部切小口(切到木质部即可)，用移液枪吸取10μl猕猴桃溃疡病菌的菌液于切口处，三天后涂抹供试药剂，暗处16℃恒温保湿培养15天后，根据公式(1)和(2)计算防效。
[0084]
表3 xcn1膏剂对猕猴桃溃疡病的防治效果
[0085][0086]
结果表明：不同含量xcn1膏剂对猕猴桃溃疡病都有一定防效，其中1500mg/lxcn1膏剂(0.15％xcn1膏剂)的防效最好，600mg/l的xcn1膏剂(0.06％xcn1膏剂)与200mg/l的3％中生菌素可湿性粉剂的防治效果无显著差异(表3)。
[0087]
实施例9：xcn1膏剂防治猕猴桃溃疡病田间药效试验(杨凌)
[0088]
本实施例展示了xcn1膏剂在田间药效试验中对猕猴桃溃疡病的防效。
[0089]
试验地点：陕西省咸阳市杨陵区崔西沟村的猕猴桃园内，品种为“海沃德”，8年树龄，篱架双壁双层水平整形，园区共220棵树，未施用过溃疡病专用药剂，管理水平较差，溃疡病发生严重。
[0090]
试验方法：施药分两阶段进行，第一阶段在采果后7d施药一次，共施药5次。第二阶段在春季2月进行，间隔7d施药一次，共施药5次。采用先刮除病斑后涂药的方法，先将病斑处溃疡组织全部刮除干净，直到露出白色的健康韧皮部，再将配制好的xcn1膏剂用毛刷按照使用剂量均匀涂抹到伤口处。以3％的中生菌素可湿性粉剂作为对照药剂，并设置清水对照，每处理病斑数为30个。
[0091]
调查方法：施药前标记病斑数量并记录病斑橫径和树茎周长，涂抹施药30天后调查复发病斑数量和病斑橫径，根据公式(3)和公式(4)计算防治效果。病害分级标准见表4。
[0092]
表4猕猴桃溃疡病分级标准
[0093][0094][0095][0096]
表5 xcn1膏剂对猕猴桃溃疡病的田间防治效果
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结果表明：xcn1浓度为1500mg/l的膏剂(0.15％xcn1膏剂)对猕猴桃溃疡病的防效最好，与浓度为200mg/l3％中生菌素可湿性粉剂的防效无显著性差异(表5)。
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以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案做出的各种调整与改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围。