一种蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法与流程

1.本发明涉及蜜蜂实验方法技术领域，尤其涉及一种蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法。


背景技术：

2.蜜蜂急性经口毒性试验：将不同剂量的被试物分散在蔗糖溶液中，用以饲喂成年工蜂，并对药液的消耗量进行测定，药液消耗完后饲喂不含被试物的蔗糖溶液。
3.蜜蜂急性接触毒性试验：在蜜蜂被麻醉后，将不同浓度试验药液点滴在试验用蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后，将蜜蜂转入试验笼中，用脱脂棉浸泡适量蔗糖水饲喂。
4.传统的蜜蜂急性毒性试验蜜蜂采集需要整脾麻醉。然后每10只转移到1个蜜蜂笼中，对苏醒的蜜蜂需要进行二次或多次麻醉，会对蜜蜂本身造成很大的伤害。蜜蜂急性经口毒性试验使用离心管或者注射器，离心管需要人为扎孔，注射器需要一定时间人为去推一下使药液悬而不掉，称量饲喂管的时候及染毒蜜蜂的时候，均存在药液滴漏的风险，同时存在蜜蜂无法将药液取食干净的弊端，进而影响到试验的准确性，农药对蜜蜂的风险评估产生很大的影响。


技术实现要素：

5.为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提出一种蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法。
6.本发明提出的一种蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法，包括如下步骤：
7.饥饿处理：
8.将一定数量的蜜蜂放入饲养笼中在黑暗条件下饥饿处理1h-3h；
9.进行蜜蜂急性经口毒性试验：
10.将饥饿处理后的蜜蜂放置到喂养盒中；
11.将实验药液的饲喂器中并对装有实验药液的饲喂器进行称重，将称重后的饲喂器放入到喂养盒中，3h～6h后取出饲喂器并对饲喂器进行称重；
12.饲喂器中蜜蜂吸食一定量的实验药液后在喂养盒中放置装有蔗糖溶液的饲喂器；
13.进行蜜蜂急性接触毒性试验：
14.将饥饿处理的蜜蜂放入到离心管中，离心管中通入二氧化碳麻醉3s～5s后，将蜜蜂放在试验台上，使用镊子夹住蜜蜂的翅膀，使用微量点滴仪或移液器点滴1μl试验药液至蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后转移至蜜蜂盒中；
15.在喂养盒中放置装有蔗糖溶液的饲喂器。
16.饲喂器可以为现有技术中可以容纳液体物质的且具有开口便于蜜蜂饮食的容器，具体的，饲喂器包括容纳柱，所述容纳柱的顶端开有容纳槽，容纳槽的开口在容纳柱的顶部相对容纳槽开在侧部的容纳槽更便于蜜蜂饮食饲喂器中液体。
17.优选的，容纳槽为柱状，容纳槽的孔径为7mm，容纳槽的容积略大于200μl，容纳槽的开口只允许一只蜜蜂的身体伸至容纳槽中饮食容纳槽中液体，避免两只或两只以上蜜蜂同时饮食容纳槽中液体，避免饲喂器倾倒。
18.优选的，还包括展板，展板上开有容纳孔，容纳柱竖向滑动安装在容纳孔内，避免容纳柱在喂养盒外部时倾倒，具体的，展板可以为现有技术中可以开有容纳孔的具有一定厚度的板材，避免容纳柱倾倒。
19.优选的，还包括挡液环，所述挡液环安装在所述容纳柱并用于防止溶液溅出所述容纳槽，具体的，挡液环可以为塑料或金属或纸材料制成。
20.优选的，所述挡液环为锥形，挡液环的内径从靠近容纳槽的一端向远离容纳槽的一端逐渐变小，挡液环远离容纳槽的一端的直径为1-4mm，即挡液环的开口孔径为1-4mm，进而避免在饲喂器放置到喂养盒过程中防止容纳槽中的液体从饲喂器漏出，且锥形的挡液环便于放置好饲喂器后挡液环内壁的液体排至容纳槽中，且挡液环远离容纳槽的一端的直径为1-4mm，在液体自身表面张力作用下避免液体从挡液环的开口排出。
21.为了便于挡液环拆卸，优选的，挡液环为比较薄的纸制成，所述挡液环的外侧壁开有沿其周向的环形划痕，当挡液环和饲喂器一同放置到喂养盒中后，通过拉扯挡液环使挡液环从环形划痕处断裂将与饲喂器分离的挡液环部分从喂养盒中取出。
22.优选的，所述挡液环包括内环和外环，所述内环与所述容纳槽连通，所述外环套装固定在所述内环的外壁，所述外环固定在所述容纳柱的外壁，所述环形划痕开设在所述外环上，且所述环形划痕与所述容纳柱的上端面在同一平面内，便于挡液环与饲喂器连接并同时便于将挡液环沿环形划痕处分离便于密封从容纳槽开口处饮食液体。
23.优选的，所述容纳柱的下端通过螺纹方式与喂养盒的底板连接，一方面防止饲喂器倾倒，另一方面便于挡液环的拆卸，且便于挡液环内壁的液体排至容纳槽中增大检测精度。
24.优选的，步骤s1中饲养笼中的蜜蜂为工蜂。
25.优选的，步骤s5中的离心管的盖子上固定有气动快速接头，通过软管连接气动快速结构对离心管中通入二氧化碳，相对与现有的对离心管人为扎孔便于提高工作效率。
26.具体的，步骤s3中试验药液为蔗糖和被试物的混合液。
27.本发明中，所提出的蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法，可以完成蜜蜂的快速采集，同时避免了对蜜蜂造成伤害，可以不用对蜜蜂进行麻醉即可开在蜜蜂急性径口毒性式样，饲喂器的使用解决了药液取食不完全的问题，同时避免药液滴漏。
28.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
29.图1为本方法中离心管的结构示意图；
30.图2为本发明展板与饲喂器连接结构示意图；
31.图3为本发明挡液环与容纳柱连接后结构示意图；
32.图4为本发明剖开喂养盒前板后饲喂器放置到喂养盒后结构示意图；
33.图5为本发明剖开喂养盒前板后取出断裂的挡液环后饲喂器与喂养盒结构示意
图。
具体实施方式
34.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中表示，其中自始至终相同或类似的符号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解对本发明的限制。
35.需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
36.此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
37.在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接或彼此可通讯；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
38.在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
39.一种蜜蜂急性经口毒性试验和急性接触毒性试验方法，包括如下步骤：
40.饥饿处理：
41.s1：穿好防护服，将蜂脾从蜂箱中取出，确保无蜂王后根据所需蜜蜂数量抖入蜜蜂饲养笼中，迅速关闭饲养笼拉链，黑暗条件饥饿处理2h；
42.s2:带好手套，将手通过蜜蜂饲养笼的套袖伸入饲养笼中，使用50ml离心管3，管口紧贴饲养笼上部，将蜜蜂扣入离心管3中，可通过轻微抖动离心管3使蜜蜂进入离心管3的底部，取10只蜜蜂后，用大拇指按住管口，防止蜜蜂逃跑；
43.进行蜜蜂急性经口毒性试验：
44.s300：通过轻微抖s2中离心管3，使蜜蜂进入离心管3的底部，将离心管3管口对准喂养盒1的开口处，将蜜蜂抖入喂养盒1中，实现将饥饿处理后的蜜蜂放置到喂养盒1中；
45.s301：如图2所示，将饲喂器放置在展板2上并进行编号，使用万分之一天平称量空饲喂器重量，使用移液器移取200μl试验药液至饲喂器中，将挡液环5的外环51通过粘贴方式固定在容纳柱4的外壁，且内环50包覆容纳槽40的开口(如图3所示)，再次称量饲喂器总重(该处饲喂器的总重包括饲喂器、挡液环5和试验药液总重)，使用镊子将饲喂器连和挡液
环5一同迅速放入喂养盒1中(如图4所示)，并转动容纳柱4使容纳柱4的下方与喂养盒1底板通过螺纹连接，用镊子拉扯挡液环5的顶部使挡液环5从环形划痕510处断裂并将断裂的挡液环5部分取出(如图5所示)，让蜜蜂自由取食容纳槽40的试验药液，4h后取出饲喂器并进行称重，在称重过程中连通上述步骤取出的断裂的挡液环5部分一同称重，该步骤中的试验药液为蔗糖溶液和被试物的混合液(与现有技术中的蜜蜂急性经口毒性试验的试验药液成分相同)；
46.s302：取出装有试验药液的饲喂器后，通过镊子在喂养盒1中放置装有蔗糖溶液的饲喂器，和上述步骤相同，在饲喂器总放置蔗糖溶液后通过挡液环5将饲喂器的容纳槽40槽口包覆，当饲喂器固定在喂养盒1中后然后将挡液环5通过拉扯使其从环形划痕510处断裂并将断裂的挡液环5取出；后面的实验过程和现有的蜜蜂急性经口毒性试验过程相同，观察记录蜜蜂的生命体征；
47.进行蜜蜂急性接触毒性试验：
48.s310:s2中离心管3盖上盖子，该处的离心管3的盖子上设有气动快速接头(如图1所示)，将气动快速接头一端通过软管连接二氧化碳气瓶，另一端伸入离心管3的盖子开口处，旋开钢瓶总阀，调节压力阀至0.02mpa，麻醉4s后，将蜜蜂放在试验台上，使用镊子夹住蜜蜂的翅膀，使用微量点滴仪或移液器点滴1μl试验药液至蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后转移至喂养盒1中；
49.s311:在喂养盒1中放置装有蔗糖溶液的饲喂器；和上述步骤相同，在饲喂器总放置蔗糖溶液后通过挡液环5将饲喂器的容纳槽40槽口包覆，当饲喂器固定在喂养盒1中后然后将挡液环5通过拉扯使其从环形划痕510处断裂并将断裂的挡液环5取出。
50.如图2-5所示，上述方法步骤中的饲喂器为包括容纳柱4，容纳柱4的顶端开有容纳槽40，容纳槽40的开口在容纳柱4的顶部相对容纳槽40开在侧部的容纳槽40更便于蜜蜂饮食饲喂器中液体，容纳槽40为圆柱状，容纳槽40的孔径为7mm，容纳槽40的容积略大于200μl，容纳槽40的开口只允许一只蜜蜂的身体伸至容纳槽40中饮食容纳槽40中液体，避免两只或两只以上蜜蜂同时饮食容纳槽40中液体，避免饲喂器倾倒；
51.为了进一步避免饲喂器倾倒，在本实施例中优选的，容纳柱4的下端开有外螺纹，喂养盒1的底板上开有螺纹孔，螺纹孔与容纳柱4下端的外螺纹匹配；
52.还包括展板2，展板2上开有容纳孔20，容纳柱4竖向滑动安装在容纳孔20内，避免容纳柱4在喂养盒1外部时倾倒，当饲喂器不放置在喂养盒中时，饲喂器放置在展板2的容纳孔20中；
53.还包括挡液环5，挡液环5安装在容纳柱4并用于防止溶液溅出容纳槽40，挡液环5包覆容纳槽40的开口，挡液环5为锥形，挡液环5的内径从靠近容纳槽40的一端向远离容纳槽40的一端逐渐变小，挡液环5远离容纳槽40的一端的直径为1mm-4mm，即挡液环5的开口孔径为1mm-4mm，进而避免在饲喂器放置到喂养盒1过程中防止容纳槽40中的液体从饲喂器漏出，且锥形的挡液环5便于放置好饲喂器后挡液环5内壁的液体排至容纳槽40中，且挡液环5远离容纳槽40的一端的直径为1mm-4mm，在液体自身表面张力作用下避免液体从挡液环5的开口排出；
54.挡液环5为比较薄的纸制成，挡液环5的外侧壁开有沿其周向的环形划痕510，当挡液环5和饲喂器一同放置到喂养盒1中后，通过拉扯挡液环5使挡液环5从环形划痕510处断
裂将与饲喂器分离的挡液环5部分从喂养盒1中取出；
55.挡液环5包括内环50和外环51，内环50与容纳槽40连通，内环50的下端与容纳柱的上端面抵触，内环50位锥形，外环为圆柱形，外环51套装固定在内环50下端的的外壁，外环51固定在容纳柱4的外壁，环形划痕510开设在外环51上，且环形划痕510与容纳柱4的上端面在同一平面内，便于挡液环5与饲喂器连接并同时便于将挡液环5沿环形划痕510处分离便于密封从容纳槽40开口处饮食液体；
56.在放置饲喂器时，通过镊子将容纳柱4放置到喂养盒1的螺纹孔处然后转动容纳柱4，使容纳柱4沿竖直方向的轴线转动使容纳柱4通过的下端与放置盒的底板通过螺纹方式连接，在转动过程中也便于挡液环5内壁的液体流至容纳槽40中，然后撕碎挡液环5并从喂养盒1中取出撕碎的挡液环5，当一定时间后通过镊子将容纳柱4取出并放置在展板2的容纳孔20中。
57.本发明能快速的进行蜜蜂采集，同时又避免了对蜜蜂造成伤害。蜜蜂急性经口毒性试验可以不用麻醉蜜蜂即可开展试验，饲喂器的发明可以解决药液取食不完全的问题，同时避免药液滴漏存在的风险。蜜蜂急性接触毒性试验可以各重复单独麻醉蜜蜂，避免整体麻醉，降低对蜜蜂的伤害；整套的新方法使试验更科学合理。
58.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。