一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法与流程

1.本发明涉及环境生物技术领域，具体为一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法。


背景技术：

2.根据中国专利号为“cn109337826b”公开的一种真菌及真菌-蓝藻复合地衣结皮的快速培育方法本发明中筛选得到的外瓶霉菌zh2，属于高产胞外多糖菌株，将外瓶霉菌zh2与蓝藻复合应用于生物结皮人工固沙，一方面外瓶霉菌zh2能够为蓝藻生长提供碳源，另一方面能够胶结沙粒使其形成稳定的团聚体，提高土壤的碳氮含量和土壤酶活性，改善土壤理化性质，显著促进土壤的营养水平。本发明将真菌与蓝藻混合接种于流沙，能够较快形成稳定的复合结皮，培育周期短，同时提高了人工结皮的稳定性，加速了藻类结皮向地衣结皮演替的过程。本发明培育的真菌-蓝藻复合地衣结皮，其抗旱能力显著高于单一藻结皮，表明复合结皮能够更好的适应干旱区的严苛环境。
3.上述专利文件中的复合结皮仅采用可进行光合作用的蓝藻和地衣进行复合使用，在使用中仅适用于光照充足，湿度适宜的环境，针对湿度较高且光照较少的环境，无法进行快速生长适配，对环境的适配性不高。


技术实现要素：

4.解决的技术问题
5.针对现有技术的不足，本发明提供了一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法，解决了现有的针对环境适配性低的结皮结构问题和结皮结构单一的问题。
6.技术方案
7.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法，包括原料的选材，
8.sp1：原料预处理，所述原料预处理为对选材的原料进行清洗并剪碎为1cm左右的正方形块，且原料分别为地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮；
9.sp2：制备培养基，所述制备培养基为制作a、b、c、d四种培养基，且四种培养基分别为pda培养基、my培养基、emb培养基和bbm培养基；
10.sp3：原料分离处理，所述原料分离处理为对地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮取等重量分别放入离心管中，振荡洗涤10次，2min/次，吸干水分后分别放置超净工作台用无菌水振荡洗涤，振荡洗涤30次，3min/次；
11.sp4：原料组合分类，所述原料组合分类为取原料分离处理后的地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮用无菌研磨棒磨碎，经无菌擦镜纸过滤洗涤5次，将原料等量分为三组，依次为地衣结皮和绿藻结皮、地衣结皮和苔藓结皮、苔藓结皮与绿藻结皮；
12.sp5：组织培养，所述组织培养为将组织分离中的地衣结皮和绿藻结皮、地衣结皮和苔藓结皮、苔藓结皮与绿藻结皮分别放置在a、b、c三种培养基中培养，培养时间为7h；
13.sp6：组合培养，所述组合培养为将a、b、c三个培养基中的三组原料统一移植在d培养基中进行培养，培养时间为5h；
14.sp7：复合结皮表面处理，所述复合结皮表面处理为对组合培养中取出的复合结皮表面均匀喷洒木纤维粘接剂，完成制备。
15.优选的，所述组织培养中的a培养基的环境为2000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为18h，温度为17℃，环境空气湿度为60％。
16.优选的，所述组织培养中的b培养基的培养环境为1000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为8h,温度为15℃，环境空气湿度为85％。
17.优选的，所述组织培养中的c培养基的培养环境为1000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为12h，白天温度为20℃，夜晚温度为10℃，环境空气湿度为70％。
18.优选的，所述原料预处理为对地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮整体表面沙土颗粒进行抖落，在显微镜下取出附着的假根并用流动水冲洗2h，清洗后的原料采用滤纸吸干水分后分类存储在5℃环境下冷藏50min。
19.优选的，所述组织培养时针对三组组合地皮分别对应培养的三种培养基可设置多个，所述组合培养时采用三种组合原料以1:1:1交替分布排列的方式分布在d培养基中进行培养。
20.优选的，所述复合结皮表面处理中木纤维粘接剂的浓度为0.1mol/l,且复合结皮表面面积与木纤维粘接剂的喷洒量的比例为1m2:0.5l。
21.有益效果
22.本发明提供了一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法。具备以下有益效果：
23.本发明改变现有的单层结皮的环境污染监测使用的方式，现有的单层结皮在环境污染监测使用时密度较低，组织成分单一，受环境因素限制，导致对环境中重金属污染的沉降不足，本发明采用地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮两两组合形成三组原料结皮进行组织分离培养，组织培养后再将三组原料结皮共同培养形成复合结皮进行土壤保护和环境污染监测使用，整体密度和复合结皮的丰富度增加，针对不同的户外环境复合结皮内部均有对应环境适配的生物，不受环境限制，可实现空气中和大气降尘的重金属快速吸收，吸收能力增强，便于环境治理使用。
附图说明
24.图1为本发明的方法流程图。
具体实施方式
25.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
26.具体实施例一：
27.如图1所示，一种地衣与苔藓、藻类复合结皮的制备方法，包括原料的选材，
28.sp1：原料预处理，原料预处理为对选材的原料进行清洗并剪碎为1cm左右的正方
形块，且原料分别为地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮；
29.sp2：制备培养基，制备培养基为制作a、b、c、d四种培养基，且四种培养基分别为pda培养基、my培养基、emb培养基和bbm培养基；
30.sp3：原料分离处理，原料分离处理为对地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮取等重量分别放入离心管中，振荡洗涤10次，2min/次，吸干水分后分别放置超净工作台用无菌水振荡洗涤，振荡洗涤30次，3min/次；
31.sp4：原料组合分类，原料组合分类为取原料分离处理后的地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮用无菌研磨棒磨碎，经无菌擦镜纸过滤洗涤5次，将原料等量分为三组，依次为地衣结皮和绿藻结皮、地衣结皮和苔藓结皮、苔藓结皮与绿藻结皮；
32.sp5：组织培养，组织培养为将组织分离中的地衣结皮和绿藻结皮、地衣结皮和苔藓结皮、苔藓结皮与绿藻结皮分别放置在a、b、c三种培养基中培养，培养时间为7h；
33.sp6：组合培养，组合培养为将a、b、c三个培养基中的三组原料统一移植在d培养基中进行培养，培养时间为5h；
34.sp7：复合结皮表面处理，复合结皮表面处理为对组合培养中取出的复合结皮表面均匀喷洒木纤维粘接剂，完成制备。
35.组织培养中的a培养基的环境为2000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为18h，温度为17℃，环境空气湿度为60％，由于a培养基中的原料为地衣结皮和绿藻结皮，由于绿藻结皮需要进行光合作用，且地衣结皮由藻细胞和菌丝共生而成，进行部分的光合所用，因此a培养基内部给予18h的光照时间，便于地衣结皮和绿藻结皮的加速繁衍培养，组织培养中的b培养基的培养环境为1000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为8h,温度为15℃，环境空气湿度为85％，由于b培养基中的原料为地衣结皮和苔藓结皮，苔藓结皮喜湿、不进行光合作用，因此保障空气中湿度为85％，便于苔藓的快速生长，适当的光照便于地衣结皮的快速生长，组织培养中的c培养基的培养环境为1000lx光照强度，采用昼夜交替光照，光照时间为12h，白天温度为20℃，夜晚温度为10℃，环境空气湿度为70％，由于c培养基中的原料为绿藻结皮和苔藓结皮，需要保障光照绿藻结皮光合作用的同时还需保障苔藓结皮的所需湿度，a培养基的内部配比为200g土豆，煮沸30min，加入葡萄糖10.0g，琼脂15g，加蒸馏水不足1000ml制成的固体斜面培养基，b培养基内部的配比为麦芽汁600ml和黄瓜200g，煮沸20min，加入葡萄糖5g，琼脂18g制成的固体斜面培养基，c培养基内部配比为将蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g和琼脂2g，溶解于1000ml蒸馏水中，校正ph为7.1,分装与三角锥形瓶内，在121℃下高压灭菌15min后备用，临时使用时加入乳糖10g,并加热融化琼脂，冷却至50-60℃，加入2％的伊红溶液20ml和0.65％的美兰溶液10ml摇匀，浇筑平板形成固体斜面培养基，d培养基内部的配比为nano3250g,kh2po4175mg,k2hpo475mg,mgso4·
7h2o75mg,cacl2·
2h2o25mg,nacl25mg,edta50mg,koh31mg,feso4·
7h2o4.98mg,h3bo411.42mg，znso4·
7h2o8.82mg,mncl21.44mg,moo30.71mg,cuso4·
5h2o1.57mg,co(no)20.49mg,琼脂15g，加入蒸馏水补足溶液体积至1000ml，制成固体斜面培养基，改变现有的单层结皮的环境污染监测使用的方式，现有的单层结皮在环境污染监测使用时密度较低，组织成分单一，受环境因素限制，导致对环境中重金属污染的沉降不足，本发明采用地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮两两组合形成三组原料结皮进行组织分离培养，组织培养后再将三组原料结皮共同培养形成复合结皮进行土壤保护和环境污染监测使用，整体密度和复合结皮的丰富度增
加，针对不同的户外环境复合结皮内部均有对应环境适配的生物，不受环境限制，可实现空气中和大气降尘的重金属快速吸收，吸收能力增强，便于环境治理使用，原料预处理为对地衣结皮、苔藓结皮和绿藻结皮整体表面沙土颗粒进行抖落，在显微镜下取出附着的假根并用流动水冲洗2h，清洗后的原料采用滤纸吸干水分后分类存储在5℃环境下冷藏50min，组织培养时针对三组组合地皮分别对应培养的三种培养基可设置多个，组合培养时采用三种组合原料以1:1:1交替分布排列的方式分布在d培养基中进行培养，复合结皮表面处理中木纤维粘接剂的浓度为0.1mol/l,且复合结皮表面面积与木纤维粘接剂的喷洒量的比例为1m2:0.5l，采用木纤维粘接剂的喷洒，在土壤表面能够形成特定的膜状结构，它能够有效规避雨水冲刷，减少出苗的时间，使其能够在较短的时间内覆盖地面，同时，木纤维及粘结剂等原料可以在土壤表层产生相对均匀的毯状物薄膜，膜中木纤维可提供有机质，并且在培育的初始阶段可以发挥多种作用，包括遮阴、提升空气湿度和增加土壤含水量等。另外，外表层构成的胶冻膜可以调节内部湿度并具备抗风防冲刷能力，对苔藓植株茎叶碎片发挥固定作用。
36.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个引用结构”限定的要素，并不排除在包括要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
37.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。