弥补OsLOX3敲除水稻株抗瘟性降低及验证方法和应用

技术特征：
1.弥补oslox3敲除水稻株抗瘟性降低及验证方法，其特征在于：步骤包括：(1)生长至三叶一心期的oslox3敲除水稻株，按100株水稻喷施15～20ml浓度为100ppm的外源苯丙氨酸溶液，24h取样测定亚麻酸和亚油酸含量；(2)生长至三叶一心期的oslox3敲除水稻株感染稻瘟菌36～48h时，按100株水稻喷施15～20ml浓度为100ppm的外源苯丙氨酸溶液；(3)步骤(2)喷施后于接种稻瘟菌的36h、48h、72h和96h时取样，测定ja响应基因、防御基因、sa信号基因、活性氧基因和pod基因相对表达量；(4)步骤(2)喷施后于接种稻瘟菌168h后进行病害调查。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述感染稻瘟菌的时间为48h。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述稻瘟菌的菌株为95234i-1b。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述稻瘟菌的菌株孢子悬浮液的浓度为1
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105个/ml。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，稻瘟菌菌株于pda固体培养基上活化，置于28℃恒温培养箱中活化培养4～5天，用打孔器取活化好的菌丝块于pda培养基上28℃恒温培养箱进行继代培养，培养4～5天；再用打孔器打取pda培养基边缘活力好的菌块于pdb液体培养基中，置于28℃恒温摇床中培养3～4天，用移液器吸取500ul菌丝培养液于西梅汁培养基上进行产孢，涂布棒涂抹均匀后置于28℃恒温光照培养箱中黑暗培养3～4天后再光照/黑暗交替12h培养5～6天，待西梅汁培养基上的菌丝由白转黑时，刮去表面菌丝，无菌水沖洗孢子，制成孢子悬浮液，在显微镜下用血球计数板将悬浮液孢子浓度调整为1
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105个/ml。6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述外源苯丙氨酸溶液为含有0.1％吐温的苯丙氨酸水溶液。7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述ja响应基因为osbhlh35、防御基因为ospr1a、sa信号基因为oswrky45、活性氧基因为osrbohb和pod基因为ospox1。8.根据权利要求1-7任一项所述方法在水稻育种中的应用。

技术总结
本发明涉及农业生物基因工程技术领域，具体来说是一种弥补OsLOX3敲除水稻株抗瘟性降低及验证方法和应用，生长至三叶一心期的OsLOX3敲除水稻株，按100株水稻喷施15～20mL浓度为100ppm的外源苯丙氨酸溶液，24h取样测定亚麻酸和亚油酸含量；生长至三叶一心期的OsLOX3敲除水稻株感染稻瘟菌36～48h时，按前述方式外源苯丙氨酸溶液；喷施后于接种稻瘟菌的36h、48h、72h和96h时取样，测定JA响应、防御、SA信号、活性氧和POD基因相对表达量；喷施后于接种稻瘟菌168h后进行病害调查。本发明方法弥补OsLOX3敲除水稻株抗瘟性降低的方法使得防治时间更为精确，并且做到安全有效，为水稻种质资源利用与保护提供重要的措施。质资源利用与保护提供重要的措施。质资源利用与保护提供重要的措施。


技术研发人员：杨静 苏顺雨 赵添琦 杨淑敏 李永杰 言芳
受保护的技术使用者：云南农业大学
技术研发日：2022.10.12
技术公布日：2022/12/6