一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法

本发明涉及植物组织培养，尤其涉及一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法。

背景技术：

1、菜豆(phaseolus vulgaris l.)，又称芸豆(俗称二季豆或四季豆)，是食用人群最多的食用豆类。菜豆中含有丰富的蛋白质、碳水化合物、维生素、纤维素及矿物质，蛋白质含量约为3％～6％，是植物中丰富的蛋白库，基本上可以满足非洲和拉丁美洲等一些国家人口对蛋白质的需求；同时菜豆也被称为“补钙冠军”，其钙含量约为0.3％～0.4％，是黄豆的近两倍；普通菜豆籽粒富含铁、钙、镁、锰和钾等矿物质元素，具有高蛋白、中淀粉、低脂肪以及营养元素丰富等特点，是人类饮食中植物蛋白的重要来源，深受消费者的喜爱。普通菜豆在l5世纪从欧洲引入中国，已有500多年的栽培历史。目前，中国种植的普通菜豆大多为地方品种，主要分布于云南、贵州、山西、陕西、甘肃、内蒙古和黑龙江等省区，是中国主要的出口创汇商品之一。

2、传统菜豆栽培种的产量低、病虫害严重，因此可以通过离体培养的方式来创新种质资源，选育新品种。菜豆离体培养研究国内仅有几例报道，且普遍存在诱导率不高、褐化严重的问题，褐化是植物离体再生培养中常见且不可避免的现象，尤其在豆科植物中。

3、因此本领域技术人员提供了一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，以解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种诱导率高、低褐化率的降低菜豆离体再生体系褐化的方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，包括初代培养及生根培养，其中，所述初代培养包括以下步骤：

4、(1)选取饱满新鲜的种子，预处理后，接种于含ms培养基中，诱发形成无菌苗；

5、(2)用灭菌解剖刀从所得无菌苗上小心切取子叶节，将子叶节接种于防褐化培养基中，培养1周；

6、(3)然后切去主腋芽，再转瓶到防褐化培养基内继代培养，继代培养2周即可。

7、较佳地，所述预处理为将选取的种子，用75％酒精消毒1min，然后用无菌水冲洗3次后备用；用0.1％hgcl2灭菌5min，完成后用无菌水冲洗5次，取出置于无菌滤纸上吸干种子表面水分，即可。

8、较佳地，所述防褐化培养基由基础培养基及外源物质组成。

9、较佳地，所述基础培养基为ms、msb5及b5中的一种。

10、较佳地，所述外源物质为6-ba、抗坏血酸、硝酸银及活性炭中的一种。

11、较佳地，所述6-ba在基础培养基中的添加量为1-2mg/l；所述抗坏血酸在基础培养基中的添加量为3-5mg/l。

12、较佳地，所述硝酸银在基础培养基中的添加量为20-40mg/l；所述活性炭在基础培养基中的添加量为0.5-1.5mg/l。

13、较佳地，所述生根培养的步骤为：将继代培养诱导后的不定芽转入生根培养基中进行生根培养，培养的时间为12-15天。

14、本发明由于采用了上述技术方案，具有以下有益效果：

15、本发明的降低菜豆离体再生体系褐化的方法，通过预处理诱发形成无菌苗，再将子叶节接种于防褐化培养基中进行初代培养及继代培养，有效改善了菜豆离体再生培养的褐化现象，褐化现象降到15.36％以下，炼苗移栽后成活率达89％。

技术特征：

1.一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：包括初代培养及生根培养，其中，所述初代培养包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述预处理为将选取的种子，用75％酒精消毒1min，然后用无菌水冲洗3次后备用；用0.1％hgcl2灭菌5min，完成后用无菌水冲洗5次，取出置于无菌滤纸上吸干种子表面水分，即可。

3.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述防褐化培养基由基础培养基及外源物质组成。

4.根据权利要求3所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述基础培养基为ms、msb5及b5中的一种。

5.根据权利要求3或4所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述外源物质为6-ba、抗坏血酸、硝酸银及活性炭中的一种。

6.根据权利要求5所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述6-ba在基础培养基中的添加量为1-2mg/l；所述抗坏血酸在基础培养基中的添加量为3-5mg/l。

7.根据权利要求5所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述硝酸银在基础培养基中的添加量为20-40mg/l；所述活性炭在基础培养基中的添加量为0.5-1.5mg/l。

8.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述生根培养的步骤为：将继代培养诱导后的不定芽转入生根培养基中进行生根培养，培养的时间为12-15天。

技术总结
本发明公开了一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，包括初代培养及生根培养，其中，所述初代培养包括以下步骤：选取饱满新鲜的种子，预处理后，接种于含MS培养基中，诱发形成无菌苗；用灭菌解剖刀从所得无菌苗上小心切取子叶节，将子叶节接种于防褐化培养基中，培养1周；然后切去主腋芽，再转瓶到防褐化培养基内继代培养，继代培养2周即可。其中防褐化培养基由基础培养基及外源物质组成。本发明通过预处理诱发形成无菌苗，再将子叶节接种于防褐化培养基中进行初代培养及继代培养，有效改善了菜豆离体再生培养的褐化现象，褐化率降到15.36％以下，炼苗移栽后成活率达89％。

技术研发人员：吴小丽,张慧娜,马留辉,苏绍烊,覃连红,韦媛,余江敏,莫龙萍,戴霏,李熠庆
受保护的技术使用者：广西农业职业技术大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11