一种促进高pH下蓝莓试管苗优质速生的培养基组合及其制备方法和应用

本发明涉及植物组织培养，具体是一种促进高ph下蓝莓试管苗优质速生的培养基组合及其制备方法和应用。

背景技术：

1、蓝莓是一种营养价值丰富的水果，其果实富含花青素、维生素等多种营养物质，具有抗氧化、抗癌、保护视力、消除炎症、增强免疫力、防止脑神经老化及保护心脑血管等多种功效，是新兴的保健果品。蓝莓植株对培养基质的ph要求苛刻，其正常生长需要ph 4.5～5.5的酸性条件，ph值高于5.5的环境会阻碍蓝莓正常的生理代谢，导致植株营养缺乏、生长迟缓甚至死亡。在蓝莓种苗的大规模繁育中常使用组织培养技术，而蓝莓在组织培养中同样也需要较低的ph条件。ph值是影响培养基凝固性的主要因素之一，ph＜5.5时培养基不能很好凝固，因此，在蓝莓组织培养快速育苗过程中，为使培养基在较低ph值下良好凝固，需提高琼脂浓度，这大大增加了培养成本，同时也阻碍了蓝莓试管苗对营养物质的吸收及利用，使得试管苗生长缓慢，繁育周期长，而提高ph值又会对试管苗造成胁迫，阻碍蓝莓试管苗的物质及能量代谢，限制其生长发育。培养基ph大于6.0时，蓝莓试管苗的株高和生物量降低，生长速率下降。高ph对蓝莓试管苗的胁迫严重限制了蓝莓试管苗的大规模繁育，提高了繁育成本，因此，急需找到一种能够提高蓝莓试管苗高ph耐受性的新方法，缓解高ph对蓝莓苗的伤害，这对蓝莓产业化育苗及栽培均具有重大意义。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种提高蓝莓试管苗高ph耐受性的培养基及其配制方法，解决高ph胁迫下蓝莓试管苗膜脂受损、营养吸收受阻、生长缓慢的问题，以适应蓝莓试管苗的繁育需要，提高蓝莓试管苗在较高ph下的生物量，降低成本。

2、本发明提供了γ-氨基丁酸在高ph胁迫下蓝莓试管苗培养中的应用，所述ph＞5.5。

3、上述技术方案中，进一步地，所述γ-氨基丁酸添加在培养基中的浓度为0.25～1g/l。

4、上述技术方案中，进一步地，所述培养基包括以下原料组成：每1l中包含2.47g 1/2ms基础培养基、5g琼脂、1mg玉米素(zt)、20g白砂糖、0.25g～1.0gγ-氨基丁酸。

5、上述技术方案中，进一步地，所述培养基的制备方法包括以下步骤：

6、(1)按配比称取1/2ms培养基、玉米素、γ-氨基丁酸gaba加水定容至500ml，调节ph值得到培养基溶液；

7、(2)按配比称取琼脂定容至500ml，加热至琼脂沸腾溶解；

8、(3)将培养基溶液与琼脂溶液迅速混合，加入白砂糖，在培养基溶液凝固前分装入培养瓶中，密封，高压蒸汽灭菌，常温保存备用。

9、上述技术方案中，进一步地，所述ph为6.0～7.0。

10、上述技术方案中，进一步地，所述蓝莓为斯巴坦、杜克、卡梅拉、奥尼尔、自由或天后。

11、与现有技术相比，本发明有益效果：

12、本发明将γ-氨基丁酸添加在高ph蓝莓试管苗培养基中，提高蓝莓试管苗对高ph的耐受性，促进高ph下蓝莓试管苗优质速生，增加蓝莓试管苗在高ph条件下的生物量，提高试管苗的生长速度，缩短繁育周期。

13、在ph 6.0条件下，在本发明培养基上培养的‘奥尼尔’试管苗，其生物量及生长速度显著高于适宜ph(5.0)条件下培养的试管苗。

14、在ph 6.0～7.0条件下，本发明培养基显著提高了‘奥尼尔’试管苗的gaba、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量；显著降低了h2o2含量及超氧阴离子(o2·-)生成速率，显著降低了相对电导率，降低了膜脂过氧化程度；显著提高了n元素含量，降低了na元素的含量，提高了k+/na+比。

15、在ph 6.0条件下，本发明培养基显著提高了‘斯巴坦’、‘杜克’、‘绿宝石’、‘卡米拉’、‘自由’、‘天后’蓝莓品种试管苗的株高及繁殖速度，缩短了育苗周期。以‘奥尼尔’试管苗为例，显著升高了多种抗氧化酶活性；显著降低了试管苗生长抑制类激素脱落酸(aba)含量，提高了吲哚乙酸(iaa)、异戊烯基腺嘌呤(ipa)、赤霉素(ga3)、油菜素甾醇(br)等生长促进类激素与脱落酸(aba)的比值。

技术特征：

1.γ-氨基丁酸在高ph胁迫下蓝莓试管苗培养中的应用，所述ph＞5.5。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述γ-氨基丁酸添加在培养基中的浓度为0.25～1g/l。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述培养基包括以下原料组成：每1l中包含2.47g 1/2ms基础培养基、5g琼脂、1mg玉米素(zt)、20g白砂糖、0.25g～1.0gγ-氨基丁酸。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述培养基的制备方法包括以下步骤：

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ph为6.0～7.0。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蓝莓为斯巴坦、杜克、卡梅拉、奥尼尔、自由或天后。

技术总结
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体是一种促进高pH下蓝莓试管苗优质速生的培养基及制备方法和应用。培养基包括以下原料组成：每1L中包含2.47g 1/2MS培养基、5g琼脂、1mg玉米素(ZT)、20g白砂糖、0.25g～1gγ‑氨基丁酸。本发明将γ‑氨基丁酸添加至培养基有效缓解高pH胁迫对蓝莓试管苗的损害，显著提高了‘斯巴坦’‘杜克’‘绿宝石’‘卡米拉’‘自由’‘天后’蓝莓品种试管苗的株高及繁殖速度，缩短了育苗周期。

技术研发人员：夏秀英,岳珈甲
受保护的技术使用者：大连理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15