山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用及使用方法

本发明涉及山奈酚作为山羊精液质量增强剂的制备及其应用方法属于畜牧繁殖，用于山羊人工授精时能够保护精子，可减少精子被大量中性粒细胞捕获进而导致精子质量下降的现象，具体而言，涉及山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用及使用方法。

背景技术：

1、山羊精液冷冻保存技术目前虽然已进入生产应用阶段，但冷冻精液人工授精受胎率不高仍是限制山羊冷冻精液进行生产和推广的重要因素之一。然而，在生产实践中，山羊精液常温稀释保存和鲜精人工授精技术仍广泛应用。影响山羊精液常温稀释保存效果的因素较多。稀释比例和方法直接决定了稀释后的精液质量，较差的精液质量更受生殖道免疫状态影响人工授精的成功率。目前，精液稀释液的主要成分为营养剂和保护剂，其中营养剂可以减少精子自身能量消耗以便延长精子寿命，保护剂的主要成分是电解质，发挥缓冲作用。在山羊精液常温保存过程中，往往伴随氧化应激的发生，酸性代谢产物和活性氧含量增加，导致精液保存时间和精子活力大幅下降。山奈酚是一种黄酮类中药单体，可以中和酸，具有一定的抗氧化作用。山羊的精液极易发生应激反应，精子的代谢和运动加快，消耗大量的代谢基质。山奈酚有望延长精子存活时间和提高精子的质量。母羊生殖道黏膜免疫是雌性动物与生俱来的一种抵抗异物的免疫防线。精子作为一种异物，会引起生殖道免疫反应，释放大量炎性细胞捕获、杀伤精子，进而影响精子质量，甚至降低母羊受孕率。因此，研制增强山羊精液质量的精液稀释剂，提高精子活力的同时又可以降低生殖道免疫系统对精子的损伤作用具有极其重要的意义。

技术实现思路

1、本发明提供了山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用及使用方法，具体技术方案如下：

2、山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，将山羊精液用加入所述山羊精液质量增强剂的培养基稀释，所述山羊精液质量增强剂主要由山奈酚制备而成。

3、进一步地，所述山羊精液质量增强剂的主要配比为：将山奈酚溶于50ml培养基，所述山奈酚的添加量包括25μm、50μm、100μm中的任一一种。

4、进一步地，所述培养基为无酚红1640培养基。

5、进一步地，使用所述培养基对山羊精液进行十倍稀释。

6、进一步地，所述山羊精液质量增强剂的制备方法包括以下步骤：

7、(1)无菌条件下，将无酚红1640培养基37℃预热,0.22μm孔径无菌滤器过滤，4℃保存备用；

8、(2)无菌条件下，按比例将山奈酚(25μm、50μm、100μm)溶解于50ml无酚红1640培养基，充分溶解20min以上，超声混匀，0.22μm孔径无菌滤器过滤获得山羊精液质量增强剂，-20℃避光保存备用。

9、进一步地，所述山羊精液质量增强剂的制备方法还包括以下步骤：

10、使用时，将所述步骤(2)的贮液放于室温化冻后，与山羊精液混合均匀。

11、进一步地，所述步骤(2)解冻后保存温度为2-5℃。

12、进一步地，所述步骤(2)保存期限为3-5周。

13、进一步地，所述步骤(2)中的山羊精液质量增强剂的保存方式替换为2-5℃保存。

14、本技术方案还提供了山奈酚作为山羊精液质量增强剂使用方法，所述使用方法为将山羊精液质量增强剂预热至35-37℃，再与山羊精液进行混合使用。

15、本发明的有益效果是:本发明是山奈酚可提高精子活力的同时又可以降低生殖道免疫系统对精子的损伤，所述精液质量增强剂包含山奈酚，能作为抗氧化物质或质膜保护剂，维持精液中抗氧化剂的储备，提高精液抗应激反应能力，清除精液在应激环境条件下生成的ros，同时还可以降低生殖道免疫系统对精子的损伤，进而延长山羊精子在生殖道的存活时间。本发明的山羊精液质量增强剂能更好提高精液质量，提高精子活力的效果。

技术特征：

1.山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，将山羊精液用加入所述山羊精液质量增强剂的培养基稀释，所述山羊精液质量增强剂主要由山奈酚制备而成。

2.根据权利要求1所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述山羊精液质量增强剂的主要配比为：将山奈酚溶于50ml培养基，所述山奈酚的添加量包括25μm、50μm、100μm中的任一一种。

3.根据权利要求1或2所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述培养基为无酚红1640培养基。

4.根据权利要求1或2所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，使用所述培养基对山羊精液进行十倍稀释。

5.根据权利要求1所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述山羊精液质量增强剂的制备方法包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述山羊精液质量增强剂的制备方法还包括以下步骤：

7.根据权利要求5所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述步骤(2)解冻后保存温度为2-5℃。

8.根据权利要求5所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述步骤(2)保存期限为3-5周。

9.根据权利要求5所述的山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用，其特征在于，所述步骤(2)中的山羊精液质量增强剂的保存方式替换为2-5℃保存。

10.山奈酚作为山羊精液质量增强剂使用方法，其特征在于，所述使用方法为将山羊精液质量增强剂预热至35-37℃，再与山羊精液进行混合使用。

技术总结
本发明公开了山奈酚作为山羊精液质量增强剂的应用及使用方法；本发明属于畜禽繁殖技术领域，具体公开了山奈酚可以提高山羊精子与中性粒细胞发生免疫反应后的精子质量。经验证：山羊中性粒细胞能够释放典型的NETs结构捕获精子、降低精子质量，而山奈酚可以显著提高精子质量，为山奈酚用作山羊精液质量增强剂提高反刍动物配种成功率提供了实验依据。用本发明的山奈酚作为山羊精液质量增强剂来改善因生殖道炎症或损伤时大量炎性细胞浸润导致精子质量下降的现象，该增强剂应用方法简便快速，可以起到保护精子，解决因生殖道炎症或损伤引起的精子质量下降问题，该方法也可用于大规模人工繁殖和生产中。

技术研发人员：洪鸿荣,黄静,刘炜,魏正凯,杨正涛
受保护的技术使用者：佛山科学技术学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15