一种银屑病动物模型的建立方法与流程

本发明涉及动物模型领域，具体涉及一种银屑病动物模型的建立方法。

背景技术：

1、银屑病是一种遗传与环境共同作用诱发的免疫介导的慢性、复发性、炎症性及系统性皮肤病，典型皮损临床表现为鳞屑性红斑或斑块。银屑病目前尚不能根治，患者经治疗后容易复发，常需终身治疗，给患者造成严重的心理负担。银屑病是由多种致病因子刺激免疫系统，引起树突状细胞、t细胞、巨噬细胞等多种细胞功能失常及胞内信号传导异常，诱发免疫系统紊乱及炎症产生，导致表皮角质形成细胞过度增殖、异常分化、大量炎性细胞浸润等特征表现，其发病机制至今尚未明确。

2、动物模型的建立在银屑病发病机制和药物研发中起着重要作用，然而目前还没有一种与人类银屑病发病机制和治疗药物反应相吻合的动物模型。银屑病动物模型如自发性小鼠模型，基因工程小鼠模型及异种移植模型等均各有优缺点，但都较为昂贵或操作复杂，适用性及推广性不强。药物诱发型动物模型，其价格低廉，简单易行，其中以咪喹莫特诱导的银屑病动物模型使用最为广泛。其造模时间的长短与人银屑病的早期和晚期组织病理学相似，被认为是多种作用机制协同所致。但同时，存在模型不稳定，造模后模型维持时间较短，长时间应用会引起全身性炎症和免疫应答反应等不足之处。因此，建立新的银屑病动物模型或优化现有模型，对银屑病病因及治疗药物的发现有着重要意义。

3、白介素-2(il-2)等细胞因子参与着银屑病的发病过程，通过活化t细胞、刺激树突状细胞、巨噬细胞等分泌炎性因子诱发或加重银屑病的发生。研究发现在银屑病患者体内il-2水平明显升高，而白介素2单抗通过选择性的靶向阻断体内il-2，抑制其作用，对银屑病具有一定的治疗效果，证实了il-2伴随着银屑病的发生和发展。因此，在建立银屑病动物模型中给予il-2细胞因子，能够促进银屑病的发生，使模型更稳定，同时还能够降低全身性的副反应等多种优点。此外，多种机制诱发的动物模型更符合银屑病的发病机理。

4、故本发明采用il-2细胞因子联合咪喹莫特诱导银屑病动物模型，能够促进银屑病的发生，加重银屑病的发展，同时可改进单用咪喹莫特诱导模型的稳定性、模型维持时间、全身性免疫反应等不足之处，可广泛推广与应用，为银屑病发病机制及药物的研发提供实验工具。

技术实现思路

1、本发明提供了一种新型银屑病动物模型的建立方法，该方法采用注射il-2细胞因子联合外用咪喹莫特乳膏建立银屑病动物模型。该模型在皮损严重程度，皮损组织病理学改变，皮损组织免疫组化中cd4+及cd8+t细胞表达情况，血清炎症因子水平等方面均符合银屑病特征。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种银屑病动物模型的建立方法，所述方法为：注射细胞因子联合外涂咪喹莫特共同诱导大鼠或小鼠建立银屑病动物模型；所述细胞因子为白介素-2(il-2)或tnf-α。

4、优选地，所述细胞因子为白介素-2，其诱导的模型更加稳定。

5、在本发明的一个实施例中，所述咪喹莫特以咪喹莫特乳膏的形式外涂至大鼠或小鼠造模部位。进一步，所述咪喹莫特乳膏中咪喹莫特的质量含量为5％，用量为20mg咪喹莫特乳膏/cm2造模部位面积。更进一步，外涂的频率为1次/天，总计7～14天。

6、进一步，所述造模部位为脱毛后的动物背部皮肤、耳部皮肤或其他部位皮肤。

7、进一步，所述细胞因子的给药方式为腹腔注射、静脉注射或皮下注射。注射剂量为0.5～18万iu/kg大鼠或小鼠体重。

8、在本发明的一个实施例中，所述细胞因子的给药方式为腹腔注射，根据临床剂量换算，本发明推荐白介素-2的注射剂量为1～9万iu/kg大鼠或小鼠体重，tnf-α的注射剂量为0.5～4.5万iu/kg大鼠或小鼠体重。

9、在本发明的一个实施例中，所述细胞因子的注射时间为每日涂抹咪喹莫特乳膏前后30min内。

10、具体地，所述方法为：

11、大鼠或小鼠适应性喂养后，进行背部或耳部脱毛后，按照1次/d，连续7～14天进行如下处理：脱毛处按照20mg/cm2均匀涂抹咪喹莫特乳膏(四川明欣药业有限责任公司，批号：39220301)，30min内将细胞因子注射液按0.5～18万iu/kg大鼠或小鼠体重进行腹腔注射，得到所述银屑病动物模型。

12、第二方面，本发明还提供一种上述方法建立的银屑病动物模型。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、①与单用咪喹莫特建立的银屑病动物模型相比，本方法建立的银屑病动物模型具有出现银屑病样皮损时间缩短，皮损严重程度加重，模型维持时间较长且稳定；

15、②与单用咪喹莫特建立的银屑病动物模型相比，本方法建立的银屑病动物模型具有皮损组织病理学特征更加明显，皮损组织中cd4+及cd8+t细胞表达水平更高；

16、③与单用咪喹莫特建立的银屑病动物模型相比，本方法建立的银屑病动物模型具有血清中诱发的炎症因子更多，表达水平更高。

技术特征：

1.一种银屑病动物模型的建立方法，其特征在于所述方法为：细胞因子联合咪喹莫特共同诱导大鼠或小鼠建立银屑病动物模型；所述细胞因子为白介素-2或tnf-α。

2.如权利要求1所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述细胞因子为白介素-2。

3.如权利要求1所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述咪喹莫特以咪喹莫特乳膏的形式外涂至大鼠或小鼠造模部位。

4.如权利要求3所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述咪喹莫特乳膏中咪喹莫特的质量含量为5％，用量为20mg咪喹莫特乳膏/cm2造模部位面积；外涂的频率为1次/天，总计7～14天。

5.如权利要求3所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述造模部位为脱毛后的动物背部皮肤、耳部皮肤或其他部位皮肤。

6.如权利要求1所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述细胞因子的给药方式为腹腔注射、静脉注射或皮下注射，注射剂量为0.5～18万iu/kg大鼠或小鼠体重。

7.如权利要求6所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：白介素-2的注射剂量为1～9万iu/kg大鼠或小鼠体重，tnf-α的注射剂量为0.5～4.5万iu/kg大鼠或小鼠体重。

8.如权利要求6所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于：所述细胞因子的注射时间为每日涂抹咪喹莫特乳膏前后30min内。

9.如权利要求1所述的银屑病动物模型的建立方法，其特征在于所述方法为：

10.如权利要求1-9任一项所述的方法建立的银屑病动物模型。

技术总结
本发明公开了一种银屑病动物模型的建立方法。该制备方法采用注射细胞因子联合外用咪喹莫特乳膏建立银屑病动物模型。该模型在皮损严重程度，皮损组织病理学改变，皮损组织免疫组化中CD4+及CD8+T细胞表达情况，血清炎症因子水平等方面均符合银屑病特征。与单用咪喹莫特乳膏诱导模型相比，具有银屑病发生及发展时间更快，模型特征更为明显，模型的稳定性更高，模型维持时间更久，模型机制更多样，同时降低全身性免疫反应等优势。本发明所建立的模型操作简单易行，可广泛推广与应用，为银屑病发病机制及药物的研发提供实验工具。

技术研发人员：王楠楠,蔡婷婷,刘霞,朱婉萍,徐云玲,王昱霁
受保护的技术使用者：浙江省中医药研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15