一种紫花苜蓿的组培繁殖方法

本发明涉及植物组织培养，尤其涉及一种紫花苜蓿的组培繁殖方法。

背景技术：

1、苜蓿是苜蓿属(medicago)植物的通称，俗称金花菜，是一种多年生开花植物。苜蓿以“牧草之王”著称，不仅产量高，而且草质优良，富含丰富的蛋白质和纤维含量，各种畜禽均喜食。苜蓿种类繁多，多是野生的草本植物，其中最著名的是作为牧草的紫花苜蓿(medicago sativa)。紫花苜蓿再生能力强，一年可多次收割，能够连续多年高产，且具有高抗寒、抗旱、耐盐碱的优良性能。

2、目前，有很多针对苜蓿的组织培养技术的研究，但不同地区的苜蓿由于基因以及生长环境的差异，最适用的组培方法也不相同。例如专利号为“201210440085.6”的专利公开了一种德钦野生紫花苜蓿无菌苗组织培养及快速繁殖的方法，取野生紫花苜蓿的幼嫩叶片进行原球茎诱导、分化、壮苗、生根培养；专利号为“202111326514.2”的专利公开了一种阿拉善地区野生苜蓿组培苗培养方法，选择野生苜蓿的花苞作为外植体然后进行愈伤组织的诱导培养和生根培养。目前关于新疆维吾尔自治区野生首蓿的组织培养尚未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种适用于新疆维吾尔自治区紫花苜蓿的快速组培繁殖方法。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种紫花苜蓿的组培繁殖方法，包括以下步骤：

4、(1)愈伤组织诱导培养：切取无菌苗的下胚轴，接种至愈伤组织诱导培养基中，暗培养20～25天，获得愈伤组织；

5、(2)愈伤组织分化诱导培养：将愈伤组织切成4.5～5.5mm*4.5～5.5mm的块，置于生芽诱导培养基培养38～42天，获得丛生芽；

6、(3)丛生芽生根培养：将从生芽上生长高度1-2cm的不定芽剥离下来，接种到生根培养基上培养10～15天，获得再生苗；

7、(4)炼苗移栽：将再生苗在室内放置4～6天后，移栽至营养土和蛭石的育苗基质中进行培养，获得紫花苜蓿植株；

8、所述愈伤组织诱导培养基含有2,4-d和kt，所述2,4-d的终浓度为1.8～2.2mg/l，所述kt的终浓度为0.3～0.5mg/l。

9、优选的，下胚轴的切取长度为3～5mm。

10、优选的，所述愈伤组织诱导培养的温度为23～27℃，所述愈伤组织诱导培养的空气湿度为50～60％。

11、优选的，所述愈伤组织分化诱导培养的过程中，每天光照时长为15～17h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为23～27℃，空气湿度为50～60％。

12、优选的，所述丛生芽生根培养的过程中，每天光照时长为15～17h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为23～27℃，空气湿度为50～60％。

13、优选的，所述育苗基质中营养土和蛭石的重量比为2.5～3.5:1。

14、优选的，所述生芽诱导培养基以ms培养基为基础培养基，添加有以下浓度的组分：0.45～0.55mg/l的kt，0.08～0.12mg/l的naa，18～22g/l的蔗糖，7～8mg/l的琼脂。

15、优选的，所述生根培养基以ms培养基为基础培养基，添加有以下浓度的组分：0.8～1.2g/l的iba，浓度为28～32g/l的蔗糖，浓度为7～8mg/l的琼脂。

16、优选的，所述无菌苗由苜蓿种子接种于ms培养基进行培养获得。

17、优选的，所述种子先用乙醇溶液消毒50～70s，再用hgcl2溶液消毒6～8min；所述乙醇溶液的体积分数为70～80％，所述hgcl2溶液的浓度为0.08～0.12％。

18、通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：本发明以新疆维吾尔自治区野生苜蓿无菌苗的下胚轴为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上进行培养获得愈伤组织，然后诱导愈伤组织生芽，将已经分化培养得到的丛生芽上的不定芽分离下来，接种到生根培养基上培养，得到再生成苗，再进行炼苗和移栽，得到紫花苜蓿苗。本发明通过优化愈伤诱导培养基、生芽诱导培养基和生根培养基，提高愈伤组织培养率、生芽诱导率、生根诱导率以及炼苗移栽成活率，为新疆维吾尔自治区紫花苜蓿的组培繁殖提供了技术基础。

技术特征：

1.一种紫花苜蓿的组培繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述下胚轴的切取长度为3～5mm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养的温度为23～27℃，所述愈伤组织诱导培养的空气湿度为50～60％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织分化诱导培养的过程中，每天光照时长为15～17h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为23～27℃，空气湿度为50～60％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述丛生芽生根培养的过程中，每天光照时长为15～17h，光照强度为1500～2000lx，培养温度为23～27℃，空气湿度为50～60％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基质中营养土和蛭石的重量比为2.5～3.5:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生芽诱导培养基以ms培养基为基础培养基，添加有以下浓度的组分：0.45～0.55mg/l的kt，0.8～1.2mg/l的naa，18～22g/l的蔗糖，7～8mg/l的琼脂。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养基以ms培养基为基础培养基，添加有以下浓度的组分：0.8～1.2g/l的iba，浓度为28～32g/l的蔗糖，浓度为7～8mg/l的琼脂。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无菌苗由苜蓿种子接种于ms培养基进行培养获得。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述种子先用乙醇溶液消毒50～70s，再用hgcl2溶液消毒6～8min；所述乙醇溶液的体积分数为70～80％，所述hgcl2溶液的浓度为0.08～0.12％。

技术总结
本发明提供了一种紫花苜蓿的组培繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。本发明以新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州的野生苜蓿无菌苗的下胚轴为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上进行培养获得愈伤组织，然后诱导愈伤组织生芽，将已经分化培养得到的丛生芽上的不定芽分离下来，接种到生根培养基上培养，得到再生成苗，再进行炼苗和移栽，得到紫花苜蓿苗。本发明通过优化愈伤诱导培养基、生芽诱导培养基和生根培养基，提高愈伤组织培养率、生芽诱导率、生根诱导率以及炼苗移栽成活率，为新疆维吾尔自治区紫花苜蓿的组培繁殖提供了技术基础。

技术研发人员：谢全亮,李鸿彬,王家荫,何欢,孟状,杜萍萍,张力于,刘乐乐,高慧鑫,王丽丽,杨璐,田超,古雪琴
受保护的技术使用者：石河子大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5