一种茶树叶片不定芽诱导方法

本发明涉及一种茶树的培育方法，尤其涉及一种茶树叶片不定芽诱导方法。

背景技术：

1、茶树(camellia sinensis(l.)o.kuntze)属山茶科，是重要的非酒精饮料作物之一(张广辉,吕才有,段红星.茶树离体植株再生与遗传转化[j].分子植物育种,2010,8(02):345-349)，具有降低心血管风险、调节代谢综合征和延缓衰老等健康功效。中国茶叶栽培面积和茶叶产量均位居世界第一，主要产区分布在中国云南、福建、湖北、四川、贵州、浙江等省。茶树为多年生异花授粉的木本植物，存在生育周期长、远缘杂交困难、自交不亲和、人工授粉成功率低、花期短等问题(mondal t.k.,bhattacharya a.,laxmikumaran m.,and ahuja p.s.,2004,recent advances of tea(camellia sinensis)biotechnology,plant cell,tissue and organ culture,76(3):195-254)，严重制约了茶树优质资源的利用，限制了茶树的育种进程，难以在短期内培育出高产优质的茶树品种。

2、组织培养的无性繁殖已成为茶树优质种苗生产的重要技术手段。目前，茶树离体再生多以种子和枝条为外植体，外植体来源受季节和环境的限制，且大部分茶树品种仍然存在外植体材料褐化、再生效率低和遗传稳定性差等问题，难以大量推广应用(张陆玉,李婧,胡新龙,郭飞,赵华,王郁,王璞,倪德江,陈玉琼,王明乐.中国茶树组织培养研究进展[j/ol].分子植物育种:1-14[2022-12-19])。茶树叶片是一种极易获取、数量丰富的外植体，但由于其高度分化导致茶树叶片再生极其困难。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于如何通过茶树叶片为外植体形成茶树离体体系。

2、本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：

3、本发明提供了一种茶树叶片不定芽诱导方法，包括以下步骤：

4、(1)愈伤组织诱导：选取茶树无菌叶片，以ms为基本培养基，添加0.1-0.5mg/l6-ba与1-5mg/l naa，光照培养。

5、(2)不定芽诱导：将(1)获得的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基上，所述不定芽诱导培养为ms基本培养基，添加2-3mg/l 6-ba和0.1-0.6mg/l naa，光照培养。

6、有益效果：本发明提供的一种茶树叶片不定芽诱导到形成完整植株的方法，以茶树无菌叶片为起始外植体，培养条件配合适宜的激素配方，诱导茶树叶片产生愈伤组织，并进一步诱导不定芽，且一个外植体诱导出不定芽的平均数量＞20个。本发明的方法解决了茶树叶片离体再生困难的问题，为开展茶树遗传转化、新品种培育和优质种苗繁育等方面的研究提供技术支撑。本发明以茶树无菌叶片为起始外植体，比使用茶树茎段为外植体更容易获得更多的实验材料，节省了成本。

7、优选的，所述步骤(1)中叶片切成1cm×1cm大小。

8、优选的，所述步骤(1)光照培养的时间为6周。

9、优选的，所述步骤(2)光照时间为6-8周。

10、优选的，所述步骤(1)添加0.3-0.5mg/l 6-ba与3-5mg/l naa。

11、优选的，所述步骤(2)添加3mg/l 6-ba与0.3mg/l naa。

12、优选的，所述步骤(1)和(2)中ms培养基中添加蔗糖30g/l，肌醇0.1g/l，琼脂粉5.5g/l，调节培养基ph值为5.5。

13、优选的，所述培养条件为25±2℃，光照强度36-48μmol·m-2·s-1，光照16h/d。

14、本发明的优点在于：

15、本发明提供的一种茶树叶片不定芽诱导到形成完整植株的方法，以茶树无菌叶片为起始外植体，培养条件配合适宜的激素配方，诱导茶树叶片产生愈伤组织，并进一步诱导不定芽，且一个外植体诱导出不定芽的平均数量＞20个。本发明的方法解决了茶树叶片离体再生困难的问题，为开展茶树遗传转化、新品种培育和优质种苗繁育等方面的研究提供技术支撑。本发明以茶树无菌叶片为起始外植体，比使用茶树茎段为外植体更容易获得更多的实验材料，节省了成本。

技术特征：

1.一种茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)光照培养的时间为6周。

3.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)光照时间为6-8周。

4.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)添加0.3-0.5mg/l 6-ba与3-5mg/l naa。

5.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)添加3mg/l 6-ba与0.3mg/l naa。

6.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)和(2)中ms培养基中添加蔗糖30g/l，肌醇0.1g/l，琼脂粉5.5g/l，调节培养基ph值为5.5。

7.根据权利要求6所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述培养条件为25±2℃，光照强度36-48μmol·m-2·s-1，光照16h/d。

8.根据权利要求1所述的茶树叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述步骤(1)中叶片切成1cm×1cm大小。

技术总结
本发明提供了一种茶树叶片不定芽诱导方法，包括以下步骤：愈伤组织诱导：选取茶树无菌叶片，以MS为基本培养基，添加0.1‑0.5mg/L 6‑BA与1‑5mg/L NAA，光照培养。不定芽诱导：将获得的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基上，所述不定芽诱导培养为MS基本培养基，添加2‑3mg/L 6‑BA和0.1‑0.6mg/L NAA，光照培养。本发明提供的一种茶树叶片不定芽诱导到形成完整植株的方法，以茶树无菌叶片为起始外植体，培养条件配合适宜的激素配方，诱导茶树叶片产生愈伤组织，并进一步诱导不定芽，且一个外植体诱导出不定芽的平均数量＞20个。

技术研发人员：任露露,韦朝领,朱木兰,王静娴,张照亮,宛晓春
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19