一种米老排子叶节再生方法

本发明属于林木遗传育种，具体涉及一种米老排子叶节再生方法。

背景技术：

1、米老排(mytilaria laosensis)别名壳菜果、三角枫、山油桐等，为金缕梅科(hamamelidaceae)壳菜果属(mytilaria)的常绿阔叶乔木，米老排是优良的速生树种，有重要的商业价值，且是油脂和饲料的来源，具有广泛的开发与应用前景，市场潜力巨大。米老排需求范围的扩大，迫切需求优质的米老排品种和高效稳定的快速繁殖体系。

2、关于米老排组织培养，目前仅有茎段快繁一种方式(刘振湘，2020；孙旭高等，2023)，茎段快繁污染率和褐化率较高，存活率较低，体系不稳定，这并不能实现大面积高效繁殖米老排。因此，为实现米老排的大面积繁殖，构建一种污染率和褐化率低、存活率高、稳定的米老排再生体系显得极为重要。

技术实现思路

1、本发明的一种米老排子叶再生方法，包括如下步骤：

2、s1.采收成熟的米老排种子，并在通风处阴干；

3、s2.将种子去种皮，用洗洁精清洗2min，流水下冲洗30min，用体积分数75％的乙醇水溶液浸泡1min，无菌水洗3次，用质量分数7.5％的次氯酸钠水溶液浸泡15-25min，无菌水震荡清洗3～5次；

4、s3.将经过步骤s2消毒后的种子点播于ph为5.9±0.1的ms培养基中，培养成无菌种子苗；

5、s4.取无菌种子苗的子叶节作为外植体，接入芽诱导培养基中诱导不定芽；所述的芽诱导培养基为添加3.0-9.0mg/l 6-ba和0.5-1.0mg/l iba的ms培养基，ph为5.9±0.1；

6、s5.取不定芽于生根培养基中诱导生根，形成生根苗后进行炼苗与移栽；所述的生根培养基为添加0.1mg/l iba的ms培养基，ph为5.9±0.1。

7、优选，所述的方法的培养条件为：光照强度为2500lx，光照时长为12h/d，温度为25±2℃。

8、优选，所述的采收成熟的米老排种子为采收成熟未开裂的米老排果实，晾干果实至开裂后收集种子。

9、优选，所述的步骤s2中的用质量分数7.5％的次氯酸钠水溶液浸泡为用质量分数7.5％的次氯酸钠水溶液浸泡20min。

10、优选，所述的步骤s4中的无菌种子苗为长出第一片真叶时的无菌种子苗。

11、优选，所述的步骤s4中的芽诱导培养基为添加6.0mg/l 6-ba和0.5mg/l iba的ms培养基，ph为5.9±0.1。

12、优选，所述的步骤s5中的不定芽为长为2cm以上的不定芽。

13、优选，所述的步骤s5中的生根苗为根长为2cm以上的生根苗。

14、优选，所述的步骤s5中的炼苗与移栽包括如下步骤：把培养生根苗的瓶子的瓶盖拧松，加入无菌水半敞口培养3d后，将生根苗移出，流水下冲洗生根苗基部培养基，然后将生根苗移栽到基质中，并在不遮光的条件下进行保湿，一周后在自然光照下培养。

15、优选，所述的基质是由基质土与珍珠岩按照体积比3∶1混合而成的基质。

16、本发明的有益效果：

17、本发明采用米老排无菌种子苗的子叶节作为外植体，取材方便，不受季节和天气影响，能克服污染率和褐化率高的问题，本发明方法的污染率仅为6.67％-10.00％，且子叶节再生潜力大，以此构建的再生方法十分稳定，可为促进米老排无性系林业发展提供技术支撑。

技术特征：

1.一种米老排子叶节再生方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法的培养条件为：光照强度为2500lx，光照时长为12h/d，温度为25±2℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s1中的采收成熟的米老排种子为采收成熟未开裂的米老排果实，晾干果实至开裂后收集种子。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s2中的用质量分数7.5％的次氯酸钠水溶液浸泡为用质量分数7.5％的次氯酸钠水溶液浸泡20min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s4中的无菌种子苗为长出第一片真叶时的无菌种子苗。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s4中的芽诱导培养基为添加6.0mg/l6-ba和0.5mg/liba的ms培养基，ph为5.9±0.1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s5中的不定芽为长为2cm以上的不定芽。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s5中的生根苗为根长为2cm以上的生根苗。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s5中的炼苗与移栽包括如下步骤：把培养生根苗的瓶子的瓶盖拧松，加入无菌水半敞口培养3d后，将生根苗移出，流水下冲洗生根苗基部培养基，然后将生根苗移栽到基质中，并在不遮光的条件下进行保湿，一周后在自然光照下培养。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的基质是由基质土与珍珠岩按照体积比3∶1混合而成的基质。

技术总结
本发明公开了一种米老排子叶节再生方法，以米老排种子作为材料，通过优化种子消毒方法、芽诱导培养基以及生根培养基，构建一套稳定的米老排再生体系。本发明优化后的消毒方法为75％乙醇水溶液浸泡1min和7.5％次氯酸钠水溶液浸泡15‑25min，芽诱导培养基为添加6.0mg/L 6‑BA和0.5‑1.0mg/L IBA的MS培养基，生根培养基为添加0.1mg/L IBA的MS培养基。本发明构建的再生方法十分稳定，可为促进米老排无性系林业发展提供技术支撑。

技术研发人员：杨贺月,张俊杰,章灵慧,郑梦霞,杨恩点,杨智添,周果
受保护的技术使用者：华南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17