加入5 μ L的质膜蛋白，混匀，然后加入200 μ L的Bradford溶液，室温静置10分钟，在0D595波长下检测蛋白浓度,计算50 μ g质膜蛋白对应的体积。
[0013]2、PM H+-ATPase活性测定步骤如下:
(1)PMH+- ATPase活性的测定在0.5 mL的反应体系中进行的；反应体系包含50mmol/L BTP/MES、5 mmol/L MgSO4,50 mmol/L KC1、0.02% 十二烷基聚乙二醇醚(w/v)、50 mmol/L KNO3> I mmol/L (NH4)2Mo04> I mmol/L NaN3>4 mmol/L ATP-Na2,加入 50 μ g 的质膜蛋白提取液后启动反应；
(2)将反应混合物置于37°C水浴30min后立即冰浴，加入反应终止液Iml2% H2SO4 (v/V)，5% SDS (w/v)和 0.7 % (NH4)2MoO4 (w/v)后，立即加入 50 μ L 10% Vc (w/v)显色液于室温下放置40min，测定波长为700nm处的吸光值。以相同条件下煮沸30分钟后失去活性的酶蛋白为空白对照。
[0014](3)根据标准曲线计算出不同IAA浓度喷施的蚕豆叶片PM H+-ATPase活性(图1)。
[0015]3、H+ -泵活性测定步骤如下:
(1)1.5ml 反应体系中含有 5 mmol/L BTP/MES (pH 6.0) ,12 μ mol/L A0、300 mmol/LKCl>250 mmol/L 鹿糖、0.5 mmol/L EGTA (使用 BTP 调 pH 至 6.0)、I mmol/L NaN3> I mmol /L Na2MoO4>50 mmol/L KN03、0.05%十二烧基聚乙二醇醚(w/v)和100 Ug质膜蛋白；添加去垢剂十二烧基聚乙二醇醚使原位膜翻转，反应混合液在室温下放置20 min后,加入5 mmol/L ATP - BTP (pH = 6.0)混合液以启动反应；
(2)以反应液调零对照，每分钟记录一次OD值，测定吖啶橙在492nm处8分钟内吸光值猝灭速率，通过猝灭速率反映不同IAA喷施浓度的蚕豆叶片细胞膜囊体泵出H+的能力，即H+-泵活性(图2)。
[0016]从图1可以看出，喷施不同浓度的IAA后，蚕豆叶片的PM H+-ATP酶活性和对照组相比均有不同程度的恢复，20 μ mol/L IAA处理组对PM H+-ATP酶活性恢复最强。从图
2可知，喷施不同浓度的IAA后，蚕豆叶片的H+ -泵和对照组相比也有不同程度的恢复，20 μ mol/L IAA处理组H+ -泵活性恢复最强。PM H+-ATP酶和H+ -泵是植物气孔开放活动中的重要调节因子，其活性增强有助于气孔开度或导度的增加，从而促进气孔开放。
[0017]实施例3:叶片气孔开度和导度测定
取实施例1第3步中处理了 I小时的叶片，撕取下表皮，置于盖玻片上，滴加一滴生理盐水，盖上盖玻片，于中倍镜下观察并测量气孔开度，每个浓度随机测量40个，取平均值(图3A)。气孔导度用yaxin-1301植物气孔计(北京雅欣理仪科技有限公司)进行测量，每个处理浓度测量三次，取平均值(图3B)。
[0018]从图3A和图3B看，不同浓度IAA喷施后蚕豆叶片气孔开度和导度都有不同程度的恢复，但20 μ mol/L IAA对蚕豆叶片气孔开度和导度的恢复程度最大。
[0019]实施例4:根据PM H+-ATP酶活性、H+ -泵活性以及气孔开度和导度的测定结果筛选出20 μ mol/L为IAA喷施的最佳浓度。以20 μ mol/L IAA处理液对蚕豆植株进行实施例I第3步的处理，在甲醛胁迫I小时后开始记录密封仓空气中剩余甲醛浓度(图5)，10分钟记录一次，连续记录2小时，并测定气孔开度(图4A)和导度(图4B)。
[0020]从图4、5可以看到，由于喷施20 μ mol/L IAA,蚕豆叶片气孔开度和导度明显提高，密封仓空气中甲醛浓度下降速度与没有喷施IAA相比，明显加快，这说明蚕豆叶片喷施20 μ mol/L IAA后吸收甲醛能力明显提高。
[0021]实施例5:为了验证20 μ mol/L IAA在植物对真实室内环境中气体甲醛污染的净化能力的促进作用，用20 μ mol/L的IAA处理液喷施蚕豆叶片下表皮，以下表皮布满水珠而不滴下为每张叶片的喷施量，待IAA处理液处理时间8小时后，将蚕豆放入释放气体甲醛日平均浓度为4mg/m3的旧家具柜中，家具柜三面由压缩板材(59' 4(T 48cm)、一面由玻璃门构成，将长有蚕豆植株的花盆放入柜内后封闭柜门，胁迫处理24h、48h和72h，每个处理设置三个重复，以水喷施叶片下表皮并放在柜内和柜外的蚕豆植株为对照。控制柜内和柜外的光照、温度和相对湿度等条件在相近的水平，光照和黑暗处理时间设定为12h/12h。实验期间昼夜气温变化和花盆密封方法同上。分别于0h、24h、48h、72h测定柜外、柜内(未喷施IAA)和柜内+ IAA (柜内喷施IAA)的植株的PM H+-ATPase活性(图6)。
[0022]从图6可以看到，不同时间柜内喷施了 IAA的蚕豆叶片和未喷施IAA的蚕豆叶片相比，PM H+-ATPase活性都明显得到恢复，而且随着时间增长，恢复得比未受甲醛胁迫的蚕豆叶片PM H+-ATPase活性还高，可见20 μ mol/L的IAA促进PM H+-ATPase活性提高的能力很强。
[0023]实施例6:同实施例5处理，测定0h、24h、48h、72h柜内未喷施IAA和柜内喷施IAA的蚕豆叶片的H+ -泵活性(图7)。
[0024]从图7可看出，不同时间柜内喷施了 IAA的蚕豆叶片和未喷施IAA的蚕豆叶片相t匕，H+ -泵也得到明显得到恢复。说明20ymol/L的IAA对提高H+ -泵活性的能力也很强。
[0025]实施例7:方法同实施例5处理，分别于0h、24h、48h、72h撕取柜内未喷施IAA和柜内喷施IAA的蚕豆叶片下表皮，检测方法同实施例3操作，检测不同时间喷施和未喷施IAA的植株气孔开度(图8A)和导度(图8B)。
[0026]从图8可知，由于气体甲醛胁迫，随着时间延长，蚕豆叶片的气孔开度和导度都迅速下降，但喷施IAA后，不同时间胁迫的蚕豆叶片气孔开度和导度都得到了明显的恢复。由此可知，20 μ mol/L的IAA有助于真实的甲醛污染空气环境中植物叶片气孔开度和导度的提高，从而促进植物吸收甲醛，净化甲醛污染。
【主权项】
1.生长素在提高盆栽植物净化空气甲醛污染中的应用。
【专利摘要】本发明公开了生长素IAA在提高盆栽植物净化空气甲醛污染中的应用；使用时，采用IAA溶液对盆栽蚕豆叶片下表皮进行喷施，8小时后将蚕豆植株分别放入含有14.8 mg/m3和4mg/m3气体甲醛的空气环境中，在14.8 mg/m3甲醛胁迫环境中处理1h及4mg/m3甲醛胁迫环境中处理24h、48h、72h后分别进行叶片生理生化指标的测定；实验结果表明，与对照植株相比，喷施IAA后，在甲醛污染环境中生长的蚕豆叶片的质膜ATP酶活性、H＋-泵活性、气孔开度和导度均升高，这些变化都有助于提高植株气孔开放活动，提高了叶片对甲醛的吸收率，从而加强了植物净化空气甲醛污染的功能。
【IPC分类】B01D53-84, A01G7-06
【公开号】CN104584896
【申请号】CN201410839351
【发明人】陈丽梅, 孙慧群
【申请人】昆明理工大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月30日