具有丛生生长习性的三倍体西瓜植物的制作方法_4

文档序号:8302436阅读:来源:国知局
)从NCMB41907的植物组织获得。
[0079] 如上所述,可以将b等位基因从本文提供的种子保藏物转移到其它西瓜植物中, 由此可以制备其它自交丛生二倍体和/或其它自交丛生四倍体。在一个实施方案中,提供 了包含以保藏号NCMB 41905、NCMB 41906和/或NCMB 41907保藏的种子中的b等位基 因的自交二倍体丛生植物和/或自交四倍体丛生植物。
[0080] 当提及具有丛生生长习性的二倍体或四倍体西瓜植物时,应理解的是,这指与以 上针对三倍体丛生杂交种描述的丛生生长习性特征相同的丛生生长习性特征,即由于存在 2个或4个拷贝的隐性bush等位基因"b"(且缺乏显性B等位基因),该二倍体或四倍体丛 生植物具有不长于约150厘米、140厘米或100厘米的最长蔓藤长度,其中平均植物直径为 约300厘米、280厘米、或200厘米或更小,最长蔓藤上的平均节间长度为约7厘米或更小, 但至少约4. 7厘米,优选至少约5. 0、5. 5、6. O或6. 5厘米。隐性bush等位基因不影响叶片 大小,因此,根据本发明的植物包含与正常生长型二倍体(例如品种Milady)或正常生长型 四倍体类似大小的叶片,即至少约11厘米长和/或至少约15厘米宽,包括叶片长度为至少 约11、12、13、14、15、16或17厘米和/或叶片宽度为至少约15、16、17、18或19厘米。类似 地,(平均)最长蔓藤长度与最长蔓藤上的(平均)节间数量的比率为7或更小。在另一 个方面,二倍体丛生或四倍体丛生植物在最长蔓藤上具有不超过(平均)25、21或15个节 间。并且,在最长蔓藤的中间测得的(平均)茎直径比正常生长型二倍体或四倍体的大,例 如,茎直径为至少约8毫米,优选至少约9毫米以及可以甚至为至少约10毫米、11毫米或 12毫米。因此,根据本发明的二倍体或四倍体丛生植物的平均茎直径优选为至少1. 2倍、 1. 3倍、1. 4倍、1. 5倍或1. 6倍于包含B等位基因的非丛生二倍体或四倍体的平均茎直径。 在一个实施方案中,果实特性(例如平均果实大小、重量等)与正常生长型的二倍体或四倍 体没有不同。
[0081] 在一个实施方案中,可以制备二倍体丛生自交系,其中bush等位基因(b)可以来 源于例如以保藏号NCMB 41906保藏的种子、或来源于其后代(例如通过NCMB 41906自 交和/或其与另一西瓜植物杂交获得所述后代)。这可以例如通过用NCMB 41906或其后 代进行育种,在后代中选择丛生生长型而弃去不具有丛生生长型的植株来实现。bush等位 基因也可以来源于其它包含bush等位基因的植物或植物部分,例如四倍体丛生植物的花 粉或子房,如以NCMB 41905保藏的种子。
[0082] 可选地,可以通过鉴定可能包含bush等位基因但可能不具有丛生生长型(由于存 在显性B等位基因)的二倍体品种或株系,制备新的二倍体丛生自交系。例如,可以使用疑 似可能包含b等位基因的二倍体。可以进行等位性测试来确定是否存在隐性bush等位基 因。优选地,将二倍体自交一代或多代,通过选择具有丛生生长型(由纯合形式的bush等 位基因决定)的后代植物,鉴定bush等位基因纯合的二倍体。可能适合的品种有Garden Baby、Bush Charleston Gray 和 Bush Sugar Baby 或 Sugar Bush。
[0083] 在一个实施方案中,可以制备四倍体丛生自交系,其中bush等位基因可以来源于 例如以保藏号NCMB 41905或NCMB 41906保藏的种子或来源于这些种子之任何的后代。 这可以例如通过以NCMB 41905和/或NCMB 41906或它们的后代进行育种,在后代中选 择丛生生长型而弃去不具有丛生生长型的植株来实现。当使用NCMB 41906或其后代时, 可以使用染色体加倍技术来制备四倍体,然后在四倍体中以及在四倍体的后代(通过自交 所选择的四倍体而获得)中选择丛生生长习性,在进一步后代中稳定丛生生长习性。
[0084] 可选地,可以通过下面的方式制备新的四倍体丛生自交系:从如上所述的新的二 倍体丛生植物开始,将所述二倍体植物自交几代,选择如本文中定义的丛生生长型,对所选 择的自交丛生二倍体株系进行染色体加倍以产生四倍体丛生株系。然后将四倍体株系再自 交几代,选择如本文中所描述的丛生生长型。
[0085] 在一个方面,本发明还提供了物种西瓜(Citrullus Ianatus)的植物(或种子), 其中所述植物为四倍体并具有丛生生长习性。丛生生长习性是由于存在b等位基因,因此, 提供了具有丛生生长习性、包含4个拷贝的称为bush的隐性等位基因的四倍体植物,其中 包含所述b等位基因的种子的代表性样品已经以保藏号NCMB 41905保藏。同样,本发明也 涵盖四倍体丛生植物的任何植物部分和后代,例如无性繁殖体,种子繁殖体(例如自交产 物)和体外细胞或组织培养物,以及花粉,子房等。因此,在一个实施方案中,四倍体丛生植 物或能生长出该植物的种子或该植物的组织或部分(花粉、花药、胚珠)包含NCMB 41905 中的b等位基因。
[0086] 因此,在一个方面,提供了物种西瓜(Citrullus Ianatus)的植物,其中所述植物 是四倍体,具有丛生生长习性,且包含4个拷贝的称为bush的隐性等位基因,其中bush等 位基因(可获自)可以通过将产生NCMB41906或NCMB41905保藏种子的西瓜植物,或这 些植物之任何的后代(例如,通过自交和/或杂交获得的),与另一西瓜植物杂交而获得。
[0087] 在另一个方面,提供了物种西瓜(Citrullus Ianatus)的植物,其中所述植物是四 倍体、具有丛生生长习性,且包含4个拷贝的称为bush的隐性等位基因,其中所述植物通过 将如下四倍体植物自交而获得,所述四倍体植物的种子的代表性样品以保藏号NCIMB41905 保藏。
[0088] 无性繁殖的具有丛生生长习性的四倍体西瓜植物也是本发明的实施方案。在一个 方面,该西瓜植物具有以保藏号NCMB41907、NCMB41906或NCMB41905保藏的种子中的 bush等位基因。在一个方面,无性繁殖的西瓜植物(可以)从NCMB41905的植物细胞或植 物组织获得。
[0089] 在一个方面,提供了物种西瓜(Citrullus Ianatus)的植物,其中所述植物是四倍 体、具有丛生生长习性,且包含4个拷贝的称为bush的隐性等位基因,其中所述植物(可 以)通过将产生以保藏号NCMB41905保藏的种子的西瓜植物的植物细胞或组织进行无性 繁殖而获得。
[0090] 在另一个实施方案中,四倍体丛生植物包含从其它如上所述的二倍体来源鉴定 的、或存在于保藏号NCMB41906保藏的种子中的b等位基因。
[0091] 本发明提供用于产生具有丛生生长型的四倍体自交植物的方法,包括以下步骤:
[0092] a)提供包含b等位基因的二倍体植物,
[0093] b)将所述二倍体植物自交几代,产生具有丛生生长型的自交系,
[0094] c)加倍所述自交系的染色体,产生四倍体株系,
[0095] d)将四倍体株系自交几代。
[0096] 因此,在步骤a)中,二倍体植物可以是来源于以保藏号NCMB41906保藏的种子的 植物或其后代,或可以是通过杂交和选择丛生生长型而已经转入了种子保藏物NCMB41906 的b等位基因的二倍体植物。二倍体也可以是新的二倍体植物,其中的b等位基因已经得 到了鉴定,例如通过使用等位性测试,和/或通过鉴别可能包含b等位基因的二倍体、自交 所述植物一或多代和从表型上选择具有丛生生长型的后代植物,而鉴定。可选地,二倍体可 以是从以NCMB41905保藏的种子产生的单倍体植物。
[0097] 本发明还提供了根据本发明的四倍体丛生植物作为父本或母本的用途,由此可以 使该四倍体丛生植物与另一西瓜植物杂交或使其自交以生产后代。在一个实施方案中,由 于存在4个拷贝的b等位基因,四倍体丛生植物包含丛生生长型,其中该丛生植物(和/或 b等位基因)可从以NCMB41905保藏的种子或其后代获得。
[0098] 此外,本发明提供了四倍体丛生植物作为母本的用途,特别是作为母本用于生产 杂交种三倍体西瓜种子(即生产Fl种子)的用途。因此,在一个方面,四倍体丛生植物的 雌花以另一西瓜植物的花粉授粉(或允许其被授粉)。所述其它西瓜植物可以是任何西瓜 植物,例如二倍体或四倍体西瓜植物。在一个特定的实施方案中,其它西瓜植物是二倍体植 物,优选包含丛生生长型的二倍体植物。包含丛生生长型的二倍体西瓜植物可以是如上所 述的任何二倍体丛生植物,或是可从NCMB 41906保藏种子获得的植物,或其后代。
[0099] 本发明也提供了用于生产三倍体杂交种西瓜种子的方法,其中从这样的种子生长 出的三倍体植物具有丛生生长习性,所述方法包括:
[0100] (a)提供具有丛生生长习性的二倍体西瓜植物和具有丛生生长习性的四倍体植 物;
[0101] (b)以二倍体丛生植物的花粉对四倍体丛生植物的雌蕊花(pistillate flower) 进行授粉,以及
[0102] (C)收获四倍体丛生植物的果实中产生的种子,以及可选地
[0103] (d)干燥所收获的种子。
[0104] 可选地,然后对干燥的和收获的Fl种子进行包装。可以在包装前对其进行处理。 因此包含通过上述方法获得的种子或由其组成的包装物或容器是本发明的实施方案。
[0105] 本发明方法也图示于图1中。可以如本文中其它地方描述的,提供四倍体丛生植 物和二倍体丛生植物。可以将它们间种以允许授粉发生。因此,步骤a)中两种植物的种子 或幼苗以互相邻近的方式种植和生长。如果二倍体丛生植物和四倍体丛生植物不同时开 花,可以将开花较晚的植物较早种植或播种,以使它们约同时开花。由于二倍体植物和四倍 体植物都具有丛生生长习性,与涉及正常生长型四倍体的三倍体杂交种种子的生产相比, 可以每公顷播种或种植更多的植物。
[0106] 可以在隔离区手工或通过昆虫(例如蜜蜂)进行授粉。为了保证来自雄性二倍体 的花粉对四倍体雌花的授粉,可以采用不同的方法,例如手工收集雄花,对雌花手工授粉, 然后覆盖经授粉的花。可选地,去除四倍体植物上生长的所有雄(雄蕊)花,以保证二倍 体丛生植物的二倍体花粉对四倍体丛生植物上的雌花的授粉。当四倍体植物上的果实成 熟时,对其进行收获,收集三倍体Fl杂交种种子(来自杂交授粉)。可以将这些种子分拣 (例如按大小)、干燥、可选地对其进行处理、和包装以进行销售。在一个实施方案中,可以 从NCMB 41905保藏的种子或其后代或无性繁殖体获得四倍体丛生母本(和/或b等位基 因)。在另一个实施方案中,可以从NCIMB 41906保藏的种子或其后代或无性繁殖体获得二 倍体丛生父本(和/或b等位基因)。
[0107] 因此,本发明也提供通过上述方法获得的种子,即Fl杂交种的种子,该种子生长 后,产生具有丛生生长习
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