古侧柏扦插繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及古侧柏扦插繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 侧柏在我国栽培历史悠久，寿命长达几百年、甚至几千年的古侧柏在全国许多地 区均有分布，随着古树年龄增长其体内外受到的胁迫逐渐增加，千年侧柏尤其是3000年以 上的侧柏现已进入高龄期，树势十分衰弱，如何有效地克隆繁殖高龄侧柏，使之生命永续、 价值彰显，成为全球华人普遍关注的问题，也成为地方林业部门亟需解决的问题。树龄越 大，生根愈困难从国内外进展来看，目前在几百年古树的扦插繁殖方面已有一些研宄，例 如，600年银杏扦插生根率为8 % -25%。树龄为300年、500年以及600年的东北红豆杉为 材料进行扦插时发现，随着插穗母树树龄、枝条年龄的增加，插穗生根率呈现降低趋势。此 外对1300年左右的银杏和槐树的扦插繁殖也有报道，但是古槐树扦插没有成活。据美国 《纽约时报》报道，从4600岁的狐尾松（Bristleconepine)切穗栽植后却没有成活，超过 1000年的侧柏古树的成功扦插繁殖仍是空白。
[0003] 树龄越大，越难生根，影响扦插繁殖的内因有：年龄效应、位置效应、群体和个体再 生能力的差异等，影响扦插扩繁的外因主要有生长调节剂种类及其浓度、基质、光照、温湿 度等。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供一种古侧柏扦插繁殖方法。
[0005] 本发明提供的方法，包括如下步骤A:
[0006] 将来源于古侧柏的插穗依次用高锰酸钾、木质素酸钠和激素处理，得到处理后的 插穗；将所述处理后的插穗在基质中扦插，培育至生根，实现古侧柏扦插繁殖。
[0007] 古侧柏为树龄大于100年的侧柏。
[0008] 上述方法中，所述将来源于古侧柏的插穗依次用高锰酸钾、木质素酸钠和激素处 理的方法包括如下步骤：
[0009] 1)将来源于古侧柏的插穗在高锰酸钾水溶液中浸泡，得到高锰酸钾处理后插穗；
[0010] 2)将所述高锰酸钾处理后插穗在木质素酸钠水溶液中浸泡，得到木质素酸钠处理 后插糖；
[0011] 3)将所述木质素酸钠处理后插穗在激素溶液中浸泡，得到处理后的插穗。
[0012] 上述方法中，所述激素为NAA和IBA;
[0013] 所述激素溶液由溶质和溶剂组成，所述溶质为NAA和IBA。
[0014] 所述激素溶液制备方法：将激素用少量乙醇溶解后，再与水混合得到激素溶液。
[0015] 上述方法中，所述高锰酸钾水溶液中的高锰酸钾质量百分含量为0. 05% ;
[0016] 所述木质素酸钠水溶液中的木质素酸浓度为500-2000mg.I71;
[0017] 所述激素溶液中NAA和IBA浓度均为600-4000mg.L'
[0018] 上述方法中，所述古侧柏及其对应的木质素酸钠和激素浓度如下1)_4)中任一 个：
[0019] 1)所述古侧柏的树龄为100年或300年或3000年，来源于所述来源于古侧柏的插 穗对应的所述木质素酸钠水溶液中的木质素酸浓度为2000mg.I71;来源于所述来源于古侧 柏的插穗对应的所述激素溶液中NAA和IBA浓度均为lOOOmg.I71;
[0020] 2)所述古侧柏的树龄为700,来源于所述来源于古侧柏的插穗对应的所述木质素 酸钠水溶液中的木质素酸浓度为500mg.I/1;来源于所述来源于古侧柏的插穗对应的所述 激素溶液中NAA和IBA浓度均为600mg.L-1。
[0021] 上述方法中，步骤2)中，来源于树龄为100年或300年或3000年古侧柏的插穗在 木质素酸浓度为2000mg.I71的木质素酸钠水溶液中浸泡lmin，
[0022] 来源于树龄为700年古侧柏的插穗在500mg.I71的木质素酸钠水溶液中浸泡2h，
[0023] 步骤3)中，来源于树龄为100年或300年或3000年古侧柏的插穗在NAA和IBA 浓度均为l〇〇〇mg.I71的激素溶液中浸泡lmin;
[0024] 来源于树龄为700年古侧柏的插穗在600mg.I71的溶质为NAA和IBA的激素溶液 中浸泡lh。
[0025] 上述方法中，所述来源于古侧柏的插穗为所述古侧柏树冠阳面上部（树冠上部二 分之一至四分之三位置）1-3年生枝。
[0026] 上述方法中，所述培育中对所述插穗进行消毒，所述消毒采用的灭菌剂为甲 基-1H-2-苯并咪唑氨基甲酸酯、甲基硫菌灵、代森锰锌、波尔多液、甲基硫菌灵?锰锌和福 美锌这6种中至少两种。
[0027] 上述消毒方式为6种轮换使用。
[0028] 本发明的另一个目的是提供一种培育古侧柏扦插苗的方法。
[0029] 本发明提供的方法，包括上述扦插方法中的所述步骤A
[0030] 古侧柏的树龄为100年或300年或700年或3000年。
[0031] 本发明的实验证明，本研宄充分利用不同年龄的侧柏，通过综合开展扦插繁殖相 关技术研宄，经过近两年探索，初步攻克了扦插繁殖技术难题，摸索了一套侧柏古树的扦插 繁殖体系，并获取了 3000年侧柏扦插克隆苗11株。此研宄不仅为保护和克隆繁殖侧柏古 树奠定了基础，为其他古树无性繁殖提供了方向。
[0032] 古树克隆繁殖体系对古树优良基因保存、栽培技术成果转让、技术咨询与培训等 方面将会创造很大的经济效益。保留下来的古树优良基因用于枣树、茶树等植物的育种和 遗传改良及推广又能给林农业带来了巨大的经济效益。古树都有着深厚文化的背景，如黄 帝陵的轩辕柏被英国人称为"世界柏树之父"，古树克隆繁殖能保存古树的完整基因，避免 森林文化和旅游文化遗产消失，意义重大。
【附图说明】
[0033] 图1为不同部位插穗生根率。
[0034] 图2为抑制物清除后插穗愈伤诱导率。
[0035] 图3为抑制物清除后插穗生根率。
【具体实施方式】
[0036] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0037] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0038] 下述实施例中扦插的方法如下：
[0039] (一）插穗采取
[0040] 2013-2014年剪取以5年生侧柏为对照、采取天坛公园100年、300年、700年的侧 柏和约3000年生侧柏（陕西黄帝陵轩辕柏）树冠南部中下部3年生枝条上第一轮分生的、 选择生长健壮、无病虫害的枝条（为插穗），用湿纸包住切口，喷洒水，泡沫箱带回。
[0041] (二）插穗制备与处理
[004