一种aa(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种AA(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。更具体地说是一种包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、启封使用等五个步骤，以期获得不同批次和批次之间误差极小的培养基质、减少试验误差的方法。
【背景技术】
[0002]植物组织培养技术或无土栽培技术通常需要配制培养基母液，即配制扩大一定倍数、含有各种类型试剂的液体。然而，由于母液含有不同类型试剂，常常分为大量元素、微量元素、铁盐和有机元素四大类，而四大类所扩大的倍数不同，导致药品使用质量不一致，一则容易出现计算误差；二则药品的厂家、质量不一致，即使计算、称量一致，也会影响试验结果；三则由于母液为液体状态，在春夏之交季节，由于气温上升以及湿度增大，极其容易导致母液感染细菌、霉菌，导致母液中呈现不同颜色或出现沉淀的现象，浪费了原料；四则会因称量者对容器刻度的认知(尤其是微量元素)、仪器精密度的不同而出现较大误差。
[0003]鉴于母液配制的上述缺点，用常规的母液配制培养基，常常会出现因称量者、药品、季节等因素而导致的试验结果失败或无法重复的现象，极大的影响了运用植物组织培养或无土栽培技术开展试验的进程，打击了试验者的信心。
【发明内容】
[0004]一种AA (含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、启封使用等五个步骤。
[0005]根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的五个步骤具体操作如下:
①准确计算:将AA(含碳源和固定介质)固体基本基所含的20种元素扩大1000倍，即二水氯化钙440g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，氯化钾2940g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，二水钥酸钠0.25g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，六水氯化钴和五水硫酸铜各0.025g,乙二胺四乙酸钠铁36.5g,肌醇10g,盐酸硫胺素0.5g,甘氨酸75g, L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g ；
②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.025g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照六水氯化钴、五水硫酸铜、二水钥酸钠、盐酸硫胺素、碘化钾、硼酸、七水硫酸锌、四水硫酸锰、乙二胺四乙酸钠铁、甘氨酸、肌醇、磷酸二氢钾、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸镁、二水氯化钙、L-谷氨酰胺、氯化钾、琼脂粉、绵白糖的顺序混合均匀，共计40541.23g ；
④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述基质40.54g，加热待其完全溶解后，加入其它所需试剂即可。
[0006]本发明的有益效果:不同批次的基质之间无计算误差；由于所有试剂都扩大了1000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小；理论上，由于每次为1000倍的使用量(以每次IL计算)，即可以配制1000L的上述配方，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
[0007]【具体实施方式】:
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
[0008]本实施例中一种AA(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、启封使用等五个步骤。
[0009]上述五个步骤具体操作如下:
①准确计算:将AA(含碳源和固定介质)固体基本基所含的20种元素扩大1000倍，即二水氯化钙440g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，氯化钾2940g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，二水钥酸钠0.25g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，六水氯化钴和五水硫酸铜各0.025g,乙二胺四乙酸钠铁36.5g,肌醇10g,盐酸硫胺素0.5g,甘氨酸75g, L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g ；
②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.025g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照六水氯化钴、五水硫酸铜、二水钥酸钠、盐酸硫胺素、碘化钾、硼酸、七水硫酸锌、四水硫酸锰、乙二胺四乙酸钠铁、甘氨酸、肌醇、磷酸二氢钾、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸镁、二水氯化钙、L-谷氨酰胺、氯化钾、琼脂粉、绵白糖的顺序混合均匀，共计40541.23g ；
④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述基质40.54g，加热待其完全溶解后。
[0010]将上述基质配制后的IL溶液加入Iml的IN的Κ0Η，分装于30个200ml的玻璃瓶中，121°C灭菌20min后。于超净工作台上接种红叶石楠愈伤组织，25°C黑暗条件下培养30d后，愈伤组织分散且生长良好，呈乳黄色。
【主权项】
1.一种AA(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、启封使用等五个步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的五个步骤具体操作如下: ①准确计算:将AA(含碳源和固定介质)固体基本基所含的20种元素扩大1000倍，即二水氯化钙440g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，氯化钾2940g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，二水钥酸钠0.25g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，六水氯化钴和五水硫酸铜各0.025g,乙二胺四乙酸钠铁36.5g,肌醇10g,盐酸硫胺素0.5g,甘氨酸75g, L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g ； ②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.025g的六水氯化钴和五水硫酸铜； ③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照六水氯化钴、五水硫酸铜、二水钥酸钠、盐酸硫胺素、碘化钾、硼酸、七水硫酸锌、四水硫酸锰、乙二胺四乙酸钠铁、甘氨酸、肌醇、磷酸二氢钾、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸镁、二水氯化钙、L-谷氨酰胺、氯化钾、琼脂粉、绵白糖的顺序混合均匀，共计40541.23g ； ④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封； ⑤启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述基质40.54g，加热待其完全溶解后，加入其它所需试剂即可。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于所有试剂都扩大了 1000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小；理论上，由于每次为1000倍的使用量(以每次IL计算)，即可以配制1000L的上述配方，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
【专利摘要】本发明公开了一种AA(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。首先计算培养基质所含的20种元素扩大1000倍后的需求量；准确称取扩大后的药品量，其中的CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O需要用万分之一天平准确称量；将上述20种元素按照需求量的少多进行先后混合、密封；根据需要分别进行启封使用。通过该方法可制备出扩大了1000倍的AA(含碳源和固定介质)固体培养基，具有操作方便、快速、应用简单、不同批次以及批次内误差小的特点，且避免了AA液体培养基制取时由于人为操作以及外界因素影响导致出现误差大、沉淀、发霉等现象，可运用于植物组织培养等生物技术用途。
【IPC分类】A01G31-00, A01H4-00
【公开号】CN104642133
【申请号】CN201510082265
【发明人】何克勤, 胡能兵
【申请人】安徽科技学院
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月16日